大劣按蚊丝氨酸蛋白酶与疟原虫感染相关性研究

目的探讨大劣按蚊血淋巴中丝氨酸蛋白酶与约氏疟原虫感染的相关性。方法首先利用二维电泳分离感染约氏疟原虫的和吸食正常血的大劣按蚊血淋巴蛋白;然后进行Western blot,用丝氨酸蛋白酶抗体进行识别,并比较感染组与正常对照组间的区别;选择感染后不同时相点对大劣按蚊蚊胃和唾液腺进腺镜检,以观察蚊体内疟原虫情况。结果Western blot显示,正常对照组无阳性蛋白点,感染组有2个阳性蛋白点,分子质量单位分别为44ku和27ku,等电点分别为8.0和5.0;镜检显示,感染7d时可见卵囊颗粒样病变,11d时卵囊发育不同步且黑化明显,之后检出的卵囊数逐渐减少。蚊唾液腺内未见子孢子。结论大劣按蚊血淋巴中的丝氨酸蛋白酶与约氏疟原虫感染相关,可能参与蚊抗疟原虫感染的黑化包被反应。     

共聚焦激光扫描显微技术在寄生虫学研究中的应用

共聚焦激光扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)是新颖的分子细胞生物学分析仪器,较传统荧光显微镜有着不可比拟的优势。它的高分辨率、无损伤连续光学切片、三维图像重建等功能已广泛应用于医学、细胞生物学的研究,在寄生虫学领域中的应用也正在逐步开展。若结合其他的生物学技术,其应用范围将进一步扩大。因此。了解它的基本性能、特点将有助于更深入的应用。     

金标免疫渗滤法检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IgM的评价

目的为寻求简便、可靠的方法,用于斯氏狸殖吸虫病早期诊断及疗效考核。方法建立检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IgM抗体的金标免疫渗滤法(DIGFA),并对53例患者在治疗前和治疗后血清中特异抗体水平的动态变化进行研究。结果斯氏狸殖吸虫病患者经有效药物治疗后3个月、6个月、1年、1．5年连续采血,经DIGFA检测连续观察的结果表明,IgM抗体出现较早,阴转较为明显和迅速,治疗后3个月的阴转率就达47．2％(25／53),1年的阴转率可达86．8％(46／53);而IgG抗体则出现较晚,阴转缓慢,治疗后1．5年的阴转率仅为15．1％(8／53)。结论DIGFA检测斯氏狸殖吸虫病患者血清IgM抗体可作为早期诊断及疗效考核的有效方法。     

天然溶瘤新城疫病毒Italien株HN基因真核表达载体的构建和表达

目的 构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达.方法 采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HN cDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆.用Western blot、免疫荧光法检测HN蛋白的表达.结果 经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实真核表达载体pcDNA3.1-HN构建正确.Western blot和免疫荧光分析表明HN基因在CHO-K1中成功表达.结论 天然溶瘤型NDV Italien株的HN cDNA被成功克隆,所构建的真核表达载体pcDNA3.1-HN可以在CHO-K1细胞中稳定表达.     

疟原虫在蚊体内发育及蚊抗疟原虫感染的分子机制

疟原虫在蚊体内的发育是个复杂的过程。蚊可在多个环节通过多种机制对入侵的疟原虫产生免疫杀伤作用，以抵抗疟原虫的感染；同时，疟原虫可利用蚊体内发生的一些生物变化逃避蚊的免疫杀伤作用，蚊体内发生的一些生物变化还为疟原虫的发育、繁殖提供了合适的微环境。该文就疟原虫在蚊体内的发育及蚊抗疟原虫感染的分子机制作一综述。     

论临床医学生的综合能力培养

临床医学生的培养是当前医学教育的重要内容，而综合能力的培养则是重中之重。本即通过对基础和临床两个阶段学习的培养进行探讨，从认识基础课的重要性，增加学习深度和广度，改革考试方式，及加强理论与实践的结合，培养动手能力，社会知识和敬业精神，医德医风的培养等七个方面，提出了作的一些见解。     

斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平分析

目的 研究斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb(cytochrome B)基因在不同虫期的转录水平以更深入了解该吸虫的物质代谢途径,探索药物作用的药靶。方法 分别提取斯氏狸殖吸虫5个虫期的总RNA,并反转录为cDNA。将目的基因质粒作为标准品制作标准曲线,以5个虫期的cDNA为模板,特异引物为实验组引物,卫氏并殖吸虫的18SrDNA基因引物作为内参引物做实时荧光定量PCR,分析斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因分别在5个虫期的转录水平。结果 标准曲线线性关系良好,回归系数γ=0.994。产物熔解曲线分析结果均显示为单一波峰。定量分析结果显示,斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb转录主要在囊蚴期、30 d幼虫期及60 d童虫期,并且是逐步升高趋势,但成虫期转录较少,虫卵期没有转录。结论 斯氏狸殖吸虫线粒体Cytb基因在不同虫期的转录水平有差别,在60 d童虫期高转录,提示Cytb基因在幼虫的发育和移行中起着重要作用。     

有linker插入的靶向核糖核酸酶抑制乙肝病毒复制

目的 :构建人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN )与乙肝病毒核心蛋白 (HBVc)之间插入有linker(Gly4Ser) 3 的融合真核表达载体 (该融合蛋白即为靶向核糖核酸酶 ) ,以优化分子折叠 ,并将其应用于抑制HBV复制的体外研究 .方法 :以第四军医大学病原生物学教研室已构建的pcDNA3.1 (- ) /TR为基础 .首先合成linker序列 ,经过退火形成双链并克隆入 pcDNA3.1 (- ) /TR生成pcDNA3.1 (- ) /HBc linker质粒 ;随后hEDN片段经PCR扩增后克隆入 pcDNA3.1 (- ) /HBc linker质粒生成 pcDNA3.1 (- ) /TNL质粒 ,其中效应分子 (hEDN)与靶向分子 (HBVc)之间为linker序列 .应用间接免疫荧光法检测 pcDNA3.1 (- ) /TNL在细胞的表达 ,并应用放免法测定其抗HBV活性 .同时 ,应用MTT比色法检测细胞的代谢活性 .结果 :成功构建了有linker (Gly4Ser) 3 介入的hEDN和HBVc真核融合表达载体 ;并在HepG2 .2 .1 5细胞中得到有效表达 .转染质粒 pcDNA3.1(- ) /TNL与 pcDNA3.1 (- ) /TR相比可明显地降低HepG2 .2 .1 5细胞上清中HBsAg的含量 (P <0 .0 5 ) .MTT比色分析表明细胞代谢活性未受到影响 (P >0 .0 5 ) .结论 :将linker插入靶向核糖核酸酶中可增强其对HBV复制的抑制效应     

斯氏狸殖吸虫病免疫诊断抗原制备方法研究进展

斯氏狸殖吸虫[Pagumogonimus skrjabini (Chen，1959)]散在流行于我国四川、重庆、甘肃、福建等15个省、市、自治区，国外尚没有报道。由于人为该寄生虫的非正常宿主，童虫寄生于人体后在人体内移行，常常引起游走性皮下包块或结节，脑占位性病变和内脏损伤等肺外型寄生虫表现，造成多器官、组织的损害。根据其寄生部位不同临床表现多种多样，临床症状不典型，因而误诊率非常高。由于该虫体在人体内寄生的特点决定了病原学诊断的困难，因而免疫学检查在该型肺吸虫的诊断和鉴别诊断中显得尤其重要。     

蛋白质药品的真空冷冻干燥技术及研究进展

目的介绍真空冷冻干燥技术制备蛋白质药品的方法。方法查阅国内外近年来有关文献，综述了真空冷冻干燥原理、蛋白质药品的冻干工艺及药品贮存期间影响其活性的各个因素。结果真空冷冻干燥过程中可引起蛋白质药品不同程度的变性，加入保护剂可增加其稳定性。结论冷冻干燥时，不同的蛋白质药品需加入不同的保护剂。