HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的 克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达.方法 采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定后,将其转染入CHO细胞,G418筛选,用PCR、免疫斑点、Western Blot、免疫细胞化学方法检测HBeAg在CHO细胞中的表达.结果 成功克隆到HBeAg基因,并构建了重组pcDNA-HBeAg真核表达载体;基因测序证实克隆的HBeAg基因中共有12个位点发生单碱基置换突变(C1819G,A2007T,C2046T,C2061G,G2106A,C2109A,C2146T,T2172C,C2203T,A2235G,G2253A,C2298T),1个位点发生缺失突变(2346 del T);成熟HBeAg蛋白中149位缬氨酸(valine,V)突变为苯丙氨酸(phenylalanine,F)(V149F),在HBeAg蛋白羧基端融合有一段长11个氨基酸的多肽(RLESRGPVZTR).PCR、免疫斑点、Western Blot和免疫细胞化学方法证实重组pcDNA-HBeAg真核表达载体可在CHO细胞中表达分泌型HBeAg蛋白.结论 重组HBeAg真核表达载体的构建和表达为HBeAg的临床诊断和深入研究提供了条件.     

大鼠坐骨神经分支选择性损伤后脊髓背角毛细血管和星形胶质细胞的反应

目的探讨成年大鼠坐骨神经分支选择性结扎切断(SNI)后,腰段脊髓背角内毛细血管和星形胶质细胞的反应。方法成年雄性SD大鼠40只,随机分为光镜组(n=30)和电镜组(n=10)。光镜组又分为对照组、假手术组和SNI手术组。SNI手术为分别结扎切断左侧胫神经和腓总神经,保留腓肠神经,存活20d。部分动物在术后经尾静脉给予30g/L伊文思蓝,切取脊髓L4平面,荧光显微镜观察伊文思蓝的渗出;另一部分在术后进行常规固定取材,切片进行抗鼠IgG和GFAP的免疫组织化学反应。电镜组(对照组和SNI后20d组),脊髓切片进行常规抗大鼠IgG的免疫电镜处理。结果 1.SNI后20d,可见明显的伊文思蓝渗出红色光斑;2.SNI后GFAP阳性细胞变为反应型,数量明显增加,毛细血管壁及其周围的IgG颗粒也显著增加。3.电镜观察:SNI术后20d,IgG阳性颗粒增多,内皮细胞观察到下列变化:(1)内皮细胞向管腔内伸出许多微细的突起,有的含有IgG阳性颗粒。(2)内皮细胞的管腔侧胞膜上有许多"内吞"小凹,凹内可见IgG阳性颗粒,胞质内有含IgG阳性颗粒的小泡,在反管腔侧胞膜上有"胞吐"现象。(3)内皮细胞紧密连接出现间隙,间隙内有IgG颗粒。(4)胞质内出现囊泡,有的泡内显示IgG阳性颗粒。结论 SNI后脊髓背角内毛细血管内皮细胞发生明显的反应,大鼠IgG和伊文思蓝可经过血脊髓屏障渗出,星形胶质细胞被激活。     

新型生物陶瓷材料在儿童牙髓治疗中的临床研究进展

当代的儿童口腔医学，对乳牙和年轻恒牙的牙髓治疗理念越来越趋于"保守"，即在尽可能保存活髓组织或根部活髓组织的前提下达到治愈患牙的目的。这一理念的改变得益于口腔材料的发展，如MTA等由于其良好的性能及临床效果，已在儿童牙髓治疗中广泛应用，但其在操作性，美观性等方面依然存在一些不可避免的缺点。新型生物陶瓷材料，如iRoot BP、Biodentine等具有理想的理化性能和生物相容性，并且较好的解决了原有生物陶瓷材料的一些缺点，广泛应用于乳牙及年轻恒牙的间接牙髓治疗、直接盖髓术、牙髓切断术和牙髓血运重建术等治疗中。本文就新型生物陶瓷材料的特点及其在儿童牙髓治疗中的应用作一综述。     

