小鼠大脑乙酰胆碱酯酶提取、测定优化及异喹啉类生物碱乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

目的优化小鼠大脑乙酰胆碱酯酶(AChE)提取、测定方法,评价异喹啉类生物碱的AChE抑制活性。方法采用蔗糖密度梯度离心及Ellman法评价不同提取方法对小鼠大脑AChE亚型表达及提取影响,优化测定方法,并在此基础上对异喹啉类生物碱的AChE抑制活性及构效关系进行考察。结果匀浆+超声、匀浆提取法对大脑AChE亚型表达一致,但前者AChE提取效果较优。随着反应温度、显色时间增加,药物AChE抑制活性增强,但显色时间超过30 min时,药物AChE抑制活性趋于平缓。随着大脑裂解液稀释倍数增加,药物AChE抑制活性未明显变化,且稀释10～20倍时,空白组AChE吸光度值为0.6～1.5。异喹啉类生物碱具有较好AChE抑制活性,而叔胺型生物碱AChE抑制活性降低。结论匀浆联合超声对小鼠大脑AChE有较好提取效果;反应温度37℃,显色时间30 min,大脑裂解液稀释10～20倍时,药物AChE抑制活性灵敏度、准确性好。异喹啉类生物碱的AChE抑制活性与其季胺型结构密切相关。     

基于个案报道的失眠症常见证素的Logistic回归分析研究

目的分析失眠症中医证素与症状/体征、中药的相关性。方法于中国知网、维普、万方等数据库搜集近10年关于失眠的文献,对符合纳入标准的516条医案进行规范,应用“证素辨证”法进行病位及病性证素辨证,采用二分类Logistic回归分别对证素与症状/体征、中药进行回归分析。结果经规范后提取失眠症常见证素有心、肝、脾、肾、阴虚、火热、气滞、气虚等8个;通过Logistic回归方法分别筛选出与证素相关的变量,其中与阴虚相关的变量为15个最多;与心相关的变量为10个最少。结论研究借助Logistic回归分析方法,归纳出失眠主要证素与症状/体征及证素与中药应用之间的相关关系,为临床辨证提供了客观依据。     

远志地上部分正丁醇部位化学成分研究

目的：研究远志Polygala tenuifolia Wild.地上部分的化学成分。方法：远志地上部分70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位采用硅胶、中压十八烷基键合硅胶（ODS）色谱柱和高效液相色谱法（HPLC）进行分离纯化,根据理化性质和核磁共振波谱数据鉴定化合物的结构。结果：从远志地上部分70%乙醇提取物的正丁醇萃取部位中分离得到13个化合物,分别为顺式丁香苷（1）、长春花苷Ⅱ（2）、2-苯乙醇-β-D-葡萄糖苷（3）、吐叶醇（4）、4-C-[β-D-呋喃芹菜糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-1,3,6-三羟基-7-甲氧基氧杂蒽酮苷（5）、蚱蜢酮（6）、3-羟基-1-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烷-1-酮（7）、polygalatenoside A (8)、刺槐林素（9）、3′,5′-二甲氧基双苯基-4-醇（10）、拟茎点霉内酯A (11)、莽吉柿酮D (12)和玫红穗状霉胺A (13)。结论：化合物2、4、6、7、9～13均为首次从远志科植物中分离得到。     

黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤

目的:探讨黄连解毒汤对盲肠结扎穿孔术(CLP)诱导的脓毒症小鼠肝损伤保护作用中自噬相关蛋白的表达。方法:将60只8周龄C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组、黄连解毒汤低、高剂量组(1.44,2.88 g·kg^-1)共4组(n=15)。连续给药3 d,末次给药1 h,盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型。观察小鼠24 h生存率;另取5只,术后12 h处死小鼠,收集血清和肝组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;生化法检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化;TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色观察肝细胞凋亡指数(AI);蛋白免疫印迹法检测肝组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1),自噬效应蛋白1(Beclin1),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(LC3-Ⅱ/Ⅰ)的表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠12,24 h生存率明显降低,血清中炎症因子IL-6...     

