含胎牛血清胶原酶消化法培养兔成骨细胞

背景:成骨细胞原代培养技术已经很成熟,然而各种消化酶单纯作用于原代组织时对成骨细胞膜蛋白有一定影响。目的:为尽可能避免酶对细胞的损害,用含胎牛血清的胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,进行体外成骨细胞培养,观察加入胎牛血清后胶原酶对成骨细胞消化的效果。设计:对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室。材料:实验于2004-03/12在华中科技大学同济医学院附属同济医院骨外科研究室完成。妊娠28d日本大耳白种孕兔2只。方法:将同一个批号的Ⅰ型胶原酶分别用含体积分数为0.15胎牛血清的培养基和DMEM溶液配制成0.1%的含胎牛血清的胶原酶和0.1%不含血清的胶原酶,分别作为实验组和对照组的酶消化液A液和B液。妊娠28d的孕兔,无菌条件下剖腹取出胎兔,然后取胎兔的颅盖骨,剔净、漂洗、剪碎。实验组和对照组分别加5mL37℃的A液和B液消化,两组均用含体积分数为0.15胎牛血清的培养液分别成梯度稀释为0倍、1倍、2倍和4倍后继续消化-培养成骨细胞。锥虫蓝染色测定细胞的存活率,细胞内碱性磷酸酶染色鉴定和测定成骨细胞的纯度,显微镜下观察细胞生长情况。主要观察指标:①用锥虫蓝染色来检测两组细胞的存活率。②以细胞内碱性磷酸酶染色来检测两组细胞的纯度。③用显微镜观察细胞形态来区别两组细胞的生长情况。结果:①细胞锥虫蓝染色结果:通过记数计算,实验组拒染率高达98%,细胞存活率高;对照组拒染率也高达95%,细胞存活率也较高。②细胞内碱性磷酸酶染色结果:实验组碱性磷酸酶染色阳性区域不少于95%,细胞纯度高;但对照组碱性磷酸酶染色阳性区域不超过75%细胞纯度较低。③显微镜下观察结果:实验组细胞饱满凸起,有立体感,细胞生长旺盛,营养充足;而对照组细胞凸起不明显,立体感较差,细胞生长营养较实验组差。结论:用含胎牛血清胶原酶消化胎兔颅盖骨骨组织,培养出的成骨细胞具有典型的成骨细胞特征,且成分单一,存活率高。     

术前决策辅助对关节置换患者决策参与的影响

目的探讨术前决策辅助对关节置换患者决策参与的影响。方法将120例关节置换患者以简单随机化法分组,奇数分配到对照组,偶数分配到观察组,每组各60例,对照组按常规实施护理,观察组在常规护理基础上实施术前决策辅助干预,比较两组患者决策参与意愿和实际决策参与有无差异。结果两组决策参与意愿类型比较,差异无统计学意义(P0.05);观察组实际决策参与程度显著高于对照组(P0.01)。结论术前决策辅助能提高关节置换患者在实际临床活动中的决策参与程度。     

不同浓度地西他滨对破骨细胞分化的影响

目的：探讨不同浓度梯度地西他滨对破骨细胞形成、活性及吸收功能的影响。方法不同浓度地西他滨（0、0.1、0.25和0.5μmol/L）处理单核巨噬（RAW264.7）细胞。通过4’,6?联眯?2?苯基吲哚（4,6?Diamidino?2?phenylindole dihydrochloride, DAPI）染色和微丝绿色荧光探针（F?actin?Trakcer Green）染色后观察F?actin环的形成即破骨细胞轮廓;抗酒石酸酸性磷酸酶检测试剂盒检测细胞上清中的抗酒石酸酸性磷酸酶活性,骨板吸收实验检测破骨细胞的骨吸收能力;Q?PCR实验检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate?resistant acid phosphatase, TRAP）、组织蛋白酶K（cathepsin K, CK）和脊髓基质金属蛋白酶?9（matrix metalloproteinase?9, MMP?9）的mRNA表达。结果不同浓度地西他滨抑制核因子NF?κB配体激活因子（receptor activator of NF?κB ligand, RANKL）诱导RAW264.7细胞形成F?actin环,降低了破骨细胞的TRAP酶活性,抑制了破骨细胞的骨吸收能力,同时也下调了破骨细胞标志基因TRAP、CK和MMP?9的mRNA表达。且随着药物浓度的增高,上述的抑制作用越明显。结论地西他滨抑制破骨细胞形成、活性和骨吸收能力,且这种抑制作用随着药物浓度的增加而逐渐增强。     

