C2-神经酰胺在A549/PC9细胞凋亡中的作用及影响

目的 探讨C₂神经酰胺(鞘磷脂类物质之一)对非小细胞肺癌(A549和PC9)细胞凋亡的影响。方法 培养非小细胞肺癌细胞系(A549和PC9),提取总蛋白进行Western blot,检测两种细胞中凋亡蛋白Caspase-3及cleaved Caspase-3蛋白的表达情况;使用CCK-8比色法筛选药物浓度;Hoechst 33258凋亡染色检查细胞凋亡情况;流式细胞化学术检测细胞凋亡比率,RT-PCR检测凋亡蛋白Caspase-3的表达。结果 神经酰胺在50μmol/L浓度处理后细胞活力均在70%左右;与对照组相比,神经酰胺组凋亡蛋白表达升高(P<0.05);流式细胞化学术及凋亡染色检测显示神经酰胺处理组凋亡率与对照组相比增加(P<0.05);在基因水平检测mRNA显示凋亡蛋白Caspase-3表达增加(P<0.05)。结论 C₂-神经酰胺可以促使非小细胞肺癌细胞凋亡,从而为临床肺癌的化疗提供新的治疗靶点。     

毕赤酵母表达重组人凝血酶原2及活性分析

目的：通过毕赤酵母（Pichia pastoris）表达制备重组人凝血酶原2（prothrombin-2）,并利用锯鳞蝰（Echis carinatus）凝血酶原激活剂ecarin将其活化为凝血酶,分析凝血酶的活性。方法根据GenBank公布的人凝血酶原2和ecarin的cDNA序列,设计并优化合成凝血酶原2和ecarin基因。将凝血酶原2基因构建至表达载体pPICZαA中,转化并筛选重组凝血酶原2的糖基工程酵母菌,诱导工程酵母分泌表达凝血酶原2,培养上清中的目的蛋白经两步阳离子层析纯化制备,并利用酶切N-糖链和肽指纹图谱分析鉴定目的蛋白。将ecarin基因构建到表达载体pcDNA3．1（＋）,瞬转HEK 293T细胞,收集培养上清。将HEK 293T工程细胞培养上清与纯化的凝血酶原2反应,利用凝血酶发色底物S-2238,测反应产物的酶促活性;利用血浆纤维蛋白原测反应产物的血凝时间、分析血凝活性。结果酵母表达凝血酶原2的培养上清经纯化获得37×103的目的蛋白,去除N-糖链的蛋白相对分子质量降为35×103,与凝血酶原2理论分子量一致。经肽指纹图谱鉴定,纯化得到的蛋白为凝血酶原2。制备的凝血酶原2经HEK 293T细胞表达ecarin的培养上清处理后,可催化S-2238解离产生黄色的对硝基苯胺（pNA）,且pNA产生的光密度值随着处理的凝血酶原2的增加而升高;经ecarin处理的凝血酶原2能促进血浆凝结,与凝血酶试剂的血凝时间接近,且血凝时间随着处理的凝血酶原2的量减少而延长。结论利用毕赤酵母制备了重组人凝血酶原2,被ecarin活化为具有活性的凝血酶,有望替代从血浆中提取的凝血酶原,用于战伤救治和临床研究。     

长方案控制性促排卵过程中晚卵泡期孕酮变化趋势对体外受精-胚胎移植结局的影响

目的:探讨在控制性卵巢刺激(COS)周期中晚卵泡期孕酮(P)水平变化趋势对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)结局的影响。方法:回顾分析2013年1月至2014年6月在我中心行IVF-ET长方案助孕治疗的676个周期。按促排卵中晚卵泡期起始日(主导卵泡直径达13mm日)与人绒毛膜促性腺激素(HCG)注射日孕酮水平变化,分为升高趋势组和降低趋势组;按HCG日孕酮水平是否1.0ng/ml将升高趋势组和降低趋势组中新鲜移植周期分别分为A组(P≤1ng/ml)、B组(P1ng/ml)和C组(P≤1ng/ml)、D组(P1ng/ml)。结果:(1)升高趋势组与降低趋势组的卵裂率、优质胚胎率比较,差异有统计学意义(99.65%vs 99.00%,70.57%vs 63.09%;P0.05);(2)A组与B组的临床妊娠率、活产率比较,差异有统计学意义(56%vs 43.00%;50%vs 37.76%,P0.05);C组与D组的临床妊娠率、活产率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:IVF-ET长方案周期中,COS过程中孕酮变化呈升高趋势的优质胚胎率较降低趋势高;新鲜移植周期,P呈升高趋势时,HCG日P1.0ng/ml,活产率下降;呈降低趋势时,HCG日P水平不影响活产率。     

