大力华酒对D-gal致衰老小鼠脑组织的抗衰老作用及免疫力影响的实验研究

目的:观察大力华酒对D-半乳糖(D-gal)致衰老小鼠脑组织的抗衰老作用及其免疫力的影响。方法:60只健康昆明小鼠,随机分为6组,即大力华酒高、中、低剂量组、阳性对照组、衰老模型组、正常对照组,每组各10只。以D-gal制备亚急性衰老小鼠模型,大力华酒高、中、低剂量组灌胃相应剂量药酒,阳性对照组给予中国劲酒,空白对照组与模型组用等体积蒸馏水灌胃。6周后,计算脾脏指数,测定脑组织的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果:与模型组比较,该酒可明显升高D-gal致衰老小鼠的脾脏指数(P0.01,P0.05);可使衰老小鼠脑组织SOD和GSH-Px活性明显升高(P0.05),MDA和NO含量明显下降(P0.05)。与正常组比较,其低剂量组小鼠脑组织MDA含量有明显升高(P0.05)、GSH-Px活性显著下降(P0.05)。结论:大力华酒能提高D-gal致衰老模型小鼠的免疫功能,对脑组织的衰老有一定的延缓作用,其作用机制可能与能清除过多自由基、阻止脂质过氧化物的产生等有关。     

The risks and external effects of diabetic foot ulcer on diabetic patients: A hospital‐based survey in Wuhan area,China

Diabetic foot ulcer (DFU) is a common complication observed in diabetic patients and affects diabetic patients in multiple ways. Severe DFU even leads to amputation in many cases. Early detection and intervention of DFU in diabetic patients can significantly relieve the pain caused by the ulcer and also keep patients from losing limbs in severe cases. In this study, the risks of diabetic patients getting DFU were estimated through a hospital‐based survey. This survey collected information from hospitalized diabetic patients in Wuhan City, Hubei Province, China, using a questionnaire. This investigation includes studies from two stages with 502 diabetic patients from 20 hospitals in Wuhan City. The results suggested that patients with a long history of diabetes are often associated with a high risk of DFU (χ² = 11.428, p = 0.0007), smoking (χ² = 8.386, p = 0.0007), diabetic complications (χ² = 13.484, p < 0.0001), and especially patients with diabetic foot complications (χ² = 57.6621, p < 0.0001). Foot lesions appeared to be important attributors to DFU since our data demonstrated close correlations between DFU and patients with calluses/corns (χ² = 4.584, p = 0.0323), tinea pedis (χ² = 4.030, p = 0.0447), and cracked skin (χ² = 8.712, p = 0.0032). Only a small number of patients seek for the assistance from specialists, such as trimming toenails (3.4%), removing corn or calluses (1.4%) or treating wounds (11.78%), when they are suffering from foot problems. The findings of this study can potentially be utilized to develop an early DFU diagnostic method in diabetic patients and can provide objective evidence for suggesting that patients who are suffering from foot problems should seek professional help.     

血管内皮生长因子及低氧诱导因子 -1α与糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的关系研究

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)及低氧诱导因子-1α(HIF-1α)与糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄关系.方法 选取2016年9月至2018年2月华中科技大学同济医学院附属梨园医院糖尿病合并动脉狭窄病人188例,均行动脉支架植入治疗,支架植入前检测病人血清VEGFA及HIF-1α,糖、脂代谢指标及血清C反应蛋白(CRP),对病人追踪随访6个月,按是否发生冠脉再狭窄分为再狭窄组98例,未再狭窄组90例,比较两组病人VEGF及HIF-1α,糖、脂代谢指标及血清CRP水平差异,采用logistic分析糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的风险因素.采用Pearson检验分析VEGF、HIF-1α与CRP的相关性.绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),分析VEGFA及HIF-1α对糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的预测效能.结果 再狭窄组及未再狭窄组病人血清糖化血红蛋白(HbA1c)≥7.2％、总胆固醇(TC)≥5.7 mmol/L、VEGF≥106.4 pg/mL、HIF-1α≥217.4 ng/mL、小而密低密度脂蛋白胆固醇(sLDLc)≥3.4 mmol/L、CRP≥11.6 mg/L、病变在分支动脉,支架植入长度≥3.4 cm、支架数目为2个及以上、支架直径<4.2 mm所占比例差异有统计学意义(63/98比34/90,64/98比31/90,61/98比31/90,63/98比27/90,62/98比40/90,62/98比17/90,71/98比41/90,62/98比34/90,26/98比10/90,71/98比31/90,均P<0.05).多因素logistic回归分析结果显示,VEGF、HIF-1α、HbAH1c、CRP水平是动脉支架植入术后再狭窄的独立风险因素,支架直径是保护性因素(P<0.05).相关分析结果显示,VEGF、HIF-1α与CRP水平呈现正相关关系(P<0.05).VEGF、HIF-1α、CRP对糖尿病合并动脉狭窄病人支架植入术后再狭窄的评估效能:ROC-AUC(95％CI)分别为0.665(0.412～0.916)、0.761(0.552～0.971)、0.636(0.323～0.944).结论 糖尿病合并动脉狭窄病人血清VEGF、HIF-1α水平与支架植入术后再狭窄密切相关,检测血清VEGF、HIF-1α水平对冠脉再狭窄的发生具有较好的预测价值.     