骨水泥型人工股骨头置换和PFNA治疗高龄股骨转子间骨折的疗效观察

目的：探讨骨水泥型人工股骨头置换和股骨近端防旋转髓内钉（proximal femoral nail anti?rotation, PFNA）治疗高龄股骨转子间骨折的临床疗效。方法回顾性分析三峡大学人民医院骨科自2008年1月至2013年11月采用骨水泥型人工股骨头置换术和PFNA固定术治疗的高龄股骨转子间骨折患者72例的临床资料,其中人工股骨头置换32例（人工股骨头置换组）,PFNA固定术治疗40例（PFNA组）。比较两组患者的手术时间、术中出血量、术后引流量及关节功能评分等。结果72例患者随访时间为12~36个月,平均20.8个月。PFNA组出现骨折延迟愈合3例。人工股骨头置换组手术时间为（49.1±10.6）min,优于PFNA组的（57.6±7.2）min;术后1个月及末次随访关节功能Harris评分分别为（61.20±4.37）分、（87.92±3.02）分,优于PFNA组的（54.60±3.18）分、（78.86±8.13）分,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;而术中出血量、术后引流量分别为（204.2±36.1）ml、（110.5±26.3）ml,多于PFNA组的（98.2±32.3）ml、（58.7±15.7）ml,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论两种方法均可有效治疗高龄股骨转子间骨折,术前根据患者情况选择适当治疗方式均恢复关节功能,提高患者生活质量。     

Yes相关蛋白通过Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的研究

目的研究Yes相关蛋白（Yes?associated protein, YAP）通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的机制。方法用siRNA分别沉默YAP基因和Lats1基因来调控YAP的活性,通过Real?time PCR检测软骨特异性基因和Wnt/β?catenin信号通路下游基因的表达;通过Western Blot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β?catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平;并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后,再用氯化锂干预细胞,通过Western Blot检测Sox9的表达和GSK3β的磷酸化水平。结果沉默YAP基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平减少,c?Myc和Nanog基因表达减少,Sox9、Col2和Aggrecan基因表达升高,并且软骨细胞分泌基质增多;沉默Lats1基因后,磷酸化GSK3β和活化β?catenin的蛋白水平增加,c?Myc和Nanog基因表达上调,Sox9、Col2和Aggre?can基因表达减少,并且软骨细胞分泌基质减少。此外,氯化锂可以阻断沉默YAP引起的Sox9表达上调。结论 YAP通过Wnt/β?catenin信号通路调控软骨细胞Sox9的表达。     

弹性髓内钉在治疗儿童长骨部分瘤样病变并病理性骨折中的应用

目的 探讨病灶刮除植骨结合弹性髓内钉内固定术治疗儿童长骨部分瘤样病变合并病理性骨折的疗效及特点。 方法 2010年 1 月至2013年 12月我院共收治儿童长骨部分瘤样病变并病理性骨折 16 例,均实施病灶刮除植骨并弹性髓内钉内固定术,通过术后影像学X线片结果和临床随访两方面评价治疗效果。影像学X线结果评估包括病变骨骨折复位有无丢失及病灶愈合情况。临床评估采用肩、肘、髋、膝、踝等关节功能综合评价标准及随访术后患者的满意度。结果 16 例患儿平均随访25.6个月。影像学X线片显示病理性骨折均达骨性愈合,愈合时间4～6个月,平均 5 个月。在随访过程中,病灶未出现复发或者再次骨折。术后平均 12.5 个月取钉。至末次随访时病灶完全消失（14 例）或部分消失（2例）;患肢无疼痛,关节活动均不受限。结论 病灶刮除植骨结合弹性髓内钉内固定术可作为治疗儿童长骨部分瘤样病变并病理性骨折的有效方法。     

