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人乳头瘤病毒18型L1-E6、L1-E7嵌合基因表达载体的构建及表达 总被引:6,自引:1,他引:6
目的 构建HPV 18 L1-E6,L1-E7嵌合基因的表达载体,并在CHO细胞中表达。方法 克隆HPV18 L1-E6和L1-E7基因,插入中介载体pGEMT-Easy中并测序鉴定。采用PCR定点突变法,突变L1-E6,L1-E7基因序列中与转化作用相关的位点,分别与L1基因连接后插入真核表达载体pVAX1,构建真核表达质粒pVAX-1L1 E6Mxx,L1E7Mxx。用磷酸钙沉淀法,转染CHO细胞,以抗HPV-18L1,抗E6和抗E7特异性单克隆抗体(mAb)做ELISA和免疫细胞化学法检测。结果 ELISA检测显示,转染各种pVAX1-LIE6Mxx-L1E7Mxx融合蛋白表达质粒的细胞提取物的P-N值均>2.1;免疫细胞化学检测,在胞浆,胞核可见棕黄色颗粒。结论 我建的pVAX1-L1E6Mxx-E7Mxx融合蛋白质表达质粒,可在转当细胞内表达相应的L1-E6Mxx和L1-E7Mxx蛋白,为今后进行DNA疫苗的研究奠定了基础。 相似文献
93.
目的:构建受AFP顺式作用元件调控的超抗原表达载体,将SEA(D227A)特异性的表达于AFP阳性肝癌细胞膜表面。方法:PCR扩增AFP基因启动子、增强子、linker—CD80tm和SEA(D227A)。将上述片断插入逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点,构建AFP基因顺式作用元件调控的肝癌特异性减毒超抗原表达载体(pLXSN SEA(D227A)—linker—CD80tm)。通过脂质体介导,以表达载体转染表达或不表达AFP的肿瘤细胞系,用RT—PCR和间接免疫荧光染色,检测SEA的表达。结果:成功地将AFP基因的启动子、增强子、linker—CD80tm和SEA(D227A)克隆到逆转录病毒载体pLXSN的多克隆位点,酶切鉴定和DNA序列分析无误,RT—PCR和间接免疫荧光法检测证实,SEA(D227A)能在AFP阳性的肝癌细胞膜特异性表达。结论:AFP顺式作用元件修饰的超抗原表达载体的构建,为下一步用其强化肝癌的免疫治疗奠定了基础。 相似文献
94.
几十年来 ,人们致力于肿瘤疫苗的研究 ,旨在激活患者自身的免疫系统 ,产生持久有效的抗肿瘤免疫。在肿瘤疫苗治疗前后 ,如何准确地定量、定性判定肿瘤抗原特异性T细胞应答 ,评价疗效 ,是影响抗肿瘤疫苗发展的关键。51 Cr释放法和有限稀释法 (limitingdilutionanalyses,LDA) ,一直被认为是评价特异性T细胞反应的金标准 ,但实践证明这两种方法费时、费力且敏感性低。近 5、6年来 ,一些评价T细胞功能和特异性的新方法逐渐建立起来[1 ,2 ] ,由于这些方法更加敏感 ,提供的信息更有意义。尤为重要的是 ,有的方法… 相似文献
95.
当机体出现铁过负荷时 ,肝脏是首先受到损害并且损害最严重的靶器官。铁过负荷在非酒精性脂肪性肝病 (NAFLD)中的作用尚不十分明确。目前认为 ,铁过负荷是NAFLD疾病进展的一个辅助因素 ,其中HFE基因起重要作用 ,该过程可能由胰岛素抵抗所激发 ,免疫机制也可能参与其中。 相似文献
96.
目的:观察急性冠脉综合征(ACS)发病时急性反应蛋白中的超敏C-反应蛋白(sCRP)、淀粉样A蛋白(SAA)和白细胞介素-6(IL-6)水平的变化,旨在探讨ACS发病机制。方法:选取ACS病人80例,其中急性心肌梗死(AMI)病人40例,不稳定性心绞痛(UAP)病人40例,同时选取正常对照40例。采用酶联免疫法(ELISA)测定上述病例和对照血清中的SAA、IL-6水平,采用免疫比浊法测定血清中sCRP水平,并进行统计学分析。结果:①sCRP、SAA、IL-6水平在AMI组、UAP组显著高于对照组。②选取CK-MB粗略代表心肌坏死的程度,分别在AMI组内和UAP组内对sCRP、SAA、IL-6、纤维蛋白原和CK-MB进行Spearman等级相关分析,发现sCRP、SAA、IL-6之间存在明显相关性,并且这种相关性在UAP组强于AMI组。纤维蛋白原在AMI组中与IL-6、SAA相关,在UAP组中与sCRP相关。③无论AMI组还是UAP组,CK-MB与sCRP、SAA、IL-6、纤维蛋白原之间均无相关性。④采用Wagner 37项/29分QRS积分系统对40例AMI病人进行梗死面积的估计,结果表明QRS积分≤6分组和>6分组之间sCRP、SAA、IL-6水平无明显差异。 结论:外周血中sCRP、SAA、IL-6水平可能作为诊断和预测ACS发生的敏感指标。血清中sCRP、SAA、IL-6的升高主要不是心肌坏死的作用,可能与多病灶的不稳定斑块的存在有关。 相似文献
97.
