疏肝苦荞茶的制备工艺及其含量测定的研究

目的:通过建立疏肝苦荞茶的最佳水提及制备工艺,同时建立HPLC法测定其芦丁含量,使得苦荞茶的开发有一定的基础依据。方法:以单因素试验为基础、干膏得率作为指标进行正交实验,考察料液比、提取时间、提取次数对疏肝苦荞茶提取工艺的影响,评价疏肝苦荞茶水提最优工艺。采用最佳水提工艺提取药液并吸附于苦荞上,考察疏肝苦荞茶最佳成型工艺。采用HPLC测定疏肝苦荞茶中芦丁含量。结果:最优提取工艺为料液比1∶8,提取时间1.5 h,提取次数为3次;制备工艺最佳吸附比为1∶1.5;疏肝苦荞茶所含芦丁含量为3.14 mg/g,线性关系良好(r>0.999 9),精密度RSD小于2%,疏肝苦荞茶供试品在10 h内稳定,建立的方法重复性良好。结论:实验得出的提取、制备工艺稳定,建立的含量测定方法准确、可靠,为疏肝苦荞茶的制备与生产提供参考。     

还阳参野生资源在山阴县的分布及储藏量调查研究

目的:用踏查及实地样方调查的方法,对山阴县还阳参药材野生资源进行了全面普查,旨在揭示该生态区还阳参资源的分布特点和药材蕴藏量。方法:按照第4次全国中药资源普查技术方案,对山阴县还阳参资源分布情况和蕴藏量进行实地调查。结果:山阴县境内5个不同的代表区域中,在草丛、草原、灌丛、阔叶林4个代表区域均有还阳参的分布,还阳参出现样地占山阴县总调查样地的50%,还阳参出现样方占山阴县调查总样方的4%。山阴县还阳参资源分布面积约为8.954 km2,药材蕴藏量约为50.418 9×103kg。结论:根据结果可以看出,山阴县境内还阳参蕴藏量较低,且其分布范围较窄。     

QuECHERS-气相色谱-串联质谱法筛查和测定薄荷中28种农药残留

目的:建立薄荷中28种农药残留的筛查和测定方法。方法:以乙腈为提取溶剂,经脱水后用QuECHERS固相萃取净化管净化,选用气相色谱-串联质谱技术(GC-MS)在Rtx-5MS毛细管上用程序升温技术分离,以特征离子和保留时间进行目标成分的定性鉴别,外标法对样品进行测定。结果:28种农药在0.05～1μg/mL内呈良好的线性关系,28种农药的检出限在0.005 5～0.026 7 mg/kg之间,定量限在0.018 3～0.081 0 mg/kg之间,3个水平添加回收率70.62%～113.17%,RSD均不超过13%。结论:所建立的方法操作简单、灵敏准确,可用于薄荷中多种农药残留的分析检测。     

基于数据挖掘探讨于、孙氏学术流派治疗慢性肾衰竭用药规律

目的:运用数据挖掘和统计学方法,探索于、孙氏学术流派治疗慢性肾衰竭的临证经验和学术思想。方法:收集2017年9月-2019年3月于、孙氏学术流派治疗慢性肾衰竭病案资料,提取病案所记录的症状体征、用药处方等信息,对其进行规范化处理后建立数据库,运用"中医传承辅助平台系统(V2.5)"对药物进行关联度分析和聚类分析,梳理其治疗慢性肾衰竭的用药规律与特色。结果:该研究共纳入病案320个,处方1100首,药物219味,慢性肾衰竭本虚证以脾肾气虚证最多,其他依次分别为脾肾阳虚证、气阴两虚证、肝肾阴虚证、阴阳两虚证;标实证以血瘀证居多,其他依次为湿浊证、湿热证、水气证、气滞证;治则治法中健脾补肾、活血化瘀、利湿泄浊运用频率最高。结论:于、孙氏学术流派临证治疗慢性肾衰竭患者主张以健脾补肾固本培元,活血化瘀、泄浊解毒祛其标,标本兼顾;临证遣方用药时重用补益药、活血化瘀药、利湿泄浊药。     