浓硫酸酸蚀聚醚酮酮的时间对其与牙本质剪切粘接强度的影响

目的研究浓硫酸酸蚀聚醚酮酮(polyether?ketone?ketone,PEKK)不同时间对其与牙本质剪切粘接强度的影响,为临床使用PEKK修复体的粘接操作提供科学依据。方法制备PEKK试件44个,随机平均分为A、B、C、D 4组:A组为对照组,仅用水磨砂纸打磨;B组、C组、D组为实验组,分别用98%浓硫酸酸蚀经打磨试件表面5 s、30 s、60 s。另外,每组随机抽取1个试件用慢速切割机制备出剖面,在扫描电镜下观察其剖面的表面形貌。4组试件与牙本质通过树脂粘接后在37℃蒸馏水浸泡24 h,测量剪切粘接强度后统计分析,通过扫描电子显微镜与体视显微镜检查试件断裂界面,统计粘接失败类型。结果B组PEKK试件酸蚀处理后剖面呈海绵状且孔隙大小均匀,C组、D组可见试件剖面有破坏状孔蚀样结构;剪切粘接强度B组(16.84±1.84)MPa、C组(12.33±1.22)MPa和D组(6.44±1.18)MPa均大于A组(3.99±1.06)MPa(P<0.05),其中B组与牙本质的剪切粘接强度最高(16.84±1.84)MPa。结论采用98%浓硫酸酸蚀PEKK表面5 s处理方法可以使PEKK与牙本质获得较好的剪切粘接强度。     

富血小板血浆对大鼠骨髓间充质干细胞体外成骨影响的实验研究

目的:探讨富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bonemarrowmesenchymal stem cells,rBMSC)体外成骨能力的影响。方法:体外分离、培养rBMSC,经细胞表面标记物检测和体外诱导分化鉴定后,分别采用MTT法检测PRP对细胞增殖活性的影响;细胞化学法检测PRP对成骨诱导后rBMSC碱性磷酸酶(alkaline phosphate,ALP)活性的影响;RealTime-PCR检测PRP对细胞成骨分化指标Col-3、OPN mRNA表达水平的影响;扫描电镜观察PRP对rBMSC在Bio-Oss上粘附的影响。结果:rBMSC传代后细胞生长状态相对稳定,呈梭形;细胞表面标记物CD29阳性率为88.2%,CD90阳性率为98%,CD34细胞阴性率为2.8%,CD45细胞计数阴性率为2.7%;成骨诱导21 d后,茜素红染色可见明显矿化结节;成脂诱导14 d后,油红O染色可见红色脂滴形成。MTT检测,10%PRP组在培养1、3、5、7、9 d各时间点的OD值均显著高于空白对照组(P<0.05)。ALP染色显示,无论是诱导培养7 d还是14 d,成骨诱导液+PRP组的ALP活性均明显高于单纯成骨诱导液组,差异有统计学意义(P<0.05);另外,各组不同诱导培养时间点相比还发现,无论是实验组还是对照组,在诱导7 d时,ALP活性均较低;而在14 d,ALP的活性明显升高。RealTime-PCR检测显示,单纯10%PRP诱导培养7 d和14 d后细胞Col-3、OPN mRNA水平虽稍低于成骨诱导液组,但明显高于空白对照组,而10%PRP联合成骨诱导液诱导培养7 d和14 d的Col-3、OPN mRNA的表达量更高,与其他各组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。另外各组诱导培养14 d的Col-3、OPN mRNA水平显著高于相应的7 d组(P<0.05)。扫描电镜结果显示PRP明显促进rBMSC在Bio-Oss骨粉上的粘附与伸展。结论:PRP对rBMSC的增殖、成骨分化,以及在生物材料上的粘附能力均具有明显的促进作用。     

三种脱敏剂对全酸蚀粘结剂牙本质粘结强度和界面形态的影响

目的:研究、比较三种脱敏剂对全酸蚀粘结剂牙本质粘结强度及其粘结界面形态的影响。方法:选择12个无龋损离体人磨牙,磨除牙合面釉质,用600目碳化硅砂纸在流水下预备出有统一玷污层的牙本质粘结面后,随机分为4组,分别用去离子水(对照组)和3种脱敏剂(Hybrid Coat、Gluma、极固宁)进行脱敏处理后,应用Single Bond 2在面粘结4 mm树脂。然后将每个牙垂直于粘结面切割出12个1.0 mm×1.0 mm×4.0 mm的粘结试件,分别在SEM下观察其粘结界面微观形态并进行微拉伸强度(μTBS)测试。结果:HybridCoat组粘结强度最高((14.81±3.87)MPa,随后依次为去离子水组(13.39±4.67)MPa、Gluma组(12.76±2.96)MPa和极固宁组(10.48±4.32)MPa,各组间两两比较,极固宁组明显低于其他3组(P﹤0.05),其他3组间相比均无显著性差异(P﹥0.05);Hybrid Coat组形成的树脂突大部分>35μm,长而密集;Gluma组形成的树脂突长7～35μm;极固宁组形成的树脂突长20～35μm,较稀疏。结论:Hybrid Coat和Gluma对全酸蚀粘结剂牙本质粘结强度无明显影响,而极固宁则明显降低其粘结强度。     

