HSV-TK/GCV系统在难治性卵巢癌裸鼠移植瘤模型中的实验研究

目的:建立人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠模型,用HSV-TK/GCV自杀基因系统治疗模型动物,观察疗效及协同因素。方法:常规培养携带HSV-TK基因的重组逆转录病毒包装细胞PA317,测定病毒滴度。在移植瘤内多点注射包装细胞,观察GCV、ATRA、TPT对移植肿瘤独立及协同治疗后的肿瘤体积变化。治疗结束后分析移植肿瘤组织病理,PCR检测TK基因在NIH3T3细胞及移植肿瘤组织的转导。结果:人卵巢癌标本裸鼠原代移植成功率16.7%,鼠间传代移植成功率89.7%;重组逆转录病毒滴度为6×104cfu/ml;HSV-TK/GCV系统或TPT治疗后肿瘤生长受到抑制(P<0.05),两者联合治疗后,抑制更明显(P<0.05);ATRA灌胃未显示独立或协同治疗作用(P>0.05);HSV-TK/GCV组、TPT组及两者联合组有明显的治疗反应;PCR检测证实,TK基因在NIH3T3细胞及肿瘤组织中的转导。结论:HSV-TK/GCV系统及TPT对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠有单独及协同治疗作用,全反式维甲酸灌胃对人难治性卵巢癌荷瘤裸鼠疗效不明显。     

1,6-二磷酸果糖镁盐对大鼠实验性心肌线粒体损伤的治疗作用

 目的观察1,6-二磷酸果糖镁盐(FDP-Mg)对由异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌线粒体缺血性损伤的治疗作用。方法采用皮下多点注射Iso致大鼠心肌缺血损伤模型,静脉分别予FDP-Mg100mg·kg^-1及FDP-Na120mg·kg^-1和MgSO₄30mg·kg^-1进行治疗,观察心肌细胞及线粒体超微结构的变化,测定药物对缺血损伤的心肌细胞内的线粒体膜电位的影响及对线粒体肿胀的抑制率。同时利用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶氧自由基发生系统和CuSO₄/细胞色素C羟自由基发生系统分别检测药物对超氧阴离子(O₂^-)和羟自由基(·OH)的清除率。结果FDP-Mg可以显著改善由Iso所诱导的线粒体膜电位异常改变,抑制线粒体肿胀。且对·OH和O₂^-有较高的清除率,与对照组相比有显著差异。电镜显示FDP-Mg对维持线粒体的正常形态有明显作用。结论FDP-Mg可有效保护由Iso所致的心肌细胞的线粒体实验性缺血损伤。     

铽离子增敏环丙沙星研究及其应用

 目的建立胶囊和血样中环丙沙星的含量测定方法。方法在醋酸-醋酸钠缓冲液(pH6.0)中,铽(Tb³⁺))能与环丙沙星(ciprofloxacin)形成络合物,该络合物吸收紫外光后,能发射铽的特征荧光。λ_ex/λ_em=325.0/545.0,狭缝均为5nm。结果线性范围1.0×10^-8～1.0×10^-6mol·L^-1。回归方程为F=8.26×10⁸c+18.5(r=0.9999)(c:mol·L^-1);检出限为3.5μg·L^-1。结论该法用于血清和胶囊中环丙沙星的含量测定,简单、快速、灵敏,结果令人满意。     

Caco-2 细胞对人参皂苷Rg3的摄取及代谢研究

目的 :研究Caco 2细胞对人参皂苷Rg3的摄取、代谢及其动力学变化。方法 :采用液相色谱质谱联用 (HPLC MS)检测方法测定细胞中Rg3及其代谢产物Rh2药物浓度 ,考察时间、pH值、温度、药物浓度及抑制剂对Rg3摄取速率及代谢物产量的影响。结果 :Rg3在Caco 2细胞上的摄取是时间及浓度依赖性的 ,其被动转运系数Kd 为 0 .0 7nmol·h-1·mg-1prot ;最大摄取速率Vmax为 3.32nmol·h-1·mg-1prot;Km是 16 .31μmol·L-1。加入代谢抑制剂叠氮化钠及2 ,4 二硝基酚时摄取速率明显降低 (与对照组相比P <0 .0 1)。结论 :Caco 2细胞模型适用于人参皂苷的吸收机制研究 ;Rg3在肠道中的代谢为其生物利用度低的原因之一。     