非酒精性脂肪性肝炎大鼠TLR4基因及其甲基化水平的相关性研究

目的 观察非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝脏中Toll样受体4（TLR4）基因的表达及其甲基化水平的 变化,并探讨两者在NASH发病中的相关性。方法 将20只大鼠采用随机数字表法分为正常组与模型组,每组10 只。正常组与模型组大鼠分别饲喂普通饲料和高脂高糖饲料,于24周后处死。测量大鼠体质量及肝质量,并取各组 大鼠血清及肝脏组织,于低温保存。通过病理染色观察肝细胞的形态变化、脂肪变性及炎性细胞浸润程度。采用酶 联免疫吸附测定（ELISA）法检测血清中丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、三酰甘油（TG）及总胆固醇 （TC）水平;采用免疫组织化学染色法检测肝脏CD68蛋白的表达;采用蛋白免疫印迹法检测肝脏TLR4蛋白的表达; 实时荧光定量PCR检测肝脏TLR4基因mRNA的表达;亚硫酸氢测序PCR（BSP）检测肝脏TLR4基因甲基化水平。结 果 与正常组相比,模型组肝细胞体积增大,出现大量脂肪空泡,炎性细胞浸润明显;肝指数升高,血清中ALT、AST、 TC及TG明显升高（P＜0.01）;CD68蛋白的表达含量明显升高;TLR4蛋白、mRNA表达明显升高（P＜0.01）;甲基化水 平降低（P＜0.01）。TLR4的甲基化水平与其mRNA相对含量的表达呈负相关（P＜0.01）。结论 NASH模型大鼠肝 脏TLR4基因的表达与其甲基化水平呈负相关,TLR4基因甲基化水平的降低在NASH发病因素中发挥重要作用。     

多指标-响应曲面法优选酒炖熟地黄最佳炮制工艺

目的基于响应曲面技术,应用HPLC法定量测定,从多指标、综合评价的角度建立酒炖熟地黄的最佳炮制工艺。方法采用HPLC定量分析,以地黄苷D、益母草苷、5-羟甲基糠醛(5-HMF)和毛蕊花糖苷为评价指标,采用响应曲面设计法考察地黄浸润时间、加黄酒量、炖制时间、干燥温度、干燥时间对酒炖熟地黄炮制工艺的影响,寻找出最佳炮制工艺。结果色谱柱为Tnature-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),体积流量为1 mL/min,柱温为25℃。地黄苷D和益母草苷定量测定:流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(4∶96),检测波长为203 nm;5-HMF和毛蕊花糖苷定量测定:流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱:0～15 min,11%乙腈;15～15.1 min,11%～16%乙腈;15.1～50 min,16%乙腈;检测波长为334 nm。酒炖熟地黄的最佳工艺为100 kg生地加入黄酒60 kg,浸润12 h,密闭炖制38 h,在76℃干燥33 h。结论所建立的HPLC法稳定可行,适合所选成分的测定。采用响应面法建立的模型相对准确,可以较好地预测4种成分含量;优选的酒炖熟地黄炮制工艺方法可行,为制定熟地黄的质量标准和现代研究提供了科学依据。     

委陵菜HPLC指纹图谱及多指标含量测定研究

目的建立委陵菜的指纹图谱及多指标含量测定方法,为委陵菜的质量标准提升提供实验依据。方法采用HPLC法,色谱柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;进样量10μL;检测波长260 nm;建立10批委陵菜的指纹图谱,用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004版)进行评价,聚类分析将10批药材分为2类;建立同时测定委陵菜药材中没食子酸、槲皮素及山柰酚3种成分的含量测定方法。结果建立了委陵菜的HPLC指纹图谱,共标定了12个共有峰;没食子酸、槲皮素和山柰酚线性关系良好,相关系数(r)均大于0.999。精密度、稳定性、重复性的RSD均小于3%,平均回收率分别为97.44%、97.64%、99.19%。结论建立的委陵菜的指纹图谱及多指标含量测定方法专属性强、重复性好,能有效地控制委陵菜的内在质量,为提高委陵菜的质量评价方法提供参考。     

