呼吸道感染细菌联合疫苗体内实验研究

[摘要] 目的 通过小鼠体内实验进行免疫学指标检测,观察其对机体免疫功能的影响,为研制我国呼吸道感 染细菌联合疫苗提供理论依据。方法 分离培养我国小儿呼吸道感染常见 6 种细菌,按洗涤、超声波破碎、沉淀、 透析、分光光度计测定等过程制备细菌蛋白,等量混合配成一定浓度作为实验用联合疫苗。 取无特定病原体级 小鼠 40 只,随机分成 4 组,每组 10 只。全部实验小鼠饲喂基础日粮,适应性喂养 10d 后,实验组分别用浓度为 0.1 、 0.2 、 0.4g / L 联合疫苗免疫,每天上午灌服 0.2mL 。对照组每天灌服 0.2mL 生理盐水。免疫 10d 。处死小 鼠,分别测定联合疫苗组小鼠巨噬细胞吞噬功能、细胞免疫功能、血清中溶血素含量以及胸腺指数和脾脏指数的影 响。结果 联合疫苗组的巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、左右后足质量差、溶血素吸光度值、脾脏指数和胸腺指数均 显著高于对照组( P <0.05 ),在实验设计疫苗浓度范围各组中,不同组间检测值随疫苗浓度的增加而加大,且各实 验组间也均存在明显差异( P <0.05 )。结论 制备的联合疫苗可提高机体免疫功能,不仅能提高细胞免疫功能,对 体液免疫功能也具有明显影响,在实验浓度范围内,疫苗浓度越高对机体免疫功能影响越明显。     

miR-210靶基因HBVSP2的鉴定

目的：构建miR-210的过表达载体,利用双荧光蛋白报告基因分析系统验证miR-210的靶基因HBVSP2。方法：构建含有miR-210前体序列的miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210;选取表达绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒 pcDNA3/EGFP,将miR-210在HBVSP2上靶位点的一段特异性序列插入该质粒中,构建EGFP报告载体pcDNA3/EGFP-HBVSP2,并与miR-210ASO或者pcDNA3.1(+)/pri-miR-210及表达红色荧光蛋白质(RFP)的pDsRed2 -N1共同转染HEK293以及HepG2 2215细胞,用荧光分光光度计定量检测转染后提取的蛋白样品的荧光值。结果：共同转染pcDNA3/pri-miR-210 和pcDNA3/ EGFP-HBVSP2质粒后,EGFP/RFP的表达量明显低于pcDNA3和pcDNA3/ EGFP-HBVSP2共转染组,差异具有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3/pri-miR-210和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP低于pcDNA3和pcDNA3/EGFP-HBVSP2共转染组(P<0.05)。共转染miR-210ASO和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP的表达量高于共转染LacZ和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组,差异具有统计学意义(P<0.05)。LacZ和pcDNA3/EGFP-HBVSP2组EGFP/RFP低于LacZ和pcDNA3/EGFP组(P<0.05)。结论：成功构建miR-210的过表达质粒pcDNA3.1(+)/pri-miR-210和含有miR-210靶位点的pcDNA3/ EGFP-HBVSP2,HBVSP2 可能是miR-210的直接靶基因。     

荞麦黄酮复方制剂对糖尿病大鼠肾脏组织形态学变化的抑制作用

目的:采用光镜及电镜技术观察荞麦黄酮复方制剂（FBC)对糖尿病大鼠肾组织形态学变化的抑制作用,初步探讨FBC防治糖尿病肾病（DN）的作用机制。方法:用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素（STZ）建立雄性SD大鼠2型糖尿病模型,70只大鼠随机分为模型对照组（n=13,蒸馏水10 mL/kg/d）,阳性药物组（n=12,消渴丸0.83 g/kg/d）,FBC低、高剂量组（n=13,FBC 0.6、1.2 g/kg/d）和正常对照组（n=12,蒸馏水10 mL/kg/d）,各组大鼠灌胃给药连续8周。实验结束时,用血糖仪测空腹血糖(FBG)、双肾指数,通过HE和Masson染色光镜下观察肾脏组织形态,电镜下观察肾组织超微结构。结果：与模型组比较,FBC 低、高剂量组大鼠FBG和双肾指数均明显下降（P<0.01）。与正常对照组比较,FBC 低、高剂量组大鼠各指标未出现明显改变;光镜及电镜观察结果显示,FBC能够抑制糖尿病大鼠系膜基质增加和基底膜增厚,减轻肾小球硬化程度和肾小管上皮细胞空泡变性。结论：FBC对糖尿病大鼠肾组织病理和超微结构的改变有明显的抑制作用,其机制可能是与其抑制系膜细胞增生及肾小球基底膜的生成、改善糖尿病性肾小球体积增大及硬化有关。     