基于数据挖掘与实验验证的抗湿疹中药筛选及活性研究

目的 通过数据挖掘与实验相结合,筛选抗湿疹中药并评价其活性。方法 收集具有抗湿疹活性的中药方剂,筛选后录入Excel软件建立数据库,运用中医传承计算平台V3.0对其高频药物、复方配伍进行关联规则分析,挖掘核心药物及其组合,并对核心药物组合及单味药的抑菌作用进行测定。将40只昆明种小鼠随机分为空白组、模型组、基质组、阳性药组及核心药物组合凝胶组,并采用2,4-二硝基氯苯建立小鼠湿疹模型,验证核心药物组合的抗湿疹药效。应用超高效液相色谱-串联质谱代谢组学技术检测核心药物组合治疗湿疹小鼠前后血清中内源性代谢物,并采用主成分分析及正交偏最小二乘法判别分析等多元统计分析,结合人类代谢数据库（HMDB）等数据库和相关文献指认、鉴定差异代谢物,通过MetaboAnalyst平台富集相关代谢通路。结果 筛选得到255首符合标准的抗湿疹中药方剂,包含中药347味,使用频次由高到低分别是黄柏、苦参、蛇床子、白鲜皮、枯矾等清热解毒、清热燥湿中药。通过用药模式分析,并结合《已使用化妆品原料目录（2021年版）》,得到“苦参-蛇床子”核心药物组合。抑菌实验结果表明,苦参抑菌活性优于蛇床子,而二者组合物的抗菌活性有所提高。皮肤形态学观察显示,苦参-蛇床子凝胶组能明显减轻皮损的严重程度,减少皮肤组织炎性细胞的浸润情况。从血清中筛选出与核心药物组合治疗湿疹相关的12种内源性差异代谢物,主要涉及甘油磷脂代谢、谷胱甘肽代谢、甘油酯代谢等代谢通路。结论 基于数据挖掘方法从抗湿疹中医方剂中筛选得到14味核心药物,在此基础上进一步结合《已使用化妆品原料目录（2021年版）》确定的苦参-蛇床子组合物呈现较好的抗菌和抗湿疹活性,其抗湿疹药效与调节甘油磷脂代谢、谷胱甘肽代谢、甘油酯代谢等有关,这为其进一步研究开发奠定了基础。     

脑震宁颗粒对三重脑震荡模型大鼠额颞叶皮质区线粒体生物合成的影响

目的 基于线粒体能量代谢,从生物合成角度探究脑震宁颗粒对脑震荡后综合征模型大鼠的记忆功能和神经元的影响。方法 SPF级Wistar大鼠,采用自由落体撞击法构建三重脑震荡模型（MCC）,依据模型评价标准将造模成功大鼠分为模型组,吡拉西坦组（0.324 g·kg^-1）,脑震宁低、中、高剂量组（2.25、4.5、9 g·kg^-1）,另设正常组,按剂量进行灌胃治疗,正常组和模型组给予等体积生理盐水,每天1次,连续14 d。观察大鼠给药前后的一般状态;采用旷场实验和新物体识别实验检测大鼠的运动和记忆能力;采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠皮层组织神经元的病理改变;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ-共激活因子-1α（PGC-1α）、核呼吸因子1（NRF-1）、线粒体转录因子（TFAM）的蛋白和mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠精神焦虑狂躁,被毛萎黄脏乱,摄食量减少;旷场实验中模型大鼠的运动总路程、中央格进入次数和直立次数显著降低（P<0.01）,静止时间显著升高（P<0.01）;新物体识别指数显著下降（P<0.01）;皮层组织神经元数量减少,分布稀疏,核仁畸形、破裂,形态不规则;皮层组织PGC-1α、NRF-1、TFAM的蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）;皮层组织PGC-1α、NRF-1、TFAM的mRNA表达水平均显著降低（P<0.01）。与模型组比较,吡拉西坦组和脑震宁各剂量组大鼠精神状态和被毛颜色改善,食欲增加,活动逐渐正常;旷场实验中大鼠的运动总路程、中央格进入次数和直立次数明显增高（P<0.05,P<0.01）,静止时间明显降低（P<0.05,P<0.01）;新物体识别指数明显上升（P<0.05,P<0.01）;皮层组织神经元数量增多,排列较为紧密,核大而圆,部分细胞形态不规则,胞浆浑浊;吡拉西坦组和脑震宁中剂量组皮层组织PGC-1α、NRF-1和TFAM蛋白表达显著升高（P<0.01）,脑震宁低剂量组大鼠皮层组织NRF-1和TFAM蛋白表达显著升高（P<0.01）,脑震宁高剂量组大鼠皮层组织PGC-1α和TFAM蛋白表达显著升高（P<0.01）;吡拉西坦组和脑震宁各剂量组皮层组织PGC-1α、NRF-1、TFAM mRNA表达水平明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 脑震宁颗粒可以改善MCC大鼠的运动探索和记忆学习状况,修复神经元损伤,保护神经功能,其作用机制可能与促进大脑皮层神经元的线粒体生物合成有关。     