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术的吴茱萸化学成分分析

目的 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱法（UPLC-Q-TOF-MS/MS）技术分析吴茱萸药材中的化学成分。方法 色谱条件为ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.7 μm）,流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水溶液（B）梯度洗脱（0~3 min,6%A;3~4 min,6%~10%A;4~7 min,10%~12%A;7~8 min,12%~14%A;8~13 min,14%~15%A;13~15 min,15%~20%A;15~18 min,20%~30%A;18~21 min,30%~49%A;21~25 min,49%~51%A;25~27 min,51%~73%A;27~30 min,73%~80%A;30~31 min,80%~100%A;31~32 min,100%A）,流速0.4 mL·min^-1,柱温35 ℃。质谱条件为电喷雾离子源,正、负离子全扫描模式采集数据,检测范围m/z 100~1 200。通过高分辨质谱数据分析、参考文献数据及对照品确认,对吴茱萸药材的化学成分进行快速、全面的定性分析。结果 从吴茱萸70%甲醇提取物中共鉴定出92个化合物,包括生物碱类39个、黄酮类19个、柠檬苦素类12个、酚酸类20个和有机酸类2个;通过与对照品比对,准确归属了26个化合物。结论 吴茱萸药材化学成分类型多样,极性差异大,但不同产地、不同品种的药材样品中化学成分基本一致。该研究建立的方法能快速、准确地对吴茱萸的化学成分进行全面解析,为该药材药效成分和毒性成分的进一步阐明提供了实验依据。     

党参线粒体和叶绿体微卫星标记的开发及应用

目的 由于不同基原和产地的党参有效成分差异较大,开发党参特异分子标记对于党参种质资源准确鉴定意义重大。方法 该研究应用生物信息学软件Primer 5.0,NTSYS-pc 2.10e,PopGene 32,对小党参Codonopsis minima叶绿体、秦岭党参C. tsinlingensis叶绿体和轮叶党参C. lanceolata线粒体基因组序列进行简单重复序列标记（SSR）位点搜索,利用Primer 5.0软件设计出120对SSR引物,筛选效果好且多态性高的16对cpSSR引物和10对mtSSR引物对20份党参材料进行种间通用性分析。结果 结果显示,分别从基因组序列中搜索到66个cpSSR位点和26个mtSSR位点,其中小党参叶绿体中单核苷酸（86.20%）,二核苷酸（6.9%）,三核苷酸（6.9%）;秦岭党参叶绿体中单核苷酸（83.78%）,二核苷酸（13.51%）,三核苷酸（2.71%）;轮叶党参线粒体中单核苷酸（46.15%）,二核苷酸（53.85%）。聚合酶链式反应（PCR）鉴定结果表明开发的26对SSR引物在党参属内具有很好的适用性。NTSYS-pc 2.10e软件分析显示20份党参材料的遗传相似系数在0.38~1.00,在阈值0.53处分为2个亚群。运用PopGene 32软件对20份党参进行多样性分析并筛选出4对多态性引物,分析发现观测等位基因数（Na）共为12个,有效等位基因数（Ne）为1.362 9~2.605 9个,各位点多态性位点百分率（PPL）均为100%,遗传学参数Ho,He,香浓指数（I）的平均值分别为0.555 8,0.444 2,0.753 2,说明各位点的多态性水平较高。以筛选出的4对引物对20份党参材料进行DNA指纹图谱绘制,发现DNA指纹图谱可将20份材料进行鉴别。结论 该研究可为党参属种间的亲缘关系和种内遗传分化研究提供分子依据。     

远志散人参方和党参方对记忆障碍的影响分析

目的 运用网络药理学和实验药理学方法探讨远志散人参方（YZSR）和党参方（YZSD）对记忆障碍的影响。方法 利用成分数据库和文献获取远志散（YZS）成分靶点,通过疾病数据库检索记忆障碍疾病靶点,用韦恩图取交集进行通路分析。对YZSR与YZSD共有成分与核心靶点进行分子对接。采用氢溴酸东莨菪碱盐造记忆障碍模型,通过行为学实验综合评估YZSR与TZSD对记忆障碍的影响。结果 筛选了33个人参化学成分,31个党参化学成分,其中有4个共有成分,380个共有靶点,合计YZSR有85个化学成分790个药物靶点,YZSD有81个化学成分,781个药物靶点。记忆障碍疾病靶点425个,与YZSR有133个交集靶点,YZSD有130个交集靶点,代谢通路均涉及钙离子信号通路、缺氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等。分子对接中共有成分与靶点结合能呈现负值,且灌木远志酮A结合效果最佳。行为学实验结果表明YZSR与YZSD对记忆障碍均有改善作用,跳台实验中YZSD错误次数较模型组显著减少（P<0.01）,水迷宫实验中YZSD运动距离较模型组明显缩短（P<0.05）,开场实验中YZSR和YZSD运动距离较空白组明显减少（P<0.05）。结论 远志散对记忆障碍有一定的影响,YZSR与YZSD在治疗记忆障碍存在着共性和异同。