非小细胞肺癌中半乳凝素1的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中半乳凝素1(Gal-1)mRNA及蛋白的表达及临床意义。方法采用RT-PCR、蛋白质印迹技术分别检测35例NSCLC患者的癌组织、癌旁组织及远处正常肺组织(距癌组织边缘大于5cm)中Gal-1mR-NA及蛋白表达情况。结果 NSCLC患者癌组织、癌旁组织以及有淋巴结转移的NSCLC患者正常肺组织中,Gal-1mRNA的表达水平均明显高于无淋巴结转移的NSCLC患者正常肺组织(P<0.05);NSCLC患者癌组织、癌旁组织以及有淋巴结转移的NSCLC患者正常肺组织中,Gal-1蛋白表达水平明显高于无淋巴结转移的NSCLC患者正常肺组织(P<0.05);NSCLC患者癌组织中Gal-1mRNA的表达与患者TNM分期及分化程度密切相关(P<0.05),而与患者的性别、年龄、病理组织类型无明显相关性(P>0.05)。结论 Gal-1表达与NSCLC的发生、发展、侵袭转移密切相关,可作为一个潜在的NSCLC发病与转移的观察指标。     

pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒的构建及其在人神经胶质瘤U251细胞中的稳定过表达

目的建立稳定过表达pcDNA3.1/连接蛋白43(Cx43)重组质粒的人神经胶质瘤U251细胞系。方法设计人Cx43的引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从低表达Cx43的U251细胞中扩增出目的片段,双酶切后定向连入pcDNA3.1载体,构建pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒,经酶切、PCR、测序检测构建的正确性。采用脂质体转染法将重组质粒转入U251细胞,G418筛选出稳定转染的细胞系,采用RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染pcDNA3.1/Cx43重组质粒的U251细胞中Cx43基因、蛋白的表达水平。结果酶切、PCR及测序表明pcDNA3.1/Cx43重组质粒构建成功,筛选获得稳定过表达Cx43的U251细胞。结论构建了pcDNA3.1/Cx43真核表达质粒及稳定过表达Cx43的U251细胞株,为下一步以Cx43为靶标进行人神经胶质瘤的基因治疗研究奠定了实验基础。     

甲基莲心碱对增生性瘢痕成纤维细胞整合素β1和整合素α3亚型mRNA表达的影响

目的探讨甲基莲心碱（Nef）对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞（HSFBs）整合素（integrin）β1和integrinα3亚型mRNA表达的影响。方法进行HSFBs体外培养,选取3～6代对数生长期的HSFBs,以2×10^6个/瓶分别接种于细胞培养瓶中,随机分为5μg/mLNef组、10μg/mL Nef组、20μg/mLNef组、20μg/mL盐酸维拉帕米注射液（Ver）组和对照组共5组,每组各6瓶细胞。进行条件培养基培养24h后,收集各组细胞,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定各组HSFBs integrin β1和integrin α3亚型mRNA的表达。结果10μg/mLNef组、20μg/mLNef组和20μg/mLVer组HSFBsintegrinβ1 mRNA表达水平均明显低于对照组（均P〈0.01）,20μg/mLVer组HSFBsintegrinβ1 mRNA表达水平与10μg/mLNef组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,5μg/mLNef组HSFBsintegrinβ1mRNA表达水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。10μg/mLNef组、20μg/mLNef组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平均明显低于对照组（均P〈0.01）,5μg/mLNef组、20μg/mLVer组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平与对照组比较差异均无统计学意义（均P〉0.05）,10μg/mLNef组HSFBs integrinα3 mRNA表达水平与20μg/mLNef组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论Nef以浓度依赖方式抑制HSFBs integrinβ1 mRNA和integrinα3 mRNA的表达。     

p73β基因对胰腺癌BxPC-3细胞的抑制作用

目的将p73β基因转染胰腺癌BxPC-3细胞,观察其对胰腺癌细胞生物活性的影响。方法将pcDNA3.1-N0和pcDNA3.1-p73β基因转染胰腺癌BxPC-3细胞,用MTT法进行细胞凋亡检测。结果该扩增片段经限制性核酸内切酶酶切鉴定,p73β基因相对表达量明显高于BxPC-3细胞和空载质粒转染细胞BxPC-3-pcDNA3.1-N0两对照组（P〈0.05）。与两对照组相比,重组质粒转染细胞pcDNA3.1-p73β实验组细胞增殖明显减弱（P〈0.05）。结论包含人类p73基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段被成功扩增,其末端带有限制性核酸内切酶XbaⅠ、KpnⅠ识别序列,且对胰腺癌细胞有抑制作用。     

低浓度丝裂霉素C联合自体游离角膜缘干细胞移植治疗原发性翼状胬肉的研究

目的观察低浓度丝裂霉素C（MMC）在自体游离角膜缘干细胞移植术治疗原发性翼状胬肉的临床疗效。方法140例行翼状胬肉切除的原发性翼状胬肉患者140只眼,随机分为3组。A组40例患者40只眼,翼状胬肉切除术中用0．2mg／mL的MMC 3min。B组50例患者50只眼,翼状胬肉切除术中采用自体游离角膜缘干细胞移植。C组50例患者50只眼翼状胬肉切除术中接受自体游离角膜缘干细胞移植联合应用0．2mg／mL MMC 1 min。随访13～62个月,术后观察3组的复发率和并发症。结果复发率：A组4例（10．0％）,B组3例（6．0％）,C组2例（4．0％）。A组与B、C组复发率比较差异有统计学意义（P〈0．05）、B与C组复发率差别无统计学意义（P〉0．05）。刨面上皮完全形成在术后14d内。并发症：结膜肉芽肿A组2例,B、C组无;巩膜软化溶解A组1例。未发现角膜穿孔、虹膜炎、青光眼等其他严重并发症。结论自体游离角膜缘干细胞移植联合术中应用低浓度MMC（0．02％1min）无明显降低原发性翼状胬肉复发作用。     