软组织缺损患者行人工皮肤封闭负压引流的护理

目的：探讨皮肤软组织缺损患者行人工皮肤负压引流的临床疗效。方法：皮肤软组织缺损患者88例,行清创术后再根据创面大小填塞多孔医用泡沫型合成敷料并引入引流管缝合并持续负压吸引,同时配合康复训练及心理护理等。结果：术后5～18 d,88例患者创面与术前比较平均缩小10.2%,细菌培养阴性,无死腔残留或水肿,肉芽组织生长新鲜;行Ⅱ期植皮后,85例（95.6%）疗效达优。结论：负压封闭引流技术治疗皮肤软组织缺损可加速组织修复。     

音乐疗法对创伤性脊髓损伤病人抗焦虑、抑郁的疗效观察

目的 探讨音乐疗法对创伤性脊髓损伤（traumatic spinal cord injury, TSCI）病人焦虑、抑郁的干预效果。方法 回顾性分析2018年1月至12月在我科接受治疗的40例TSCI病人的临床资料。将2018年1月至6月采用常规护理管理的20例TSCI病人纳入对照组;2018年7月至12月采用常规护理管理联合音乐疗法的20例TSCI病人纳入观察组。观察并比较两组病人入院第1天和治疗结束后的汉密尔顿焦虑量表（Hamilton anxiety scale, HAMA）评分和汉密尔顿抑郁量表（Hamilton depression scale, HAMD）评分,以及两组病人治疗的依从性。结果 治疗结束后,观察组病人的HAMA和HAMD评分分别为（7.8±1.9）分和（9.4±1.6）分,均高于对照组的（10.4±2.3）分和（11.3±2.5）分,差异均有统计学意义（P均＜0.05）;观察组治疗依从率为95.0%（19/20）,优于对照组的70.0%（14/20）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 音乐疗法能帮助TSCI病人改善其焦虑和抑郁的不良情绪,增强治疗的积极性和战胜疾病的信心,增强TSCI病人治疗的依从性。     

关节镜下半腱肌-股薄肌重建后交叉韧带的康复护理

2005年1月-2006年7月我科收治的单侧后交叉韧带（PCL）断裂患者15例，均经MRI检查证实，男11例，女4例；年龄17-46岁；平均33岁；病程3-15个月，平均8个月；因车祸伤引起8例，运动伤4例，摔伤3例；均有膝关节疼痛、跛行，14例后抽屉试验阳性，伴有侧副韧带损伤1例，前交叉韧带损伤3例。     

Lenke1型青少年特发性脊柱侧凸融合术中顶椎确定下固定椎

目的 分析Lenke1型青少年特发性脊柱侧凸融合术中顶椎确定下固定椎的可行性.方法 82例Lenke1型患者,分为两组,按Cobb角度、Risser征、中立椎和下终椎配对.实验组以顶椎所处的节段作为依据选择下固定椎,对照组以中立椎为依据选择下固定椎.均行后路内固定和脊柱融合术,在站立位片上测量手术前后侧凸畸形矫正率和脊柱平衡;平均随访时间为3年.结果 冠状面Cobb角度和颈7距骶中线距离、矢状面胸5～胸12椎体后凸角度矫正参数差异无统计学意义.但是,对照组失平衡数较实验组多3个.结论 Lenke1型侧凸患者顶椎可以作为选择下固定椎的依据.