大鼠一次性灌服虎杖提取物后白藜芦醇血浓度测定方法的研究

目的 :研究大鼠血浆中白藜芦醇含量的测定方法。方法 :采用液 -液萃取反相高效液相色谱梯度洗脱法对大鼠血浆样品中的白藜芦醇含量进行测定。结果 :因为血浆中白藜芦醇在 0 .0 0 35～1.4 0 0mg·L-1线性范围内关系良好 (r =0 .9998) ,最低定量限为 0 .0 35mg·L-1;低、中、高三种浓度下的回收率、日内及日间精密度均符合方法学要求。故用本法测定大鼠一次性灌服虎杖提取物后白藜芦醇的血药浓度并计算药代动力学参数 ,半衰期t1 2 =11.5min ,达峰时间tmax=10 .0min ,达峰浓度Cmax=1.93mg·L-1。结论 :本法符合生物样品分析要求 ,可用于体内白藜芦醇浓度测定     

反相高效液相色谱法测定犬血浆中左氧氟沙星浓度及其犬体内药代动力学

目的 :建立测定犬体内左氧氟沙星血药浓度的反相高效液相色谱法 ,并测定其犬体内药代动力学。方法 :以环丙沙星为内标 ,采用 10 %高氯酸为沉淀剂处理犬血浆样品 ,色谱柱为DIKMADiamon silTM C18,5m ,15 0mm× 4 .6mm ,流动相为甲醇 PBS 三乙胺 异丙醇 (33 6 7 0 .14 0 .4 ,用磷酸调pH为 3.0 ) ,流速 1.2ml·min-1,柱温 2 0℃ ,荧光检测(λex=2 95nm ,λem=4 40nm)。结果 :血药浓度线性范围 0 .2 5～ 5 0mg·L-1(r =0 .9998) ,最低检测限浓度为 0 .0 2mg·L-1(S N >3) ,绝对回收率为 83.0 %～85 .6 % (n =5 ) ,方法回收率为 92 .10 %～ 10 6 .77%(n =5 ) ,日内和日间RSD分别为 1.3%～ 4 .0 %和1.8%～ 8.2 % (n =5 )。结论 :本方法简便、灵敏、精密度高 ,重现性好 ,适用于左氧氟沙星犬体内药代动力学研究及生物等效性研究     

垫状卷柏提取物诱导凋亡抗肿瘤作用研究

目的 研究垫状卷柏提取物抗肿瘤作用及相关机制。方法 采用皮下接种H22肝癌细胞株构建小鼠H22肝癌移植瘤模型,随机分为对照组（生理盐水）、5-FU组（30 mg/kg）、垫状卷柏提取物（SP）高、低剂量组（189、63 mg/kg）,连续灌胃15 d。观察小鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率及肝、脾、胸腺指数;TUNEL法观察肿瘤组织细胞凋亡,Western blot测定凋亡相关蛋白的表达,qPCR检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA。结果 与对照组比较,SP高、低剂量组小鼠体质量及肝、脾、胸腺指数均无显著差异;SP高、低剂量组小鼠的肿瘤质量均显著降低,呈现较高抑瘤率（P<0.01）,且高剂量组与5-FU组相近;经TUNEL染色法观察,可见明显凋亡形态改变。qPCR检测表明,SP显著上调Bax mRNA的表达,下调Bcl-2 mRNA的表达。Western blot结果显示SP处理后,Bax、cytochrome c及cleaved caspase-3,caspase-8和caspase-9的表达显著上调（P<0.01）,Bcl-2表达明显减弱,呈剂量依赖性。结论 SP有效抑制H22小鼠体内肿瘤生长,其机制与激活caspase诱导凋亡相关。      

