SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株的构建及筛选

目的:构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株,为研究SLC7A11基因的表达沉默对肝癌发生发展的影响奠定基础。方法:针对SLC7A11基因的不同部位合成3个siRNA的寡核苷酸片段,分别将其克隆到真核表达载体p GPU6/GFP/Neo中。利用脂质体转染法分别将质粒导入肝癌LM3细胞,24小时后观察细胞内GFP表达情况,并通过real-time PCR及Western blot的方法比较各组细胞SLC7A11基因mRNA和蛋白的表达水平,然后用G418对转染细胞进行筛选培养。结果:经酶切分析及测序验证,成功构建了靶向沉默SLC7A11基因的真核表达质粒p GPU6-SLC7A11-siRNA;通过real-time PCR及Western blot的方法验证,成功筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌LM3细胞株。结论:成功构建并筛选出SLC7A11基因表达沉默的肝癌细胞株,为进一步研究SLC7A11基因表达沉默对肝癌细胞发生发展的影响奠定了基础。     

深圳市汉族人群转化生长因子β1基因位点多态性与结核病的相关性研究

目的 检测深圳市汉族人群TGF β1基因rs4803455位点单核苷酸多态性（SNP）的基因类型,探讨其基因多态性与不同临床表现的结核病之间的关系。
方法 采用基于TaqMan探针技术的实时荧光PCR法,检测373例结核病患者（结核组）和350名健康人（对照组）TGF β1基因rs4803455位点的等位基因型并分层分析,然后观察结核组中有病理学或者细菌学证据的肺结核患者（肺结核组）和结核性胸膜炎患者（结核性胸膜炎组）等位基因频率差异。 结果 rs4803455位点等位基因C/A频率在结核组373例A为31.8%（237/746）,C为68.2%（509/746）;对照组350名A为40.6%（284/700）,C为59.4%（416/700）;两组间差异有统计学意义（χ²=12.139,OR=1.466,95%CI=1.182～1.819,P=0.000）。年龄≤25岁的结核组121例A为33.5%（81/242）,C为66.5%（161/242）;对照组111名A为41.0%（91/222）,C为59.0%（131/222）;两组间差异无统计学意义（χ²=2.807, OR=1.381,95% CI=0.946～2.015, P=0.094）。年龄＞25岁的结核组252例,A为31.0%（156/504）, C为69.0%（348/504）;对照组239名,A为40.4%（193/478）,C为59.6%(285/478);两组间差异有统计学意义（χ²=9.511,OR=1.511,95%CI=1.162～1.965, P=0.002）。有病理学或者细菌学证据的肺结核组111例,A为32.4%（72/222）,C为67.6%（150/222）;结核性胸膜炎组57例,A为21.1%（24/114）,C为78.9%（90/114）;对照组350名A为40.6%（284/700）,C为59.4%（416/700）;前两组分别与对照组比较,差异均有统计学意义（χ²值分别为4.710、15.879,OR值分别为1.422、2.560,95%CI分别为1.034～1.957、1.592～4.116,P值均<0.05）。等位基因C在肺结核组中的频率［78.9%（90/114）］比在结核性胸膜炎组中的频率［67.6%（150/222）］高。 结论 TGF β1基因rs4803455位点的基因多态性和结核病特别是结核性胸膜炎有关,等位基因C可作为预测结核病特别是结核性胸膜炎的危险因素,其中在年龄＞25岁的患者中预测作用更大。     