基于TRPV1探讨黄五甘附膏治疗膝骨关节炎外周炎性痛敏的作用机制

目的 观察黄五甘附膏对阳虚寒凝证膝骨关节炎（KOA）大鼠滑膜组织瞬时受体电位锚蛋白1（TRPV1）受体表达、巨噬细胞极化及p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路调控作用,探讨其缓解KOA外周炎性痛敏的作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄五甘附膏高、中、低剂量组（9.3、4.65、2.325 g·kg^-1）、塞来昔布组（208.2 mg·kg^-1）,采用气候箱加游泳2周联合膝关节腔注射碘乙酸钠（MIA）建立阳虚寒凝证KOA大鼠模型,连续给药4周,观察各组大鼠一般情况,记录机械刺激缩足痛阈值（PWT）和关节直径,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、神经生长因子（NGF）和降钙素基因相关肽（CGRP）炎性因子表达;苏木素-伊红（HE）染色观察膝关节滑膜组织病理学改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠膝关节滑膜组织TRPV1、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达水平;免疫荧光（IF）测量评估M1/M2巨噬细胞极化情况。结果 与空白组比较,模型组大鼠整体精神状态较差,自主活动减少,体质量偏低,关节直径增加,X射线提示关节边缘骨赘增生,关节面明显粗糙,关节腔间隙明显变窄,大鼠PWT显著降低（P<0.01）,大鼠血清IL-1β、TNF-α、CGRP、NGF含量均显著升高（P<0.01）,滑膜Krenn评分显著升高（P<0.01）,TRPV1、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达显著升高（P<0.01）,M1巨噬细胞占比和M1/M2显著升高（P<0.01）,M2巨噬细胞占比显著降低（P<0.01）;与模型组比较,黄五甘附膏低、中、高剂量体质量有不同程度上升（P<0.05,P<0.01）,黄五甘附膏高剂量组和塞来昔布组大鼠膝关节直径减少（P<0.01）,黄五甘附膏高、中剂量组PWT恢复较为明显（P<0.05）,各给药组大鼠血清IL-1β和CGRP的含量都显著降低（P<0.01）,塞来昔布组和黄五甘附膏高剂量组大鼠血清TNF-α含量明显降低（P<0.05）,黄五甘附膏中剂量组大鼠血清NGF含量明显降低（P<0.05）,黄五甘附膏高剂量组滑膜Krenn评分明显降低（P<0.05）,黄五甘附膏各剂量组大鼠滑膜组织中TRPV1和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达都显著下降（P<0.01）,塞来昔布组和黄五甘附膏各剂量组滑膜组织中M1巨噬细胞占比均降低（P<0.01）,黄五甘附膏高剂量组M2巨噬细胞占比升高（P<0.05）,黄五甘附膏中、高剂量M1/M2降低（P<0.05）。结论 黄五甘附膏可通过调控巨噬细胞极化减轻KOA炎症反应,减少炎性疼痛介质释放,同时还降低了TRPV1蛋白表达,其机制可能与p38 MAPK信号通路有关,从而达到改善KOA外周痛敏的效应。     

从五苓散治阳痿谈中医临床思维※

笔者通过对用五苓散治疗阳痿验案的剖析，提出医生提高疗效须提高四诊信息采集的能力和水平，培养形象思维，熟读中医经典，才能深刻理解病因病机，从整体把握人体状态进而治疗疾病。     

“十四五”时期构建“体医养融合”新模式：动力、困境与路径

发展“体医养融合”模式是“十四五”时期构建更高质量养老服务体系的重要内容。运用文献资料、逻辑分析等研究方法，剖析“十四五”时期“体医养融合”模式发展的动力、困境，并提出优化路径。研究认为，人口老龄化和健康需求增加、医疗卫生服务水平不断提高、国家政策支持力度逐渐加大是“体医养融合”模式发展的核心动力。发展“体医养融合”模式存在法律法规不完善、专业人才短缺、社会认知度不高、资源配置不均衡、产业协同不顺畅的现实困境。据此，结合“十四五”时期的国民健康发展需求，提出优化路径：加强法律法规的建设，制定统一的标准和规范；创新人才培养渠道，建立多元化培养体系；加大宣传和教育力度，提高公众的认识和理解；整合和优化资源配置，提升资源利用效率；构建产业融合综合体，促进产业协同联动。