商陆不同炮制品对大鼠的利尿作用及其对睾丸、肾脏水通道蛋白的调节作用

目的:研究商陆生品及不同炮制品的利尿作用,初步探究其利尿作用机制。方法:采用水负荷大鼠模型,将80只SD大鼠随机分为空白组、模型组、商陆皂苷甲(Es A)组、生品组、不同炮制品(醋炙、醋煮、水煮、清蒸)组,每组10只。同时进行正常状态大鼠利尿实验,将70只SD大鼠随机分为空白组,Es A组,生品组及不同炮制品(醋炙、醋煮、水煮、清蒸)组,每组10只。各给药组的剂量分别为0.005,1.8,1.8,1.8,1.8,1.8 g·kg~(-1),通过给予水负荷模型大鼠及正常大鼠不同的药物,分别测定排尿量,并进行水负荷大鼠大鼠睾丸水通道蛋白9(AQP9)因子表达、肾组织AQP2和AQP4因子的表达试验及正常大鼠睾丸AQP9因子的表达试验。结果:综合6 h总尿量,Es A,商陆生品及不同炮制品均对水负荷大鼠表现出利尿作用;对于正常大鼠仅醋煮品表现出利尿作用。聚合酶链式反应(PCR)技术中对于水负荷大鼠,AQP2 mRNA表达均显著降低,AQP4和AQP9 mRNA表达大部分无显著变化;对于正常大鼠,醋煮组AQP9 mRNA表达显著降低,其余各组无显著变化。结论:商陆对于水负荷大鼠表现出利尿作用,但对正常大鼠利尿作用不明显;商陆的利尿作用可能与AQP2和AQP9 mRNA表达下降有关。     

正北芪中一种免疫活性蛋白质提取工艺的优选

目的:优选正北芪中一种免疫活性蛋白Am PR10-16(16.0 k Da)的提取工艺。方法:以正北芪中Am PR10-16的可溶性蛋白二级结构的圆二色性考察提取温度,在单因素试验基础上,以Am PR10-16在SDS-PAGE胶图中的蛋白条带吸光度(峰面积)为指标,采用L_9(3~4)正交试验考察提取温度、料液比、提取时间、提取溶剂、粒度、提取次数对Am PR10-16提取工艺的影响,辅以BCA法测定可溶性蛋白含量作为佐证。结果:Am PR10-16最佳提取工艺为药材粉末过4号筛,加16倍量p H 8.0的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)于40℃常压水浴提取60 min,每10 min搅拌1次。Am PR10-16提取率0.063 g·g~(-1)。结论:优化的提取工艺能正确反映Am PR10-16提取率的最高相对量,为Am PR10-16的进一步研究提供了稳定、合理、可行的提取工艺。     

基于~1H-NMR代谢组学的酸枣仁改善失眠大鼠睡眠作用机制研究

目的利用氢核磁共振(~1H-NMR)代谢组学技术研究酸枣仁对对氯苯丙氨酸(PCPA)诱导的失眠大鼠血清内源性代谢物的影响,探讨酸枣仁改善睡眠的作用机制。方法大鼠ipPCPA溶液(400mg/kg)制备失眠模型,采用1H-NMR代谢组学技术,以主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)及正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等多元统计分析方法为手段,对各组大鼠血清代谢物进行分析,筛选出潜在生物标志物;借助MatPA分析构建潜在靶标代谢通路和代谢网络。结果 1H-NMR代谢组学分析方法共筛选11种与失眠相关的潜在生物标志物;通过MatPA分析得到8条潜在靶标代谢通路,包括谷氨酸和谷氨酰胺代谢,牛磺酸和亚牛磺酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸的代谢,乙醛酸和二羧酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙酮酸代谢,色氨酸代谢,三羧酸(TCA)循环。酸枣仁中剂量(15 g/kg)和高剂量(30 g/kg)均可显著回调11种潜在生物标志物。结论酸枣仁可通过调控失眠大鼠的能量代谢和氨基酸代谢,使大鼠内源性代谢物趋近正常水平,为进一步阐明酸枣仁改善睡眠的作用机制提供依据。     

