方术五法之繁方

随着疾病证型、症状有复杂化趋势的出现,此文以中医理论及诊病技术为基础提出方术繁方的概念,其主要理论特点是通过对疾病的病因、证型所表现的症状多样性与中药功效多样性的相关性进行探讨,在整体观念、辨证论治的基础上将中医组方配伍过程概括成全症配伍、药症合象、避毒选和等共五种方法,结合多味小量配伍方式提出中医方术五法繁方的概念,以药症合象为起点将中药的多效性和中医临床的多症状性进行结合,以期为临床诊断疾病探索一种具体的、易于实际处方的方剂配伍新模式。     

比较线栓法和电凝法制作小鼠大脑中动脉栓塞模型

目的:目前制作脑缺血模型的的方法主要包括四血管栓塞法、线栓法、光化学法等,每种方法都各有利弊.为了制作一个适合细胞移植治疗缺血性脑损伤的动物模型,本实验比较了电凝法和线栓法制作的小鼠大脑中动脉栓塞模型.方法:本实验采用电凝法和线栓法建立小鼠大脑中动脉栓塞模型.氯化三苯基四氮唑染色确定缺血坏死区.行为学实验评价模型的效果.结果:电凝组缺血坏死区局限在小鼠大脑皮质,而线栓法小鼠缺血坏死区的位置不恒定,而且成活率非常低,不能满足进一步的实验需求.在角落实验与圆筒实验,电凝组与假手术组之间有明显的行为学差异.结论:电凝法可成功建立大脑中动脉栓塞模型,为细胞移植治疗缺血性脑损伤奠定基础.     

远志叶绿体基因组序列特征与系统发育分析

目的 解析远志Polygalatenuifolia叶绿体基因组信息序列特征和确定其在远志属的系统位置。方法 获得远志叶绿体基因组序列,借助Ge Seq、Chloroplot、MISA、REPute、Tandem repeats finder、CodonW、Geneious、IRscope、MAFFT7和IQtree2.0.5等生物信息学工具进行序列分析、密码子偏好分析、远志属基因组比较分析和系统发育研究。结果 远志的叶绿体基因组全长165 423 bp,为典型的环状四段式结构;包括1个大单拷贝区（large single copy,LSC;83 699 bp）,1个小单拷贝区（small single copy,SSC;8044 bp）和1对反向重复区（inverted repeats,IRs;36 840 bp）,该基因组共注释到135个基因,包括8个rRNA基因、38个tRNA基因和89个蛋白编码基因。该基因组中共检测到161个SSR位点,223条散在重复序列,90条串联重复序列;亮氨酸（Leu）是远志叶绿体基因组中使用次数最高的氨基酸（10.21%）,同义密码子相对使用频次（RS...     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬探讨当归四逆汤对痛风性关节炎大鼠的影响

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路,探讨当归四逆汤对痛风性关节炎（GA）大鼠自噬水平的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）和当归四逆汤低、中、高剂量组（6.54、13.08、26.16 g·kg^-1）,每组10只,并分别给予相应药物灌胃,正常组、模型组给予等体积生理盐水灌胃,连续7 d。于第5天给药1 h后向各组（正常组除外）大鼠右侧踝关节注射尿酸钠混悬液（50 g·L^-1）建立GA模型,正常组注射等体积的无菌生理盐水。观察大鼠踝关节肿胀情况;测定血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β水平;观察踝关节病理形态变化;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测滑膜PI3K、磷酸化（p）-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ/Ⅰ）、自噬效应蛋白（Beclin-1）、泛素结合蛋白（p62）表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测PI3K、Akt、mTOR、LC3、Beclin-1、p62 mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠关节肿胀指数显著升高（P<0.01）,血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平升高（P<0.01）,踝关节滑膜组织可见明显炎性细胞浸润和纤维组织增生,滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达显著升高（P<0.01）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达显著升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达降低（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤中、高剂量组大鼠关节肿胀明显减轻（P<0.05）;血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表达量显著明显降低（P<0.05）;踝关节滑膜组织未见明显炎性细胞浸润,纤维组织增生减轻;滑膜组织PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR、p62蛋白表达量均明显降低（P<0.05）,PI3K、Akt、mTOR、p62 mRNA表达量亦明显降低（P<0.05）,而LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白和LC3、Beclin-1 mRNA表达量均明显上升（P<0.05）。结论 当归四逆汤可以抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,提高大鼠滑膜组织自噬水平,改善痛风性关节炎,并且以高剂量效果最佳。     