雷帕霉素对急性髓系白血病细胞系HL-60和HL-60/VCR生长的抑制作用

为了探讨mTOR抑制剂雷帕霉素对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia;AML）细胞的增殖和药物敏感性的影响。以AML细胞株HL-60和多药耐药HL-60/VCR细胞系为研究对象,采用MTT法测定生长曲线和流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测P糖蛋白（P-glycoprotein,Pgp）的表达。结果显示：与空白对照组细胞比较,雷帕霉素能抑制HL-60和HL-60/VCR细胞生长增殖（p〈0.05）,且随着浓度升高,增殖抑制率逐渐增高,24-72小时的细胞增殖抑制率随着时间的延长而有所增高（p〈0.05）,同时可阻滞细胞从G1期到S期的细胞周期转换。雷帕霉素抑制HL-60/VCR细胞的Pgp蛋白的表达。与柔红霉素单独应用相比,雷帕霉素50nmol/L、100nmol/L与柔红霉素联合应用使HL-60和HL-60/VCR细胞增殖抑制率明显增高（p〈0.05）,尤其是当先加雷帕霉素,而24小时后再加柔红霉素时。结论：mTOR抑制剂雷帕霉素对HL-60和多药耐药的HL-60/VCR细胞的生长均有抑制作用,除伴G0/G1期阻滞外,还增加细胞对柔红霉素的敏感性,这为临床难治性AML治疗提供新的治疗手段。     

胃癌组织P16和P53蛋白表达的研究

目的研究胃癌组织中P16和P53蛋白的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学方法,对57例胃癌组织和癌旁组织、38例正常胃组织中p16和p53基因表达产物进行检测,并结合临床进行讨论和分析。结果胃癌组织中P16蛋白的阳性率为21.1%（12/57）,明显低于癌旁组织59.6%（34/57）和正常胃组织89.5%（34/38,P〈0.05）;P53蛋白的阳性率为80.7%（46/57）,明显高于癌旁黏膜组织42.1%（24/57）和正常胃组织0%（0/38,P〈0.05）。P16和P53蛋白表达与胃癌组织学类型、浸润深度、分化程度及淋巴结转移有关（P〈0.05）。结论胃癌组织P16和P53蛋白的异常表达与胃癌发生发展、淋巴结转移和预后可能有关。     

抑癌基因PTEN在老年人消化道多原发癌中的表达及其临床意义

目的：观察抑癌基因PTEN在老年人消化道多原发癌组织当中的表达,探讨其与老年人消化道多原发癌发生的关系及其临床意义。方法：采用免疫组织化学方法检测抑癌基因PTEN在多原发癌组织和正常消化道组织中的表达。结果：PTEN在正常消化道组织和老年人消化道多原发癌中阳性率分别为100.0%和61.4%。老年人消化道多原发癌组织PTEN蛋白阳性率显著低于正常消化道组（P〈0.05）,PTEN表达与老年人消化道多原发癌的分化程度高低、浸润深度、是否有淋巴结转移关系密切（P〈0.05）。结论：PTEN的异常表达可为老年人消化道多原发癌诊断和判断其生物学特性提供可靠的指标。     

住院病人医院感染调查与防控对策

目的了解医院感染状况及相关因素,制定有效的预防和控制方案。方法通过回顾性调查方法,对某中医医院住院患者医院感染状况进行调查,并进行相关因素分析。结果 2009-2011年该中医院共出院28 685例患者,发生医院感染460例,平均感染率为1.65%。感染的高发部位是呼吸道,构成比为64.35%;其次是泌尿道和胃肠道。医院感染发生率以肿瘤科居首位,60岁以上老年病人占73.26%,侵入性操作、免疫抑制剂的应用和老年基础病是医院感染主要危险因素。结论中医院住院患者医院感染发病率低于全国平均水平,重症病人属最易感人群,严格执行无菌操作和加强消毒隔离措施为主要防控手段。