甲基化硒酸对人前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响

目的：观察甲基化硒酸（MSA）对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法观察1.25、2.50和5.00 μmol•L^-1MSA对DU145细胞增殖活力的抑制作用；吖啶橙染色观察MSA诱导细胞凋亡情况；流式细胞术分析细胞周期及凋亡，并计算细胞平均凋亡指数；免疫细胞化学技术观察细胞内激活的caspase-3的表达情况。结果：经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理48　h后，DU145细胞生长抑制率分别为16.35%、38.10%和73.54%，3组间比较差异有显著性（P<0.01），随MSA浓度升高细胞生长抑制率增加，呈明显的剂量依赖性。吖啶橙荧光染色可见，经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理后的细胞呈明显凋亡形态，并随药物剂量增加凋亡细胞数增多；流式细胞术结果显示，经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理48 h后，细胞凋亡率分别为5.34%、8.71%和13.60%，3组间比较差异有显著性（P<0.05）,随MSA浓度升高细胞凋亡率升高，呈剂量依赖关系；免疫细胞化学染色结果显示，随着MSA剂量增加，细胞内激活的caspase-3表达上调。结论:MSA对DU145细胞具有明显的抗肿瘤作用，其机制可能与激活的caspase途径诱导细胞凋亡有关。     

二氢杨梅素对糖耐量异常大鼠氧化和非酶糖基化的影响

目的:研究二氢杨梅素对糖耐量异常大鼠氧化和非酶糖基化的影响。方法: 以D-半乳糖为诱导剂，采用剂量递增全程腹腔注射法建立糖耐量异常动物模型。以二氢杨梅素为受试物，二甲双胍降糖药为阳性对照，实验8周后，测定各实验组大鼠空腹及餐后2 h血糖、血清胰岛素水平、血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量、血清糖化血红蛋白（GHb）和晚期糖基化终末产物（AGEs）含量。结果: 与模型组比较，二氢杨梅素组餐后2 h血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数显著降低(P<0.05)，血清GSH-Px活性明显增高（P<0.05），血清MDA含量及AGEs水平显著降低(P<0.05)，各组大鼠血清GHb含量和SOD活性差异无显著性(P>0.05)。结论: 二氢杨梅素可通过提高机体GSH-Px抗氧化酶活性及抑制非酶糖基化作用，降低机体氧化应激水平和胰岛素抗性，促进外周组织对血糖的利用，从而明显改善大鼠糖耐量异常状态。     

氧化苦参碱对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的中枢机制

目的：探讨氧化苦参碱（OMT）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的作用及其中枢机制。方法：采用结扎大脑中动脉的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。外周给药大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、路路通组（LLT，31.25 mg•kg^-1）及OMT 35、70和105 mg•kg^-1 腹腔注射给药组；脑室给药大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、LLT 0.15 mg•kg^-1组及OMT 0.35 mg•kg^-1脑室注射给药组。以神经学评分及脑梗塞面积为指标观察OMT对大鼠局灶性脑缺血再灌注性损伤的保护作用，同时检测OMT脑室注射给药大鼠血清NO含量。结果：与脑缺血再灌注模型组比较，腹腔注射OMT 105 mg•kg^-1组神经学评分明显降低（P<0.05），OMT 70和105 mg•kg^-1组脑梗塞面积缩小（P<0.05）；与脑缺血再灌注模型组比较， OMT 0.35 mg•kg^-1脑室注射给药组大鼠脑梗塞面积缩小（P<0.05），血清NO含量明显降低（P<0.05）。结论：脑室注射OMT对局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑损伤具有明显的保护作用，中枢作用可能为其机制之一。     

高同型半胱氨酸血症兔动脉粥样硬化模型炎性介质的变化及意义

目的：探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)与动脉粥样硬化(AS)炎症反应的关系。方法：将20只雄性家兔随机分为对照组和实验组（每组10只），采用皮下注射DL-蛋氨酸制作HHcy模型，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组家兔血清同型半胱氨酸（Hcy）、IL-1β、IL-6和IL-8水平，并观察家兔主动脉病理学形态改变，免疫组化染色观察并计算核因子-κB(NF-κB)的阳性细胞数。结果：实验组血清Hcy、IL-1β、IL-6和IL-8水平明显高于对照组（P<0.05）；肉眼可见实验组家兔主动脉可见斑块形成，斑块部位的动脉壁增厚、变硬；镜下可见对照组主动脉血管内皮层内皮细胞及内弹力板连续规整，中膜平滑肌细胞排列整齐，实验组可见局部内皮细胞坏死脱落及内弹力板损伤断裂，中膜平滑肌细胞胞核固缩且排列紊乱；实验组NF-κB阳性细胞数明显高于对照组（P<0.05）。结论：炎性因子的过多分泌可能是HHcy促进AS的重要机制之一，而NF-κB在此过程中同样发挥了重要的介导作用。     

淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35所致大鼠学习记忆障碍的改善作用

目的观察淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法Wistar雄性大鼠,右侧海马内注射Aβ25-3510μg制备AD模型,次日起淫羊藿苷30,60和120mg.kg-1灌胃给药,连续14d,d15～19Morris水迷宫检测大鼠空间辨别学习记忆能力;d20检测海马组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)及一氧化氮合酶(NOS)的活性,免疫组化法检测海马内乙酰胆碱酯酶(AChE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达。结果与模型对照组比较,淫羊藿苷给药14d明显改善大鼠学习记忆能力;海马组织中SOD和GSH-PX活性升高,NOS活性降低;海马内AChE及ChAT的表达增加。结论淫羊藿苷可以改善Aβ25-35海马内注射所致AD模型大鼠的学习记忆能力,其作用可能与其增加AChE和ChAT表达,增强SOD和GSH-PX等自由基清除酶活性,降低NOS活性,减少NO释放等多种机制,促进胆碱能递质系统功能的恢复有关。     

hTERT启动子调控的TRAIL基因表达载体的构建及其对肝癌细胞增殖的抑制作用

目的：构建hTERT启动子调控的肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达载体,探讨其对肝癌细胞SMMC7721和肝细胞HL7702增殖的抑制作用。方法：采用分子生物学方法构建重组质粒pshuttle-TRAIL和pshuttle-hTERT-TRAIL,经PCR和酶切鉴定正确后,通过脂质体转染SMMC7721和HL7702细胞,同时转染pcDNA3.1+-GFP并用荧光显微镜检测转染效率。MTT法检测重组质粒对细胞增殖变化的影响。结果：成功构建重组质粒pshuttle-TRAIL和pshuttle-hTERT-TRAIL,荧光显微镜检测结果显示：质粒与脂质体的比例为1∶3时细胞转染效率最高。pshuttle-hTERT-TRAIL组SMMC7721细胞增殖抑制率从16 h开始明显增加,与对照组比较差异有显著性（P<0.001）,且从24 h开始与pshuttle-TRAIL组比较细胞增殖抑制率明显增加（P<0.05）;但重组质粒对HL7702细胞增殖抑制率无影响。结论： hTERT启动子调控的TRAIL可明显抑制肝癌细胞的增殖,而对人肝细胞的增殖无影响,其作用效果明显优于TRAIL单基因治疗。     

异氟醚对老年大鼠海马突触长时程增强效应的影响

目的：观察异氟醚对老年大鼠海马突触长时程增强(LTP)效应的影响,并探讨其影响老年大鼠认知功能的机制。方法：70只雄性老年SD大鼠,断头后取出海马组织,制备厚400 μm的海马脑片。取35张脑片,随机分为5组(n=7)：对照组、异氟醚0.062 5、0.125 0、0.250 0和0.500 0 mmol/L组。各组脑片分别灌流人工脑脊液(ACSF)、异氟醚0.062 5、0.125
0、0.250 0、0.500 0 mmol/L。采用细胞外微电极记录技术,记录海马脑片CA1区细胞外群体峰电位(PS)的变化。另取35张脑片,随机分为5组(n=7)：LTP组、异氟醚LTP 0.062 5、0.125 0、0.250 0和0.500 0 mmol/L组。各组脑片分别灌流ACSF、异氟醚0.062 5、0.125 0、0.250 0和0.500 0 mmol/L。海马脑片记录PS 30 min后,施以100 Hz的高频强直刺激(HFS),诱发LTP,观察各组脑片HFS后PS幅值的变化。结果：与对照组比较,异氟醚0.062 5 mmol/L组给药后PS幅值无明显改变(P>0.05),异氟醚0.125 0、0.250 0和0.500 0 mmol/L组给药后PS幅值明显降低(P<0.01)。LTP组HFS后PS幅值增高,较刺激前增加了(34±11)% (P<0.01)。与LTP组比较,异氟醚LTP 0.062 5、0.125 0、0.250 0和0.500 0 mmol/L组HFS后其PS幅值均明显降低(P<0.01)。结论：异氟醚能够抑制海马LTP的形成而影响老年大鼠的认知功能。     