党参远志散微乳对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆障碍的改善作用

目的研究党参远志散微乳对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑组织中乙酰胆碱(Ach)和乙酰胆碱酯酶(AchE)水平及脑组织中AchE和乙酰胆碱转移酶(ChAT)蛋白表达的影响,运用胆碱能学说分析作用机制。方法小鼠随机分为对照组、模型组、生物相容性微乳组、脑复康组、党参远志散水提液组和党参远志散微乳组,每组15只。除对照组外,其余组均ip D-半乳糖(D-gal)和Na NO2制备AD小鼠模型,分别ig蒸馏水、生物相容性微乳、脑复康、党参远志散水提液和党参远志散微乳6周。采用水迷宫实验进行行为学考察;酶联免疫分析测定脑组织中Ach和Ach E水平;HE染色光镜观察海马CA1区和皮层的病理变化;免疫组织化学染色法检测海马CA1区和皮层的Ch AT、Ach E蛋白表达。结果与模型组比较,党参远志散微乳组小鼠学习记忆能力明显提高(P0.05),脑组织中Ach水平明显升高(P0.01),Ach E水平明显降低(P0.01),海马CA1区和皮层的病理结构改变明显改善,Ch AT的蛋白阳性表达明显上升(P0.01),Ach E蛋白阳性表达明显下降(P0.01)。结论党参远志散微乳可通过上调小鼠海马CA1区和皮层中Ch AT表达和抑制Ach E表达而发挥抗AD作用。     

七味白术散对糖尿病小鼠肝脏组织PI3K/Akt信号通路的调节作用

目的:研究七味白术散对高脂饮食与链脲佐菌素(STZ)导致的糖尿病小鼠肝脏组织中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响。方法:采用网络药理与实验药理学的方法研究七味白术散的降糖作用。通过公共数据库筛选活性成分和疾病靶点,构建成分-靶点和疾病-靶点的PPI网络,进行基因本体(GO),京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析信号通路。以高糖高脂饲料联合腹腔注射80 mg·kg-1·d-1STZ建立糖尿病小鼠模型,分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、七味白术散祖(七味白术散煎剂18.7 g·kg-1·d-1),灌胃28 d后分析其降糖作用及对血清总胆固醇(T-CHO),空腹胰岛素(FINS)含量和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织的胰岛素受体(IR),胰岛素受体底物-1(IRS-1),PI3K和Akt蛋白和mRNA的表达。结果:网络药理学研究共筛选到36种活性成分,KEGG分析推测七味白术散可能是通过调节PI3K/Akt信号通路发挥降糖作用的。实验药理学实验表明,七味白术散组与模型小鼠相比,血糖含量、血清TNF-α和T-CHO显著降低(P0.01),FINS显著升高(P0.01)。肝脏组织的IR,IRS-1,PI3K和Akt蛋白和mRNA的表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:七味白术散可下调高脂饮食和STZ导致FINS升高,其调节作用与PI3K/Akt信号通路与胰岛素的代谢效应有关。     