h5n1禽流感假病毒体外中和试验技术平台的建立与应用

目的 建立h5n1禽流感假病毒的体外中和试验技术平台,并系统评价2份h5n1人禽流感患者恢复期血清的中和效价.方法 通过磷酸钙沉淀法将转移载体phr-luc、包装载体pcmv△8.2和包膜载体cmv/r-sz(或cmv/r-th)共转染人胚肾细胞(293t),72 h后收集假病毒上清液,免疫印迹(western blot)鉴定假病毒颗粒ha、p24蛋白的表达,并取200μl假病毒上清液测定感染活性.收集制备假病毒过程中整合ha蛋白的293t细胞,通过流式细胞术测定2份恢复期血清中的ha抗体.利用2份恢复期血清分别与深圳株和泰国株假病毒进行中和试验,通过计算ic5o判断不同血清对2株假病毒中和效价的差异.结果 构建的2株假病毒颗粒不仅含有hiv基质蛋白p24,还可以整合ha蛋白,并且能够由前体蛋白ha0裂解为具有生物活性的ha1和ha2.200μl假病毒上清液感染靶细胞后rla值约为2×104,具有较高的感染效价.facs检测结果显示2份血清中均含有ha抗体,而且对不同分枝的假病毒具有交叉反应性.中和试验表明2份血清对深圳株和泰国株假病毒均具有中和能力,而且对不同分枝的假病毒具有交叉中和活性,但对深圳株的中和效价均高于泰国株.结论 本研究成功构建具有感染活性的深圳株和泰国株h5n1禽流感假病毒,并可以快速、安全、高效的评价血清的中和效价,具有广阔的应用前景. abstract： objective to establish neutralization assay based on h5n1 avian influenza pseudotyped virus in vitro and to evaluate neutralizing titer of convalescent serum from 2 patients with h5n1 avian influenza.methods phr-luc,pcmv△8.2 and cmv/r-sh or cmv/r-th were cotransfected into 293t cell by co-precipitation with calcium phosphate.pseudotyped virus supernatant was harvested 72 h posttranofection and identified the expression of ha and p24 by western blot,and then we analyzed infective activity of 200 μl supernatant of pseudotyped virus.293t cell integrated ha was prepared and anti-ha antibodies in convalescent serum were measured with facs assay.neutralizing titers of convalescent serums against shenzhen and thailand pseudotyped virus were determined based on calculating ic50 with neutralizing assay.results pseudotyped virus involved p24 and ha,and precursor protein ha0 could cleavage into ha1 and ha2 with biological activity.pseudotyped virus possessed better infective activity,and rla value was about 2 × 104 with 200 μl supernatant.both convalescent serums contained anti-ha antibodies and had cross-reactivity against different virus clades with facs assay.both convalescent serums had neutralizingactivity and could cross-neutralize different virus clades.however,both serums'neutralizing titers against shenzhen virus were higher than thailand.conclusion we successfully constructed infectious pseudotyped virus which integrated ha of shenzhen or thailand virus,and it could be used for evaluation of serum neutralizing activity fast,efficiently and safely with broadly application prospect.     

氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究氨基葡萄糖对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子机制。方法:CCK-8法检测人肝癌HepG2细胞的增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。Western blot检测ERK及P-ERK蛋白的表达水平。结果:氨基葡萄糖可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,且该作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。1.0mmol/L氨基葡萄糖作用72h可以使G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例降低。同时,2.0mmol/L及4.0mmol/L氨基葡萄糖处理72h可以使人肝癌HepG2细胞发生凋亡。另外,随着药物浓度的增加,人肝癌HepG2细胞中ERK蛋白的磷酸化水平逐渐降低。结论:氨基葡萄糖可能是通过降低ERK1/2蛋白的磷酸化水平影响细胞周期,从而抑制人肝癌HepG2细胞的增殖并诱导其发生凋亡。     

110例胆道闭锁患儿临床资料分析

目的 回顾性分析110例胆道闭锁患儿的临床特征以为胆道闭锁的诊断和治疗提供更多证据.方法 收集2017年8月至2020年8月期间在深圳市儿童医院收治的110例胆道闭锁患儿的临床资料,对患儿的一般资料和实验室检查资料进行总结分析.结果 本研究纳入的110例胆道闭锁患儿中,男49例(39％),女67例(61％).在所有患儿...     

高分辨率熔解曲线技术在结核耐药检测中的应用进展

结核病是严重危害人们健康的重大公共卫生问题和社会问题[1].为此大量研究人员致力于快速诊断结核分枝杆菌耐药的研究.高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术是一种基于核酸的物理性质,使用饱和染料反映核酸的熔解曲线变化来进行分析的技术,其不受突变碱基位点和种类的局限,既可以对未知突变进行筛查、扫描,也可以对已知突变进行分析.     