UPLC-ELSD法快速测定生脉注射液中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量

目的：建立生脉注射液中主要单糖和双糖含量的快速测定方法。方法：采用超高效液相色谱结合蒸发光散射检测器（UPLC-ELSD）同时测定果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量。样品经ACQUITYUPLC BEH Amide（2.1 mm×150 mm,1.7 μm）色谱柱分离,柱温35℃。流动相为乙腈（含0.2%三乙胺）-水（75：25）,流速0.2 mL·min^-1。ELSD检测器漂移管温度55℃,氮气压力40.0 psi。结果：4个成分在各自范围内线性关系良好。果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的平均回收率分别为101.6%、99.1%、99.6%、97.9%。生脉注射液中果糖含量最高,3个生产企业的7批样品糖类成分含量差异较大。结论：该方法简便、快速、灵敏、准确,可为中药注射剂的质量控制和物质基础研究提供参考。     

UHPLC-Q-Orbitrap HRMS快速鉴定羊红膻药材的化学成分

目的:应用超高液相色谱四级杆-静电场轨道肼高分辨质谱联用(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)技术,快速识别与鉴定羊红膻药材中主要化学成分。方法:采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2. 1 mm×50 mm,1. 7μm),流动相0. 1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)进行梯度洗脱。质谱采用ESI源,负离子一级全扫描-数据依赖性二级质谱扫描(MS2)模式采集数据。通过高分辨质谱数据解析,并结合对照品数据和相关文献对羊红膻药材中的化学成分进行识别和鉴定。结果:通过精确相对分子质量和二级碎片离子分析,并结合对照品确认、质谱裂解规律和相关文献检索,共鉴定29个化合物,包括绿原酸类化合物19个,黄酮类7个,小分子有机酸3个,其中除木犀草素葡萄糖醛酸苷和芹菜素葡萄糖醛酸苷外,其余27个化合物为首次从该药材中发现。结论:建立的UHPLC-Q-Orbitrap HRMS可快速鉴定羊红膻药材中的化学成分,研究结果为其药效物质基础、质量控制以及临床应用等研究提供了科学的依据。     

以连翘苷为内参物的一测多评法用于山西连翘药材品质评价研究

目的 建立山西连翘药材6种主要成分(松脂醇-β-D-葡萄糖苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、芦丁、连翘苷及连翘酯素)含量测定的一测多评法,用于山西连翘药材的品质评价。方法 Hypersil C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),水-甲醇进行梯度洗脱。以连翘苷为内参物,建立其余成分(松脂醇-β-D-葡萄糖苷、连翘酯苷A、连翘酯苷B、芦丁、连翘酯素)的相对校正因子,并计算其含量,实现一测多评法。比较一测多评法计算值与外标法实测值的差异,以验证一测多评法的准确性和可行性。结果 采用一测多评法计算值与外标法实测值的相对误差<5%,2种方法计算结果之间无显著差异。结论 本实验建立的相对校正因子重复性良好,建立的一测多评法用于山西连翘药材品质评价准确、可行。     

蒙古黄芪中2种具有免疫活性的可溶性粗蛋白提取工艺优选

目的优选蒙古黄芪Astragalus membranaceus mongholicus中2种免疫活性蛋白Am PR10-16k Da和HQGP-2的最佳提取工艺。方法以蒙古黄芪中所含可溶性蛋白Am PR10-16k Da和HQGP-2二级结构的圆二色性对提取温度和提取溶剂种类进行考察;对该2种蛋白提取条件进行单因素考察,并采用L9(34)正交试验设计法,采用Image凝胶图形分析软件以Am PR10-16k Da和HQGP-2在SDS-PAGE凝胶图中的蛋白条带灰度值(峰面积)为指标,考察提取温度、料液比、提取时间、提取溶剂(p H值)、药材粒度、提取次数对Am PR10-16k Da和HQGP-2蛋白条带灰度值的影响,从而确定Am PR10-16k Da和HQGP-2的最佳提取工艺,辅以其免疫抑制率(CCK-8法)和可溶性蛋白定量测定(BCA法)作为佐证。结果建立了蒙古黄芪中Am PR10-16k Da和HQGP-2的最佳提取工艺:向药材粉末(过4号筛)5.0 g中加入16倍量Tris-HCl,在温度40℃条件下恒温提取60 min,以100 r/min搅拌。蒙古黄芪蛋白质提取率为65 mg/g,且质量浓度为90μg/m L粗蛋白的免疫抑制率为90.90%。结论优化的提取工艺能正确反映Am PR10-16k Da和HQGP-2收率的最高相对量,为Am PR10-16k Da和HQGP-2的进一步研究提供了稳定、合理、可行的提取工艺。     