门氏柴胡理中颗粒的薄层鉴别及含量测定

目的:建立门氏柴胡理中颗粒定性定量质量标准控制方法。方法:采用薄层色谱法对门氏柴胡理中颗粒制剂中柴胡、黄芩进行薄层鉴别,采用高效液相色谱法(HPLC)对柴胡理中颗粒中的黄芩苷进行含量测定,色谱柱为Diamonsil-C_(18)色谱柱(200 mm×4.6 mm,5.0μm),流动相为甲醇-0.1%醋酸水溶液进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为280 nm,柱温为25℃,进样量为10μL.结果:柴胡、黄芩薄层色谱斑点分离清晰,阴性均无干扰;回归方程为y=2 907 186.561 0x+21 224.436 6(r=0.999 8),黄芩苷在0.12～1.20μg范围内具有良好的线性关系。平均加样回收率为99.45%,RSD为2.48%。结论:建立的方法方便、可靠,可作为门氏柴胡理中颗粒的薄层鉴别和含量测定质量控制方法。     

以PTP1B为靶点的中药对胰岛素干预HepG2细胞调节作用研究进展

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)是胰岛素抵抗或胰岛β细胞功能障碍引起的以高血糖为特征的慢性代谢性疾病。胰岛素抵抗作为T2DM病发的关键要素及明显特点,主要作用于肝脏、肌肉、脂肪等外周靶器官、组织,可降低机体对胰岛素的反应敏感性,致使胰岛素无法产生正常生理效应。肝脏作为机体维持血糖稳态的关键器官,在患者餐后血糖浓度明显增加时,在胰岛素作用下肝脏可有效降低血糖。相反,在血糖浓度降低到一定程度时,会增强肝糖原及糖异生的作用,生成葡萄糖运送至血液中,从而维持血糖稳定。分子水平研究表明2型糖尿病的一个发病机制是胰岛素信号通路障碍。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(protein tyrosine phosphatases 1B,PTP1B)是胰岛素信号转导过程中的负调节因子,是2型糖尿病的一个治疗靶点。在肝脏发生胰岛素抵抗的情况下,PTPIB表达水平明显增高,可以将胰岛素受体及受体底物去磷酸化,并影响PI3K/Akt胰岛素信号转导下游相关信号因子的表达,有效降低葡萄糖的吸收作用。该文重点概述以PTPIB为靶点的相关中药对胰岛素干预HepG2细胞的调节作用,探讨相关中药对2型糖尿病的作用机制,以期为相关药物细胞水平的作用机制研究提供参考。     

门九章从肝脾论治寒凝血瘀型继发性闭经经验

闭经是临床常见的妇科疾病,现代医学分为原发性和继发性。闭经病机虽多,简而言之,无非虚实两端。虚者多因肝脾肾亏虚,冲任不充,无余血可下;实者多由痰瘀等实邪阻滞胞宫,冲任失司。而临床难治者,门九章教授认为多属虚实夹杂,且以寒凝血瘀证为常见,病机以肝脾亏虚为本,寒瘀于经为标,受六气、七情、饮食等多因素的影响。治当从肝脾两脏入手,在温经通脉,活血化瘀的基础上调肝补脾,重视胃气的盛衰、肝气的条达以及肝血的充盈,运用门氏养荣汤、理中汤为主方,组成联合方组证因同治。在治疗的同时,也要纠正患者不良的生活习惯,重视心理疏导,综合调治方可收功。本文对门九章教授从肝脾论治寒凝血瘀型继发性闭经的经验进行整理,以期在传承与创新名老中医思想的同时,为临床继发性闭经的治疗拓宽思路。     

基于古今医案云平台的中医治疗失眠证治规律研究

目的:挖掘中医辨证论治失眠的组方用药规律。方法:筛选纳入古今医案云平台(V 1.5.7)古代医案、现代医案、名医医案及共享医案数据库中所收录的符合本研究要求的有关失眠的医案,应用平台软件中的频次分析、关联分析、药对分析等方法进行数据挖掘。结果:共收集失眠医案664个,主要症状为入睡困难、早醒、睡眠表浅、睡中易醒、多梦等...