低剂量木黄酮降低缺血后神经元损伤并改善学习记忆功能

目的探讨染料木黄酮(GEN)对全脑缺血(GCI)大鼠海马CA1区神经元的神经保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠4动脉结扎全脑缺血模型,实验动物随机分为假手术组(sham)、缺血再灌注组(I/R)、GEN处理组、ICI 182,780组和溶剂对照组。采用Fluoro-Jade B和神经元特异性核蛋白(NeuN)染色观察海马CA1区神经元存活情况,TUNEL技术观察海马CA1区神经元的凋亡。Morris水迷宫观察大鼠的空间学习和记忆功能。结果 GEN发挥神经保护作用的最佳剂量为1.0 mg/kg;与sham组相比,I/R组和溶剂对照组海马CA1区TUNEL阳性神经元数量显著增多(P0.01),而1.0 mg/kg GEN可显著降低缺血后TUNEL阳性神经元数量(P0.01);与I/R组相比,GEN能明显改善缺血后大鼠的空间学习和记忆能力。缺血前侧脑室给予ICI 182,780可显著降低GEN的神经保护作用(P0.01)。结论低剂量(1.0mg/kg)GEN可显著降低缺血后大鼠海马CA1区神经元损伤,改善认知功能,其分子机制可能与雌激素受体活性密切相关。     

miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用

目的：利用实时定量RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因YES1,探讨miR-205抑制肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法: 实时定量RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中miR-205的表达水平;miR-205 mimics和control mimics分别转染A549细胞,利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒 pcDNA3/EGFP,将YES1 3′UTR的一段特异性序列、YES1 3′UTR（miR-205互补位点）点突变后的序列分别插入该质粒中,构建YES1-3′UTR和mut-YES1-3′UTR的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR与miR-205 mimics、YES1-3′UTR与control mimics、mut-YES1-3′UTR、mut-YES1-3′UTR与miR-205 mimics和mut-YES1-3′UTR与control mimics共6组,均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果：与癌旁正常肺组织比较,miR-205在肺癌组织及A549细胞中表达水平降低(P<0.05);miR-205mimics 转染组A549细胞增殖率明显低于转染control mimics对照组（P<0.05）;YES1-3′UTR与miR-205 mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组（P<0.01）;YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组（P<0.05）。结论： miR-205可能通过靶定靶基因YES1抑制了肺癌细胞A549的增殖,提示miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。     

结核分枝杆菌融合抗原38F和64F诊断活动性肺结核的价值

目的 探讨结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对活动性肺结核患者血清中IgG、IgM和IgA抗体检测的诊断价值。 方法 利用结核分枝杆菌抗原优势肽段融合抗原38F和64F,通过ELISA法对223例活动性肺结核患者进行结核分枝杆菌特异性IgG、IgM和IgA抗体水平检测。223例活动性肺结核患者分为三组,第一组为涂片和培养共同阳性组（86例）,第二组为涂片阴性且培养阳性组（51例）,第三组为涂片和培养共同阴性组（86例）。 结果223例活动性肺结核病患者,第一组IgG、IgM和IgA的联合检出率为79.07%（68/86）;第二组IgG、IgM和IgA的联合检出率为62.75%（32/51）;第三组IgG、IgM和IgA的联合检出率为69.77%（60/86）。全部样本血清学方法的检出率为71.75%（160/223）。结论 结核分枝杆菌融合抗原38F和64F对于活动性肺结核具有较高的辅助诊断价值,并且IgG、IgM和IgA抗体联合检测可以提高检出率。     

罗格列酮对帕金森病模型小鼠中脑黑质iNOS和IL-6表达的抑制作用及其意义

目的：探讨罗格列酮对帕金森病（PD）模型小鼠中脑黑质中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和白细胞介素-6（IL-6）的调控作用，并阐明其机制。方法：45只雄性小鼠随机分为对照组、模型组和罗格列酮处理组，每组15只。采用爬杆实验法观察各组小鼠行为学变化；采用免疫组织化学染色和Western blotting法观察小鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶（TH）、iNOS和 IL-6的表达。结果：模型组小鼠出现震颤、步态迟缓等PD 样症状；小鼠转身(T-turn)及爬杆时间(T-LA)较对照组显著延长（P<0.05）；黑质区TH阳性神经元缺失，炎症因子iNOS和IL-6阳性细胞明显增多，蛋白表达水平高于对照组（P<0.05）；罗格列酮处理组小鼠PD样症状较模型组减轻，T-turn和T-LA少于模型组(P<0.05)，iNOS、IL-6和TH阳性细胞数及蛋白表达水平与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：罗格列酮可能通过抑制炎症因子iNOS和IL-6表达，对多巴胺能神经元起到保护作用。     