SPECT在股骨颈骨折多钉内固定术后股骨头生存分析中的应用

目的初步探讨SPECT在股骨颈骨折空心钉内固定术后股骨头生存分析中的临床应用价值。方法80例单侧股骨颈骨折患者术前均行SPECT检查,根据患侧股骨头/干比值分为A,B2组。A组43例,患侧股骨头/干比值〉2.10,B组37例,患侧股骨头/干比值≤2.10。均行闭合复位中空加压螺丝钉内固定术,术后所有患者均随访2年,对2组的随访资料进行生存分析。结果A组失访3例,2年股骨头生存率为88.4%,股骨头坏死5例（坏死率为12.0%）;B组失访2例,2年股骨头生存率为67.6%,股骨头坏死12例（坏死率为33.3%）;2组生存率比较有显著性差异（P〈0.05）。结论股骨颈骨折后术前早期行SPCET检查对选择治疗方式和股骨颈骨折后的股骨头坏死的预测有重要的临床价值。     

一株马脲片球菌的分离、鉴定及其部分16S rDNA基因序列测定

目的对门诊分离出一株α溶血的革兰阳性球菌（命名为NC588）进行鉴定。方法对NC588进行基本形态观察、生化反应分析和部分16S rDNA测定。结果该菌多数呈双排列,少见单个或链状,无动力,无荚膜,直径为1.2～2.0μm;发酵葡萄糖产酸不产气,触酶和氧化酶阴性,不还原硝酸盐;可生长pH为3.5～7.5,最适pH为6.0～6.5;15℃和45℃不生长,20～40℃生长良好;35℃普通气体条件下培养24h见菌落呈针尖样,48℃后出现α溶血。高度耐糖肽类抗生素,对万古霉素和替考拉宁MIC值分别为256、128μg/mL。部分16S rDNA序列测定和同源性分析显示,NC588与马脲片球菌的同源性为100%。结论NC588鉴定为马脲片球菌。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定研究

目的探讨大鼠胚胎神经干细胞（NSCs）的分离、培养、分化及鉴定的条件与方法。方法分离孕14～16dSD大鼠胚胎脑皮质及皮质下区域NSCs,无血清培养基（DMEM／F12,含bFGF、EGF、B27等）条件下培养,通过有限稀释法克隆、传代,含血清培养基诱导分化,免疫组织化学法鉴定NSCs及诱导分化后的细胞。结果体外培养的NSCs能稳定增殖成神经干细胞球并传代（nestin染色阳性）,经诱导可分化为神经元细胞（NSE染色阳性）、星形胶质细胞（GFAP染色阳性）和少突胶质细胞（CNP染色阳性）。结论采用无血清培养基中加入特定生长因子的培养技术,可在体外大量培养出稳定增殖并具有多向分化潜能的大鼠胚胎NSCs,为进一步研究NSCs的生物特性及应用奠定了基础。     

系统性缺血预适应对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨系统性缺血预适应对缺血再灌注心肌是否具有早期保护作用。方法将24只新西兰大白兔随机分为单纯缺血再灌注组（I组）、经典缺血预适应组（IPC组）、系统性缺血预适应组（SIP组）,每组8只。I组丝线结扎冠状动脉左前降支,缺血30rain,再灌注120min。IPC组冠状动脉左前降支缺血5min,再灌注10min,重复2次,后同I组。SIP组5min内从股动脉抽血,使平均动脉压降至50mmHg并维持10min,此后用5min把放出的血输回,后同I组。检测3组缺血前、缺血30min、再灌注30min、再灌注120min各时间点血清cTnI浓度、SOD活性及MDA、NO含量的变化。结果（1）缺血前各观察指标3组相比,差异均无统计学意义（P〉0．05）;（2）缺血30min,再灌注30、120min时点IPC、SIP组血清cTnI浓度、MDA含量明显低于I组（P〈0．05）,IPC、SIP组血清SOD活性、NO含量明显高于1组（P〈0．05）;（3）SIP组较IPC组效果显著,但各指标2组比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论系统性缺血预适应对心脏缺血再灌注损伤具有早期保护作用,能明显减少心肌细胞坏死。     

白藜芦醇对抗线粒体电压依赖性阴离子通道介导心肌损伤作用的研究

目的从细胞水平探讨白藜芦醇抗心肌损伤保护作用机制,明确其与线粒体电压依赖性阴离子通道(VDAC)的关系。方法以pFLAG质粒为载体,构建VDAC1真核表达载体pFLAG-VDAC1。H9c2心肌细胞随机分为5组,Control组、缺氧/复氧(A/R)组、白藜芦醇组、pFLAG-VDAC1-白藜芦醇组和pFLAG-白藜芦醇组。Western blot法测定VDAC1的蛋白表达,MTT法检测细胞存活率,生化自动分析仪测定LDH、CPK活性,线粒体肿胀实验检测线粒体通透性转换孔道(mPTP)的开放。结果 A/R处理后,VDAC1表达上调,细胞存活率下降,LDH和CPK活性增高,mPTP开放;而白藜芦醇则能抑制VDAC1的上调,并降低mPTP开放程度,对抗A/R损伤;但VDAC1高表达的pFLAG-VDAC1-白藜芦醇组则可取消白藜芦醇的心肌保护作用。结论白藜芦醇抗A/R损伤作用与VDAC1密切相关,其可通过下调VDAC1从而防止mPTP的开放,保护心肌细胞。