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株筛选

背景:有研究表明富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)基因在神经胶质瘤细胞中呈低表达,LRIG1基因过表达后对神经胶质瘤细胞的 LRIG1 mRNA和蛋白表达均明显增强和抑制其生物学行为,但却很少有研究从阻断LRIG1基因的表达的角度进行论证.目的:构建针对LRIG1基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人脑胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响.方法:根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1和LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negative shRNA.合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列.用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15细胞的筛选浓度.将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株.Western blot检测LRIG1蛋白的表达.结果与结论:构建的重组pGenesil2-LRIG1- shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明其序列插入正确.转染pGenesil2- LRIG1-shRNA1(LRIG11)细胞和pGenesil2- LRIG1-shRNA2(LRIG12)细胞LRIG1蛋白表达水平较阴性对照组pGenesil2-negative shRNA分别下降47.9%(P < 0.01)和32.8% (P > 0.05).结果证实,实验成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体pGenesil2-LRIG1-shRNA1,其转染GL15细胞后可抑制LRIG1的表达.     

胡黄连苷Ⅱ对慢性应激抑郁大鼠的治疗作用及其机制

［摘要］目的观察胡黄连苷Ⅱ抗抑郁作用,探讨其作用机制。方法雄性SD大鼠96只,随机分为6组,每组16只。正常组、模型组给予等剂量0.9%氯化钠注射液,胡黄连苷Ⅱ低、中和高剂量组分别给予1,3,10 mg&;#8226;kg 1胡黄连苷Ⅱ,丙米嗪组给予15 mg&;#8226;kg 1 丙米嗪,腹腔注射给药,持续14 d。通过强迫游泳（FST）、敞箱实验（OFT）观察应激后各组大鼠行为学的变化。采用放射免疫方法检测大鼠血浆促肾上腺皮质激素（ACTH）和皮质酮（CORT）的水平。结果经慢性应激21 d后,模型组中FST不动时间增加,OFT水平与垂直得分下降,血浆ACTH、CORT含量增高,与正常组比较均差异有统计学意义（P＜0.05）。经1,3,10 mg&;#8226;kg 1胡黄连苷Ⅱ和阳性对照药丙米嗪治疗14 d后,大鼠FST不动时间降低、OFT水平与垂直得分增高,血浆中ACTH、CORT含量降低,与模型组比较均差异有统计学意义（P＜0.05）。结论胡黄连苷Ⅱ具有缓解抑郁模型行为学损伤的作用,其机制可能与其调节慢性应激大鼠血浆ACTH和CORT的水平有关。     

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株筛选

背景：有研究表明富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)基因在神经胶质瘤细胞中呈低表达,LRIG1基因过表达后对神经胶质瘤细胞的 LRIG1 mRNA和蛋白表达均明显增强和抑制其生物学行为,但却很少有研究从阻断LRIG1基因的表达的角度进行论证。 目的：构建针对LRIG1基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人脑胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响。 方法：根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1和LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negative shRNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15细胞的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western blot检测LRIG1蛋白的表达。 结果与结论：构建的重组pGenesil2-LRIG1- shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明其序列插入正确。转染pGenesil2- LRIG1-shRNA1(LRIG11)细胞和pGenesil2- LRIG1-shRNA2(LRIG12)细胞LRIG1蛋白表达水平较阴性对照组pGenesil2-negative shRNA分别下降47.9%(P < 0.01)和32.8% (P > 0.05)。结果证实,实验成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体pGenesil2-LRIG1-shRNA1,其转染GL15细胞后可抑制LRIG1的表达。     