Galectin-3及整合素ανβ3 mRNA在脑胶质瘤细胞中的表达及其意义

目的：探讨半乳糖凝集素-3（Galectin-3）及整合素ανβ3 mRNA在胶质瘤细胞中的表达及二者在胶质瘤的发生及恶性进展中的作用。方法：采用原位杂交法检测5例正常脑组织及40例不同级别胶质瘤中Galectin-3 mRNA、整合素ανβ3 mRNA的表达情况,并分析二者之间的关系。结果：正常脑组织中Galectin-3 mRNA、整合素ανβ3 mRNA的表达均为阴性。Galectin-3 mRNA主要表达于脑胶质瘤细胞的胞浆中,在23例Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤标本中阳性2例、弱阳性4例、阴性17例,阳性表达率为29.09%(6/23),阳性指数(LI)值为(4.80±3.22)%;在17例Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤标本中强阳性4例、阳性6例、弱阳性1例、阴性6例,阳性表达率为64.71%(11/17),LI值为(27.30±22.72)%,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤Galectin-3 mRNA阳性表达率低于Ⅲ-Ⅳ级（P<0.05）。整合素ανβ3 mRNA主要表达于脑胶质瘤细胞的胞浆中,在23例Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤标本中阳性3例、弱阳性4例、阴性16例,阳性表达率为34.43%(7/23),LI值为(5.35±3.79)%;在17例Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤标本中强阳性4例、阳性6例、弱阳性3例、阴性4例,阳性表达率为76.47%(13/17),LI值为(29.24±21.10)%,Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤整合素ανβ3 mRNA 阳性表达率低于Ⅲ-Ⅳ级（P<0.05）。直线相关分析结果显示,Galectin-3 mRNA与整合素ανβ3 mRNA的阳性细胞表达率呈正相关（r=0.718,P<0.05）。结论：Galectin-3 mRNA、整合素ανβ3 mRNA的表达在Ⅰ-Ⅱ级胶质瘤组明显低于Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组,提示Galectin-3及整合素ανβ3 mRNA检测可作为从分子水平判定人脑胶质瘤恶性生物学行为的指标。     

BQ123对大鼠肢体缺血再灌注后骨骼肌损伤和细胞凋亡的影响

目的:观察大鼠肢体缺血再灌注（LIR）后骨骼肌损伤和细胞凋亡情况,探讨内皮素A ( ETA)受体拮抗剂BQ123对大鼠LIR损伤的保护机制。方法：24只雄性Wistar 大鼠随机分为3 组(n= 8)：对照组、缺血再灌注（IR）组和BQ123+IR组,检测各组大鼠血浆乳酸脱氢酶 (LDH)、肌酸激酶 (CK)、丙二醛(MDA)、一氧化氮 (NO)、内皮素1(ET-1) 的含量以及NO/ET-1比值;测定腓肠肌组织中MDA、髓过氧化物酶 (MPO)、NO、ET-1、NO/ET-1比值及腓肠肌DNA双链百分率;采用免疫组织化学方法检测腓肠肌组织中凋亡蛋白酶Caspase-3 的蛋白表达情况;利用原位脱氧核糖核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法 (TUNEL) 检测各组腓肠肌细胞的凋亡情况。结果：与IR组比较,BQ123+IR组血浆LDH、CK、MDA明显降低（P<0.01）,血浆NO升高（P<0.01）,ET-1下降（P<0.01）,NO/ET-1比值升高（P<0.01）。与IR组比较,BQ123+IR组腓肠肌组织MDA、MPO、ET-1含量下降（P<0.01）, NO、NO/ET-1 及DNA双链百分率值升高（P<0.05或P<0.01）;腓肠肌组织Caspase-3表达水平明显减弱,凋亡指数 （AI）下降(P<0.01)。结论：ETA受体拮抗剂BQ123 可减轻大鼠LIR后骨骼肌损伤和细胞凋亡。     

老年慢性阻塞性肺疾病患者记忆障碍的病例对照研究

目的：探讨老年慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者记忆障碍的患病情况,为采取干预措施提供依据。方法：选取老年COPD患者138例为病例组,同期门诊体检的健康老年人90例为对照组,应用行为记忆测验第2版（RBMT-Ⅱ）对2组人员进行针对记忆功能的评测,共13项,将结果进行对比分析。结果：138例COPD患者中,无记忆障碍者0例(0%),轻度记忆障碍者10例（7.2%）,中度记忆障碍者86例（62.3%）,重度记忆障碍者42例（30.4%）,100%存在记忆障碍。对照组90例健康老年人中,无记忆障碍者12例(13.3%),轻度记忆障碍者43例（47.8%）,中度记忆障碍者29例（32.2%）,重度记忆障碍者6例（6.7%）,2组记忆障碍患病率比较,差异有统计学意义（P<0.01）;单项初步评分中,回忆姓名、被藏物品、图片再认、立即回忆故事、故事延迟回忆、脸部再认、立即回忆信件、信件延迟回忆、定向、日期等10项及总标准分项,病例组比对照组评分明显降低,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：老年COPD患者普遍存在记忆障碍,多数为中、重度;应加强疾病稳定期的干预,减少患者记忆障碍的发生率,提高患者的生活质量。
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