超声学检查对鼻咽癌颈淋巴结肿大的诊疗价值

目的:观察鼻咽癌颈部肿大淋巴结超声学特点,评价超声学检查对鼻咽癌颈部肿大淋巴结的诊疗价值。方法:对33例病理确诊为鼻咽癌颈部肿大淋巴结患者,在放疗前后进行超声学对比检查,对放疗后残留者随访观察,记录淋巴结大小、回声、结构、血流分级,对血流分级Ⅰ级以上者测定血流最大速度及阻力指数。结果:(1)B超较体检或MRI分别高出68.6%、43.3%的检出率。(2)放疗前1例患者淋巴结血流分级评为0级,5例显示在0级到Ⅰ级之间,Ⅰ级7例,Ⅱ级14例,Ⅲ级6例。Ⅰ级以上者肿大淋巴结血流最大速度Vmax位于0.13～0.42m/s,多数为0.14～0.25m/s;阻力指数RI位于0.46～0.89,多数为0.57～0.65;6例血流丰富评为Ⅲ级者,出现高阻力、高流速,RI0.67～0.88,Vmax0.23～0.42m/s。(3)放疗前后转移淋巴结超声学特点变化明显,淋巴结消失或直径变小,或者表现为回声增强,边界模糊,血流分级下降,呈0～Ⅰ级,血流速度下降,部分仅测得0.04～0.06m/s的静脉血供。结论:(1)超声学方法可作为鼻咽癌颈部转移淋巴结无创、定性的诊断方法;(2)淋巴结直径<2cm,无血流或血流<Ⅰ级,且淋巴结皮髓质境界分明者,即使CT或MRI检查提示淋巴结存在,仍可按非转移淋巴结观察随访;(3)直径1～2cm者,血流分级Ⅱ～Ⅲ级者,考虑转移淋巴结;(4)直径≥2cm,孤立肿大淋巴结,有无血流均考虑转移淋巴结。     

江苏省麻风治愈存活者慢性病患病现状及影响因素分析

目的:了解江苏省麻风治愈存活者慢性病患病现状,分析影响因素。方法:采用普查的方法,调查麻风院村内以及社会上的麻风治愈存活者(以下分别简称为住村组和居家组),了解他们的慢性病患病情况及影响因素。结果:共有12724例麻风治愈存活者完成了该项调查,包括803例麻风院村内休养员和11921例院外治愈存活者,其中男8969例,女3755例。高血压、高血脂、冠心病、脑卒中、糖尿病、肿瘤、精神病患病率分别为28.7%、2.9%、5.2%、2.8%、5.3%、2.0%、0.4%。住村组、女性、非农业户口、高年龄为麻风治愈存活者的慢性病患病的危险因素(P<0.05)。结论:麻风治愈存活者不仅有生理畸残和心理障碍,还面临着慢性病如高血压、糖尿病等困扰。     

PXR activation impairs hepatic glucose metabolism partly via inhibiting the HNF4α–GLUT2 pathway

Drug-induced hyperglycemia/diabetes is a global issue. Some drugs induce hyperglycemia by activating the pregnane X receptor (PXR), but the mechanism is unclear. Here, we report that PXR activation induces hyperglycemia by impairing hepatic glucose metabolism due to inhibition of the hepatocyte nuclear factor 4-alpha (HNF4α)‒glucose transporter 2 (GLUT2) pathway. The PXR agonists atorvastatin and rifampicin significantly downregulated GLUT2 and HNF4α expression, and impaired glucose uptake and utilization in HepG2 cells. Overexpression of PXR downregulated GLUT2 and HNF4α expression, while silencing PXR upregulated HNF4α and GLUT2 expression. Silencing HNF4α decreased GLUT2 expression, while overexpressing HNF4α increased GLUT2 expression and glucose uptake. Silencing PXR or overexpressing HNF4α reversed the atorvastatin-induced decrease in GLUT2 expression and glucose uptake. In human primary hepatocytes, atorvastatin downregulated GLUT2 and HNF4α mRNA expression, which could be attenuated by silencing PXR. Silencing HNF4α downregulated GLUT2 mRNA expression. These findings were reproduced with mouse primary hepatocytes. Hnf4α plasmid increased Slc2a2 promoter activity. Hnf4α silencing or pregnenolone-16α-carbonitrile (PCN) suppressed the Slc2a2 promoter activity by decreasing HNF4α recruitment to the Slc2a2 promoter. Liver-specific Hnf4α deletion and PCN impaired glucose tolerance and hepatic glucose uptake, and decreased the expression of hepatic HNF4α and GLUT2. In conclusion, PXR activation impaired hepatic glucose metabolism partly by inhibiting the HNF4α‒GLUT2 pathway. These results highlight the molecular mechanisms by which PXR activators induce hyperglycemia/diabetes.Key words: Pregnane X receptor, Hepatocyte nuclear factor 4-alpha, Glucose transporter 2, Hepatic glucose uptake, Diabetes, Drug-induced hyperglycemia