抗人乙酰胆碱受体单链抗体1956#在大肠杆菌中的可溶性表达

目的: 重组表达抗人乙酰胆碱受体(AChR)单链抗体(scFv)1956#, 提高scFv1956#的可溶性表达量.方法: 用PCR扩增含抗人AChR scFv1956#的载体pHEN1中的scFv1956#结构基因, 并将其插入到原核表达载体pET44a( ).用重新构建的载体转化E.coli BL21(DE3)pLysS, IPTG诱导表达.用SDS-PAGE来比较更换载体及不同温度和时间对可溶性表达量的影响, 并通过Western blot进行鉴定.结果: PCR产物大小为785 bp, 与预计相符; 所构建质粒经测序证实scFv1956# 核苷酸序列正确, 并正确插入载体pET44a( ).诱导后得到的可溶性表达量优于原载体pHEN1.结论: 载体pET44a( )表达的端融蛋白NusA可以帮助scFv1956# 的正确折叠, 从而获得大量可溶性表达.低温长时间诱导有助于提高可溶性表达的量.     

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因融合表达产物的免疫学 …

目的 研究ＴＫ基因在真核细胞中的表达。方法 应用已构建和表达的单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶（ＨＳＶ－１ＴＫ）融合蛋白免疫兔制备抗ＨＳＶ－１ ＴＫ血清,并以免疫印迹法鉴定其特异性,以免疫荧光法检测ＨＳＶ－１ ＴＫ基因在转染人肝癌细胞系中的表达。结果 免疫印迹显示,自制和国外提供的抗ＴＫ兔血清,均能特异性地识别Ｍｒ约为９７０００的ＴＫ融合蛋白。免疫荧光染色得到的结果满意,而且自制抗血清的效价和染色强度均优     

大劣按蚊丝氨酸蛋白酶cDNA克隆和表达

目的　克隆、表达大劣按蚊丝氨酸蛋白酶。方法　根据已报道昆虫的前酚氧化酶激活酶 (prophenoloxidase -acti vatingenzyme,PPAE)的保守氨基酸序列设计简并引物 ,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板 ,进行RT -PCR扩增 ,克隆和测定插入片段 ;所得序列进行BLAST查询 ,并原核表达其中的两种PPAE样丝氨酸蛋白酶cDNA ,通过SDS -PAGE和Westernblotting检测表达产物。结果和结论　获得了 3种大劣按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列 ,即AdsP1(5 12bp) ,AdsP2(488bp)和AdsP3(5 12bp)。AdsP1和AdsP3与冈比亚按蚊sP14D1、sP14D2、3种昆虫PPAE和黑腹果蝇Easter很相似 ,推测AdsP1和AdsP3可能是大劣按蚊的PPAE ,起调节大劣按蚊黑化包裹约氏疟原虫反应的作用。另外 ,成功表达了AdsP1和Ad sP3部分cDNA序列。     

对约氏疟原虫不同易感性的大劣按蚊和斯氏按蚊基因组RAPD序列比较

目的分析对约氏疟原虫不易感的大劣按蚊和易感的斯氏按蚊基因组RAPD谱带并测序，探讨媒介按蚊基因型与疟原虫基因型间的相互关系。方法用已筛选的一条随机引物，随机扩增大劣按蚊和斯氏按蚊成蚊的基因组DNA，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后，对相同迁移率的DNA条带克隆、测序，并采用相关在线程序及软件进行序列比较分析。结果大劣按蚊和斯氏按蚊RAPD谱带具有明显的种间差异，但有4对相同迁移率的条带。序列分析显示4对DNA条带在序列长度和组成上呈现多态性，序列的GC含量和简单重复序列存在差异，序列相似性介于48％～52％之间。结论大劣按蚊和斯氏按蚊之间存在不同的遗传背景，其基因多态性可能与产生对约氏疟原虫的易感性不同有关，为进一步研究按蚊与疟原虫之间的相互作用奠定了基础。     