西藏大骨节病患者血清Se与几种细胞因子含量的变化 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:测定大骨节病患者和正常对照血清中硒和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)和白介素-1(IL-1β)的水平。从细胞因子角度为研究其发病机制提供实验依据。方法:在西藏拉萨尼木县和墨竹工卡县的大骨节病区随机选取大骨节病患者30例(患者组),病区正常人30例(病区内对照组),在拉萨非大骨节病区选健康志愿者30例(病区外对照组),3组人群年龄和性别没有显著性差异。采取静脉血离心制备血清。采用荧光法测定血清Se,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中细胞因子水平。结果:西藏大骨节病病区患者和正常人血清中Se低于非大骨节病区正常人;患者血清中TNF-α、VEGF和IL-1β的水平高于正常。血清Se与TNF-α、IL-1β水平呈负相关趋势。结论:低硒和血清中细胞因子水平升高在KBD的发病过程中起着某种作用。 相似文献
98.
目的:探讨大鼠压力负荷性肥大心肌中TNF-α mRNA表达的变化及卡托普利(captopril)对其的影响。方法:采用腹主动脉缩窄法复制压力超负荷心肌肥大模型,于术后42 d采血、摘取心脏,测定心肌肥大指数并采用酶联免疫法测定血清及左心室肌TNF-α含量;应用心肌原位杂交法结合图像分析系统检测心肌组织中TNF-α mRNA表达的变化,并观测TNF-α mRNA在心肌组织中的定位。结果:术后42 d心肌明显肥大,以左心室为主;主动脉缩窄(aorta-constriction, AC)组心室肌TNF-α含量比假手术(sham-operation, SO)组高98%(P<0.01);卡托普利干预使心室肌TNF-α含量比AC组低64.14%(P<0.01),但未达到对照水平;心肌组织原位杂交显示TNF-α mRNA表达主要在心肌间质部位,假手术组心肌TNF-α mRNA表达水平极低,明显低于AC术后(P<0.01),captopril干预虽明显抑制AC术后心肌组织中TNF-α mRNA表达,但并未使其达到SO组水平。结论:心肌组织内源性TNF-α的表达增加在压力负荷性心肌肥大中具有重要的调控作用,其过表达可能与RAS激活促心肌间质TNF-α mRNA表达上调有关。 相似文献
99.
目的:选用人脐静脉内皮EA.hy926细胞株作为研究对象,观察二甲基亚砜溶解的香烟尘粒(DSP)对人脐静脉内皮EA.hy926细胞生长的影响。方法:以(1、2、4、8)mL/L剂量DSP作量效实验,小剂量DSP(2mL/L)作时效实验,采用MTT比色法和96孔板细胞蛋白测定方法来评价DSP对该细胞株增殖和活性的影响。透射电镜(TEM)观察不同处理因素作用后细胞超微结构变化。结果:DSP能抑制人脐静脉内皮EA.hy926细胞增殖(P<0.05),且对该细胞株具有明显毒性,它能减少细胞蛋白合成(P<0.05)、增加细胞死亡(主要为坏死),作用呈剂量和时间依赖。结论:DSP能损伤血管内皮细胞(VEC)。 相似文献
100.
目的以粉末冶金烧成的羟基磷灰石(HA)/-β磷酸三钙(β-TCP)陶瓷为靶材,采用磁控溅射法在钛合金(Ti6Al4V)基体上制备HA/β-TCP生物涂层。方法利用XRD研究了复合涂层的晶化程度,讨论了涂层成分与生物降解性及相容性的关系。结果HA/β-TCP生物涂层为非晶态,经700℃,3h大气处理可显著提高涂层的晶化程度,当涂层成分为50wt%HA/50wt%β-TCP时其细胞相容性最好。结论在钛合金基体上制备HA/β-TCP生物涂层,通过HA与β-TCP的复合来控制材料的降解速度,使它的降解速度与周围骨组织的生长速度相匹配,使植入体具有良好的生物降解性、生物活性和力学性能。 相似文献