腹膜透析并发甲状旁腺功能亢进患者的认知功能及其相关因素分析

目的探讨维持性腹膜透析并发甲状旁腺功能亢进(secondary hyperparathyroidism,SHPT)患者的认知功能及其影响因素。方法选择安徽医科大学第二附属医院透析时间超过3个月的维持性腹膜透析患者为研究对象并筛选出2组患者,A组21例患者的甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)630 ng/L合并骨痛、皮肤瘙痒等不适症状,B组45例患者的PTH630 ng/L未合并骨痛、皮肤瘙痒等不适症状。对每例患者详细询问病史并测定血常规、生化常规、电解质、甲状旁腺激素、25-羟维生素D_3[25(OH)D_3]等的检查,并在血液检查1周内采用智能评估量表(the modified mini-mental assessment amount,3MS)进行认知评分,分析2组患者临床指标间的差异及3MS得分的相关因素。结果 A组患者的血红蛋白(hemoglobin,Hb)、血肌酐(SCr)、血钙、25(OH)D_3及3MS得分等均高于B组,差别有统计学意义(均P0.05);A组患者的血磷、PTH水平等低于B组,差别有统计学意义(均P0.05)。相关性因素分析发现A组患者的3MS得分与年龄(r=-0.657,P=0.001)、有无脑血管疾病病史(r=-0.512,P=0.018)、PTH(r=-0.652,P=0.001)呈负相关,差别有统计学意义。B组患者的3MS得分男性高于女性,差别有统计学意义(r=-0.344,P=0.021)。3MS得分与Ca(r=0.958,P=0.000)、25(OH)D_3(r=0.983,P=0.000)呈正相关,与年龄(r=-0.804,P=0.000)、有无脑血管疾病病史(r=-0.425,P=0.000)、血磷(r=-0.965,P=0.000)、PTH(r=-0.941,P=0.000)呈负相关。多因素STEPWISE法回归分析发现,25(OH)D3(t=6.298,P=0.000)、血钙(t=3.233,P=0.002)、PTH(t=-2.632,P=0.012)是3MS得分的独立危险因素。结论维持性腹膜透析并发SHPT患者的整体认知水平与患者的性别、年龄、脑血管疾病史、血钙、血磷及25(OH)D_3水平及PTH等有关,改善维持性腹膜透析合并甲状旁腺功能亢进患者体内的钙磷代谢紊乱、降低血甲状旁腺激素水平也许是提高患者认知功能的重要手段。     

住院医师规范化培训中人文医学知识培训体系设计

目的 初步设计住院医师规范化培训阶段人文医学知识培训结构。方法 2015年5~12月选取在住院医师规范化培训领域从事管理和研究的工作人员作为咨询专家人选,采用Delphi法进行问卷调查。结果 3轮咨询问卷回收率均高于90%,前两轮咨询专家权威系数分别为0.78、0.83;根据设定的重要性得分均数和变异系数标准,初步筛选出培训体系由4个一级指标：人文基础、沟通技巧、职业素养、患者服务和15个二级指标构成,前两轮咨询专家意见的协调系数分别为0.24和0.27,差异有统计学意义（P<0.05）,第三轮咨询确定所选指标的权重值。结论 咨询专家代表性好,积极性和权威性高,筛选出的培训指标体系可应用到住院医师人文医学培训实践。     

单纯后路钉棒内固定治疗早中期胸腰椎结核的疗效

目的 探讨单纯后路钉棒内固定治疗早中期胸腰椎结核的疗效。方法 回顾性分析2008年10月至2014年10月安徽医科大学第二附属医院收治的35例胸腰椎结核患者的临床资料,根据手术不同术式分为A组前路植骨融合内固定组（20例）和B组后路钉棒内固定组（15例）,分析两组手术时间、出血量、住院天数、术前术后及末次随访时的后凸角（Cobb角）、疼痛视觉评分（VAS评分）、Oswestry功能障碍问卷表（ODI评分）及神经功能恢复情况（Frankel分级）。35例患者均获随访。结果 随访12～24个月,平均18个月。B组在手术时间、出血量及住院天数方面均低于A组,差异有统计学意义（P<0.05）。A组Cobb角术后为（8.47±1.67）°较术前（13.28±3.12）°减小,VAS评分术后为（2.30±1.10）分较术前（7.10±1.20）分改善,ODI评分术后（13.70±3.50）分较术前（43.80±5.50）分改善,差异有统计学意义（P<0.05）。B组Cobb角术后（5.37±2.21）°较术前（13.83±4.54）°减小,VAS评分术后（1.90±1.20）分较术前（7.10±1.10）分减少,ODI评分术后（13.90±3.10）分较术前（41.10±5.30）分减少,差异有统计学意义（P<0.05）。两组组间手术前的Cobb角、手术前后VAS评分及ODI评分差异无统计学意义（P>0.05）。B组在Cobb角矫正及防止丢失上优于A组,差异有统计学意义（P<0.05）。根据Frankel分级,A组术前D级7例,E级13例,术后D级3例,E级17例,术前B组D级5例,E级10例,术后E级15例,两组差异无统计学意义（P>0.05）。结论 单纯后路钉棒内固定,不做病灶清除,其疗效优于植骨融合内固定,是治疗早中期脊柱结核的有效方法之一。