NO提高γ射线对L1210细胞损伤效应及其机制的研究

目的探讨一氧化氮（NO）是否提高γ射线对L1210细胞的损伤效应及其机制.方法将L1210细胞加入隔离培养器内与3T3细胞共培养,收集经γ射线照射后12、24、48和72 h各组L1210细胞,台盼蓝染色观察直接损伤作用,TUNNEL法观察诱导细胞凋亡的情况,流式细胞术检测细胞周期.结果γ射线照射后质粒转染组L1210细胞台盼蓝拒染率下降最快,12 h后与空载体组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,加DEVD-CHO后能够提高台盼蓝拒染率,24 h后有显著的差异（P＜0.05）;γ射线照射后质粒转染组细胞凋亡率24 h开始明显升高,与空载体组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,加DEVD-CHO后细胞凋亡率下降,24 h开始与单独质粒转染组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;射线照射后质粒转染组细胞G1期快速上升,4 h与空载体组差异有统计学意义（P＜0.05）,加DEVD-CHO后G1期上升较单纯质粒转染组慢,4 h两组差异有统计学意义（P＜0.01）.结论NO可增强γ射线对L1210细胞的直接损伤作用,出现细胞的G1阻滞,促进细胞凋亡.Caspase-3的活化参与上述作用.     

大劣按蚊血淋巴中疟原虫感染相关蛋白的cDNA克隆

疟疾是一种严重的传染病,大劣按蚊是我国及东南亚地区的重要传疟媒介。对大劣按蚊抗疟原虫感染分子机制的研究,具有重要意义。我们先前已成功分离了大劣按蚊血淋巴中约氏疟原虫感染相关蛋白(PIRP1),并对该蛋白进行了质谱检测。本研究在已获得PIRP1质谱检测信息的基础上,利用分子生物学技术,成功克隆了该相关蛋白的部分cDNA序列(GenBank序列号为EF409973)。为下一步对该蛋白的功能研究奠定了基础。     

与昆虫免疫相关的TEP家族分子研究进展

含硫酯键蛋白(thioester-containing proteins,TEPs)在线虫和人类等许多后生动物中均有发现。这类蛋白质作为补体系统的一部分和通用蛋白酶抑制剂在免疫反应中起着重要的作用。本综述就TEP蛋白在两种双翅类昆虫免疫反应的作用进行总结。     

舒马曲坦胶囊的制备与质量控制

目的制备舒马曲坦胶囊并建立其质量控制方法。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中舒马曲坦。结果舒马曲坦质量浓度在50～1 600 ng/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为(105.73±4.58)%,RSD为4.33%(n=6),日内、日间精密度平均RSD为2.20%和2.59%。结论质量控制方法稳定可靠,可用于舒马曲坦胶囊的质量控制。     

重组人可溶性补体受体1型SCR15-18片段表达纯化及生物活性鉴定

目的 获得高表达、高纯度和高活性的可溶性补体受体1型SCR15-18 (sCR1-SCR15-18)蛋白.方法 重组原核表达载体pET32a-sCR1-SCR15-18 在大肠杆菌BL21中经不同IPTG浓度、诱导时间和温度诱导表达,超声破菌,提取包含体,经Ni2 -NTA 亲和层析后,选择不同氧化还原条件进行复性,进而检测其生物学活性.结果 得到了有较高表达量、较高纯度和较好生物学活性的sCR1-SCR-15-18蛋白.结论 优化了sCR1-SCR15-18蛋白的表达、纯化和复性的参数,所获结果为进一步动物体内保护实验研究奠定了基础.     

氧化苦参碱脂质体在体透皮研究

目的研究氧化苦参碱脂质体及洗剂经小鼠皮肤给药后药物在皮肤中的分布。方法在体条件下分别局部外用氧化苦参碱脂质体与传统洗剂,测定药物在皮肤内及角质层中的分布情况。结果相同条件下,脂质体制剂在皮肤内药物滞留率较普通洗剂高,在角质层中较普通洗剂低;1．O％,1．5％,3．0％氧化苦参碱脂质体在皮肤内药物滞留率分别为（25．2±1．2）％,（40．1±2．4）％,（22．4±1．5）％,在角质层中药物滞留率分别为（10．3±1．1）％,（16．5±1．8）％,（34．2±1．6）％。结论脂质体制剂能有效透过皮肤角质层,持续发挥局部药物作用。