磷酸二酯酶抑制剂对C型钠尿肽作用下家兔心房机械活动的影响

目的：观察磷酸二酯酶抑制剂（PDEI）对C型钠尿肽（CNP）作用下家兔心房机械活动及心房肌细胞内环核苷酸（cAMP,cGMP）浓度的影响。方法：采用大耳白兔麻醉后立即开胸取出心脏置于氧饱和的36.5℃生理盐水中,剥离左心房后立即固定在心房灌流装置上,用CNP及不同浓度PDEI检测心房搏出量和心房搏动压,采用放射免疫法测定cAMP和cGMP浓度。结果：①与对照循环组比较,CNP（30.0 nmol/L）组心房搏出量和心房搏动压明显降低（P<0.01）,cGMP的含量显著增加（P<0.001）,cAMP含量则无显著性变化 （P>0.05）。②与对照循环组比较,磷酸二酯酶(PDE)非选择性抑制剂IBMX组（1 000.0 nmol/L）心房搏出量和心房搏动压显著增加（P<0.001）,cAMP及cGMP的含量显著增加（P<0.001）;与IBMX组比较,IBMX（1 000.0 nmol/L）加CNP（30.0 nmol/L） 组心房搏出量、心房搏动压 、cAMP含量、cGMP含量则无显著性变化（P>0.05）。③与对照循环组比较,PDE2抑制剂EHNA（30.0 nmol/L）组心房搏出量和心房搏动压明显降低（P<0.05）,cAMP含量无显著性变化(P>0.05）;EHNA（30.0 nmol?L-1）加CNP（30.0 nmol?L-1）组心房搏出量和心房搏动压显著降低（P<0.01）,cAMP含量无显著性变化（P>0.05）;与EHNA组比较,EHNA加CNP组心房搏出量和心房搏动压明显降低（P<0.05）,cAMP含量无明显变化（P>0.05）。④与对照循环组比较,PDE3抑制剂milrinone（1.0 nmol/）组心房搏出量和心房搏动压增加,但差异无显著性（P>0.05）;cAMP含量则明显增高（P<0.05）;milrinone（1.0 nmol/L） 加CNP（30.0 nmol/L）组心房搏出量和心房搏动压显著降低（P<0.001）,cAMP含量明显增高（P<0.05）。与milrinone组比较,milrinone 加CNP组心房搏出量、心房搏动压显著降低（P<0.001）,cAMP含量则无明显变化（P>0.05）。结论：CNP抑制家兔心房机械活动,其机制与增加细胞内cGMP含量有关;不同PDEI对CNP抑制心房机械活动产生不同的影响。     

可分泌表达神经保护肽的重组慢病毒对闭合性脑损伤小鼠的神经保护作用

目的：通过滴鼻给药途径,给予闭合性脑损伤小鼠可分泌表达神经保护肽NAP的重组慢病毒,观察该重组病毒经鼻-脑通路对中枢神经系统的保护作用,为携带可分泌表达NAP的重组慢病毒治疗神经系统退行性疾病提供理论依据。 方法：选用8~12周成年雄性昆明小鼠54只,随机分为4组：空白对照组10只（Control组）、重锤加害组20只（CHI组）、重组慢病毒rLent/NT4-NAP保护组20只（rLent组）和重组慢病毒rLent/GFP组4只（GFP组）。观察各组小鼠的死亡率、神经功能损伤（NSS）评分、脑水肿含量和病理改变情况。应用共聚焦显微镜观测GFP组小鼠鼻黏膜、嗅神经和脑组织内绿色荧光表达情况。 结果：rLent组小鼠死亡率（15％）明显低于CHI组小鼠（55％）;rLent组小鼠NSS评分在创伤后1、3、5和7 d均显著低于CHI组（P<0.01）; rLent组小鼠创伤后24 h的脑水肿含量明显低于CHI组（P<0.01）;HE染色显示rLent组小鼠病理改变明显轻于CHI组;GFP组仅在鼻黏膜处可见呈条索样的绿色荧光,而在嗅神经及大脑则未发现绿色荧光。 结论：分泌表达NAP的重组慢病毒可感染鼻黏膜细胞,分泌表达的短肽NAP能够改善闭合性脑损伤小鼠的神经功能;未加装分泌表达元件的重组病毒rLent/GFP仅能感染鼻黏膜细胞,不能通过血脑屏障进入中枢神经系统。     

MIF和VEGF在卵巢癌组织中的表达及其与微血管密度的关系

目的：观察巨噬细胞移动抑制因子（MIF）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）在卵巢癌组织中的表达并计数微血管密度（MVD）,探讨MIF和VEGF与卵巢癌发生的关系及在卵巢癌血管生成中的作用。方法：利用免疫组织化学染色技术检测MIF、VEGF和第八因子相关抗原在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的表达;采用Image Pro Plus（IPP）6.0图像分析软件对结果进行分析。结果：MIF和VEGF在正常卵巢组织的实质细胞中不表达,在卵巢癌肿瘤细胞的胞浆呈阳性表达,且随着卵巢癌分化程度的降低,表达强度逐渐增强;低分化卵巢癌与高分化和中分化卵巢癌比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。低分化卵巢癌组织中的MVD(50.83±11.59)明显增加,与正常卵巢组织(18.16±2.26)、高分化(19.88±3.92)及中分化(31.1±3.08)卵巢癌组织比较差异有显著性（均P<0.01）。MIF表达与VEGF表达呈正相关（r=0.579　7,P<0.01）,MIF表达与卵巢癌MVD呈正相关（r=0.962　3,P<0.001）。结论：MIF的表达与卵巢癌的分化程度密切相关,MIF可能通过上调VEGF表达促进卵巢癌的肿瘤血管生成。