武汉地区缺血修饰白蛋白参考区间的建立

目的建立武汉地区缺血修饰白蛋白(IMA)的参考区间。方法 1016名健康体检者来自武汉大学医学院附属湖北省人民医院、华中科技大学同济医学院附属同济医院、华中科技大学同济医学院附属梨园医院和武汉市第一医院。测定所有体检者的IMA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清白蛋白(Alb)、血清葡萄糖(Glu)、肌酐(Cr)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)和心电图(ECG),排除Alb、ALT、Glu、Cr、TG、TC和ECG异常者后,计算并删除IMA的离群值,统计剩余的911名健康体检者的IMA检测结果。按性别、年龄分组计算参考区间。结果男性、女性IMA水平间差异无统计学意义,<30岁人群的IMA参考区间为≥67.0 U/mL,≥30岁人群的IMA参考区间为≥64.4 U/mL,参考区间的差异是由Alb浓度的差异导致的。结论 IMA参考区间的规范建立对IMA检测结果解释及临床应用有重要价值。     

黄芪螺旋藻分散片的研制

目的制备黄芪螺旋藻分散片并对其性能进行考察。方法以外观、分散均匀度、崩解时间为指标筛选填充剂和崩解剂。结果填充剂以微晶纤维素、崩解剂以交联聚维酮、羧甲基淀粉钠按一定比例混合使用效果最优,其崩解时间、分散均匀度达到中国药典(2005版第二部)要求。结论研制的黄芪螺旋藻分散片处方合理,体现了分散片的特点。     

右美托咪定减轻兔脊髓缺血再灌注损伤的机制研究*

目的 探讨右美托咪定（Dex）对兔脊髓缺血再灌注损伤（SCIRI）的保护作用及潜在分子机制。方法 采用成年新西兰大耳白兔复制SCIRI模型。实验一：42只兔随机分为7组,分别于灌注前（0?h）及再灌注后3?h、6?h、12?h、24?h、36?h及48?h 7个不同时间点,用Western blotting法检测脊髓组织磷酸化的Janus激酶2（p-JAK2）、磷酸化的信号转导与转录激活因子3（p-STAT3）的表达。实验二：36只兔随机分为对照组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）及Dex干预组（Dex+I/R组）。Sham组分离腹主动脉后,不做缺血处理。I/R组和Dex+I/R组,分离腹主动脉并夹闭30?min,以诱导脊髓组织缺血。脊髓缺血前30?min,Dex+I/R组静脉给予Dex [10?μg/（kg·h）,直至再灌注后1?h。再灌注后48?h对兔后肢运动功能进行Tarlov评分,苏木精-伊红（HE）染色观察脊髓组织病理学改变,原位末端转移酶标记（TUNEL）检测神经细胞凋亡情况,伊文思蓝检测血-脑屏障的渗透性,Western blotting法检测脊髓组织p-JAK2、p-STAT3、活化型半胱天冬酶-3（Cleaved caspase-3）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的表达。结果 实验一：与灌注前（0?h）比较,再灌注后6?h、12?h、24?h及36?h脊髓组织p-JAK2、p-STAT3的表达增加（均P?<0.05）,并于24?h到达峰值。实验二：再灌注后48?h,Dex+I/R组的Tarlov评分增加（P?<0.05）,脊髓组织损伤减轻;Dex处理能够降低脊髓神经细胞凋亡率（P?<0.05）,并减少脊髓组织中伊文思蓝的渗透量（P?<0.05）;Dex上调p-JAK2、p-STAT3的表达（P?<0.05）,并下调Cleaved caspase-3、TNF-α和IL-6的表达（P?<0.05）。结论 再灌注阶段,存在JAK2/STAT3保护性通路的激活,但这种激活作用并未维持;Dex可通过激活JAK2/STAT3信号通路、抑制凋亡蛋白（Cleaved Caspase-3）和炎症因子（TNF-α,IL-6）表达,从而减少神经细胞凋亡并维持血-脑屏障的完整性,减轻SCIRI。