HIV／AIDS患者体内Th17及Th1应答失衡

目的 探讨HIV/AIDS患者体内Th17、Th1应答情况及Th17与Th1应答之间的相互关系.方法 选取38例符合诊断标准的慢性HIV感染患者,根据抗病毒治疗与否,将其分为2组：治疗前16例,治疗后22例,同时选取24例健康志愿者为对照.采用全血胞内细胞因子染色方法,使用BD FACSCanto流式细胞仪检测各项指标,FACSDiva软件分析CD4^＋IL-17^＋T细胞及CD4^＋IFN-γ^＋T细胞表达情况,将结果进行统计学分析并比较各组之间的差异.结果 未治疗患者CIM^＋IL-17^＋T细胞表达显著低于健康对照（1.14±0.79）%vs（3.98±1.14）%,P=0.000,经抗毒治疗后明显升高（2.22±1.00）%,P=0.001;而CD4^＋IFN-γ^＋T细胞则在治疗前后没有显著变化（34.35±24.38% vs42.10＋15.57%）,与健康人比较亦差异无统计学意义P=0.383;进一步相关性分析表明CD4^＋IL-17^＋T细胞与CD4^＋T细胞计数呈正相关（R=0.345,P=0.034）,而CD4^＋IFN-γ^＋T细胞则与CD4^＋T细胞计数没有明显相关性（R=-0.247,P=0.136）.结论 人体感染HIV病毒以后,机体出现Th17应答显著下调,Th17/Th1平衡紊乱,Th17免疫应答可能在HIV感染致病机制中起着重要作用.     

血浆生物标志物MMP-8在预测活动性肺结核病诊断效能的评价

目的 本研究以结核菌多肽蛋白刺激全血细胞,建立化学发光技术检测血浆中基质金属蛋白酶8(MMP-8)的表达水平,评价其区分活动性结核的诊断价值。方法 通过结核菌特异性多肽体外刺激全血并分离血浆,用化学发光技术检测不同人群中血浆MMP-8表达水平的差异。结果 建立化学发光方法检测血浆生物标志物MMP-8的表达水平,受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,在区分痰涂片阳性肺结核(AFB+TB)患者和健康对照(HC)者中曲线下面积(AUC)为0.95(95%CI:0.92～0.98),准确度0.85,灵敏度为0.94,特异度为0.83。在区分痰涂片阴性肺结核(AFB-TB)患者和HC对照组AUC为0.89(95%CI:0.85～0.094),准确度0.76,灵敏度为0.94,特异度为0.76。鉴别AFB+TB和结核潜伏感染(LTBI)者AUC为0.96(95%CI:0.94～0.98),灵敏度0.83,特异度为0.98。区分AFB-TB和LTBI者的AUC为0.93(95%CI:0.90～0.97),灵敏度为0.76,特异度为0.98。TB-DNA、痰结核菌培养、γ-干扰素释放试验(IGRAs)...     

两种新型冠状病毒核酸试剂检测结果的对比研究

目的 比较两种新型冠状病毒核酸试剂检测结果 的一致性.方法 回顾性分析深圳市第三人民医院确诊新型冠状病毒患者痰标本、鼻拭子标本和肛拭子标本共计539份核酸检测结果 ,采用一致性检验进行统计分析.并从两种试剂检测的核酸Ct值均>36的样本中随机抽取4份进行测序验证.结果 两种试剂对痰标本、鼻拭子标本和肛拭子标本一致性检验...     

流式检测CD_(70)~+ CD_(19)~+细胞的表达及其在结核病诊断中的价值

目的初步建立全血细胞中CD+70CD+19的流式检测方法。方法用流式细胞仪检测CD+70CD+19细胞的表达,比较其在肺结核患者(55例)、结核潜伏感染者(27例)及健康对照者(57例)的表达情况。结果结核患者全血中的CD+70CD+19细胞的表达水平明显低于结核潜伏感染组和健康对照组(P0.05)。分别绘制ROC曲线评价CD+70CD+19细胞的诊断效率,在分辨结核病人和健康者时,敏感性92.7%特异性89.5%;在分辨结核病人和潜伏感染者时,敏感性85.5%特异性79.2%。结论 CD+19B细胞CD+70的表达适用于肺结核的诊断及结核潜伏感染者的早期诊断。