麦粒灸对肺炎链球菌肺炎大鼠肺泡巨噬细胞的免疫调节作用

目的:观察麦粒灸对肺炎链球菌肺炎大鼠肺泡巨噬细胞(AM)的免疫调节作用。方法:将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、麦粒灸组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠制备肺炎链球菌肺炎模型。造模成功后,麦粒灸组大鼠于大椎、关元及双侧足三里、肺俞穴行7 d麦粒灸治疗。观察各组大鼠一般情况,血常规检测外周血白细胞计数,ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)含量,HE染色观察肺组织病理学变化,中性红法检测AM吞噬功能,qRT-PCR及Western blot分别检测M1、M2型AM标记物CD86、CD206 mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠精神懈怠,皮毛晦暗,外周血白细胞计数和血清TNF-α、IL-10含量均升高,肺组织出现病理损伤,AM吞噬OD值降低,CD86 mRNA及蛋白水平升高,CD206 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05)。与模型组比较,麦粒灸组大鼠精神及皮毛状态改善,外周血白细胞计数降低,血清TNF-α、IL-10含量降低,肺组织病理损伤改善,AM吞噬OD值升高,CD86 mRNA及蛋白水平降低,CD206 mRNA及...     

PRSS2 regulates EMT and metastasis via MMP-9 in gastric cancer

Serine protease 2 (PRSS2) is upregulated in gastric cancer tissues, correlates with poor prognosis and promotes migration and invasion of gastric cancer cells. However, the exact mechanism by which PRSS2 promotes metastasis in gastric cancer is unclear. We examined serum PRSS2 levels in healthy controls and gastric cancer patients by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and analyzed the correlation between PRSS2 serum level with the clinicopathological characteristics of gastric cancer patients and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) expression. A lentiviral MMP-9 overexpression vector was constructed and used to transfect gastric cancer cells with stable silencing of PRSS2, and migration, invasion and epithelial-mesenchymal transition (EMT) of gastric cancer cells were examined. High serum PRSS2 levels were detected in gastric cancer patients and associated with lymphatic metastasis and TNM stage. Serum PRSS2 was positively correlated with serum MMP-9 level. PRSS2 silencing inhibited EMT, and knock-down of PRSS2 partially abrogated cell metastasis and EMT caused by overexpression of MMP-9. These results suggest that PRSS2 promotes the migration and invasion of gastric cancer cells through EMT induction by MMP-9. Our findings suggest that PRSS2 may be a potential early diagnostic marker and therapeutic target of gastric cancer.     

基于PI3K/AKT通路研究升降通癃方对前列腺增生细胞的影响

目的:研究升降通癃方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对前列腺增生细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养人前列腺增生细胞(BPH-1),随机分为对照组、升降通癃方低、中、高浓度组、阳性组五组,分别给予各组需要的药物处理24 h后,通过四唑盐比色法(CCK8法)检测药物对BPH-1细胞增殖的影响;用细胞划痕实验测定BPH-1的水平迁移能力;通过流式细胞术(FCM)检测升降通癃方对BPH-1细胞细胞凋亡的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测药物对细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、重组人α晶状体球蛋白B(Cryab)蛋白表达的影响。结果:加入升降通癃方后,BPH-1的迁移能力明显受到抑制,升降通癃方高、中、低浓度组比较差异有统计学意义(均P<0.05);FCM检测结果显示,升降通癃方组低、中、高浓度组的细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Weste...