汉族成人部分外周组织褪黑素受体分布及意义

褪黑素 (melatonin ,Mel)具有广泛的生物学效应 ,但其在生物体内作用的靶器官未完全明确 ,阻碍了对它作用机制的进一步研究。本实验室研究显示人胚胎甲状腺、肾上腺、心血管等组织均存在MR。因而 ,明确外周组织是否存在MR ,对于研究Mel在更为广泛的生物学作用及其机制具有重要意义。目的 :证实汉族成人骨骼肌和皮肤等外周组织存在褪黑素受体 (mela toninreceptor,MR) ,并研究MR亚型及其亚细胞分布。方法 :所有组织均取自健康志愿者。用免疫组织化学和逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)产物基因测序等方法证实人骨骼肌组织存在MR及其亚…     

CD28在多发性硬化患者CD8+淋巴细胞的表达

目的探讨CD28在多发性硬化(MS)患者CD8+淋巴细胞的表达水平.方法流式细胞仪测定16例复发期MS患者和20例对照组外周血淋巴细胞CD28+、CD8+CD28-和CD8+CD28+的百分率.结果复发期MS患者淋巴细胞CD8+CD28-百分率低于对照组,CD28+和CD8+CD28+的百分率与对照组无明显差异;甲基强的松龙治疗对CD28+、CD8+CD28-和CD8+CD28+的百分率无影响.结论参与MS的发病的CD8细胞是CD8+CD28-细胞.     

寻常型天疱疮自身抗原Dsg3片段的重组表达和特异性细胞反应

目的 :探讨寻常型天疱疮自身抗原Dsg3在特异性T细胞反应中的作用 ,为自身免疫性疾病机制的研究提供依据。方法 :根据Genbank中的Dsg3序列分析 ,采用RT PCR法克隆自身抗原Dsg3E1,E2 ,E3,E4,E5多肽片段的cDNA ,定向插入表达载体PGEX 2T ,导入大肠杆菌JM10 9中表达重组融合蛋白并经GST层析柱纯化 ;进一步与PV患者及疾病对照组、正常对照组T细胞混合培养 ,观察T细胞增殖反应。结果 :Dsg3E1,E2和E4,E5可刺激PV患者T细胞反应 ,而不与疾病对照组、正常对照组反应。结论 :Dsg3E1,E2和E4,E5中包含T B细胞作用相关的抗原表位 ,在PV发病中起重要作用。     

血小板源生长因子对人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白合成的影响

目的:观察血小板源生长因子对培养的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白合成的影响。方法:采用培养的人血管成纤维细胞,应用 [³H]-TdR和 [³H]-脯氨酸掺入的方法,观察血小板源生长因子-BB对人血管成纤维细胞DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果:血小板源生长因子-BB可促进静止状态的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白的合成,在 30μg/L浓度时DNA及胶原蛋白的合成达到高峰,DNA及胶原蛋白分别于 2 4h和 36h合成最为显著。结论:血小板源生长因子-BB可明显促进培养的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白的合成     

人外周血淋巴细胞褪黑素受体的基因与蛋白表达的研究

目的:研究人外周血淋巴细胞褪黑素受体(MR)的基因与蛋白表达的特点。方法:分离健康成年人外周血淋巴细胞,采用异硫氢酸胍-苯酚-氯仿一步法抽提总RNA,分别采用Northern印迹和RT-PCR方法检测MR亚型mt₁和MT₂的mRNA,并将RT-PCR的阳性产物通过自动测序仪测序;同时应用免疫组化染色方法检测mt₁和MT₂受体亚型蛋白在淋巴细胞内的分布特点。结果:Northern印迹方法检测出长约1.1 kb mt₁ mRNA,但未检出长约1.1 kb MT₂ 的mRNA;RT-PCR方法则得到了368 bp mt₁ cDNA片段,无321 bp MT₂ cDNA片段,同时将mt₁阳性条带通过胶回收、测序,结果显示扩增产物与人mt₁受体亚型的基因序列相吻合;免疫组化结果显示:人外周血淋巴细胞存在mt₁受体蛋白,主要分布于细胞膜和细胞浆,呈棕褐色阳性颗粒,而细胞核上未见阳性颗粒,MT₂受体蛋白则未检出。结论:证实正常人外周血淋巴细胞存在mt₁的基因与蛋白的表达,而无MT₂的基因与蛋白的表达,提示外周血淋巴细胞为褪黑素(Mel)作用的外周靶器官,为研究生理及病理情况下Mel对免疫系统的调节奠定了基础。     

生物工程技术制备人源抗-HBs Fab 片段

目的：用生物工程技术制备人源性抗-HBsFab。方法：将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBsFab基因克隆入pBAD/gⅢA载体，进而转化Tpo10大肠杆菌，对重组质粒菌发酵表达后，利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab蛋白。对所得包涵体依次变性，溶解，纯化后，利用透析进行复性，用Western blot检测Fab蛋白的特异性，Dot blot测定其生物学活性。结果：经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白，有较好的生物学活性，并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后，也可得到少量有活性的蛋白，但比例很小。结论；用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBsFab片段，发酵培养后，经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白。为人源抗-HBsFab片段的大量制备提供了有效手段。     

Sihler''''s肌内神经染色法的研究进展

随着显微外科技术的发展，吻合血管神经的游离肌瓣移植已成为运动功能修复和重建的理想手术方法。临床上对用作移植肌肉的血管神经解剖提出了新的要求，尤其是肌内的血管神经分布。肌内血管的分支分布，因血管造影技术的应用，已经基本明晰。在肌内神经研究方面，Sihler’S染色是一比较理想的方法。本文就Sihler’S肌内神经染色的研究进展情况作一综述。     

视神经管区的临床应用解剖研究

对５０个成人尸头和３０个干性颅骨标本的视神经管区进行了显微解剖学研究，测量了视神经管的长度、口径及管壁的厚度、观察了视神经管内壁的毗邻结构关系，还测量了一些与视神经管减压术有关的数据。讨论了经鼻外筛、蝶窦视神经管减压时值得注意的若干问题。     

氧化修饰低密度脂蛋白可诱导人单核细胞源树突状细胞形成泡沫细胞

目的： 探讨氧化修饰低密度脂蛋白（ox-LDL）对人单核细胞源树突状细胞（DC）功能的影响。 方法： 采用免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞，经含rhGM-CSF（100 μg/L）和rhIL-4（20 μg/L）的Cellgro培养，使其分化为DC。DC与100 mg/L天然的或氧化修饰的LDL孵育72 h后，采用透射电镜和尼罗红染色观察细胞内脂质沉积，流式细胞术检测DC表型（CD1a，CD40，CD86，HLA-DR），混合T淋巴细胞反应检测DC对淋巴细胞增殖的影响，FITC-dextran检测DC吞噬功能，ELISA检测细胞培养上清Th1/Th2 (IL-12/IL-2)细胞因子的浓度。 结果： ox-LDL可诱导DC形成泡沫细胞，而天然的LDL无此作用。经ox-LDL处理的DC吞噬作用明显弱于天然的LDL，而对T细胞增殖作用却明显强于天然的LDL；可明显上调CD80(72.4±9.6 vs 89.5±10.1, P<0.01), CD86(67.2±8.8 vs 80.2±11.6, P＜0.01), HLA-DR(80.6±9.8 vs 86.6±10.8, P<0.01) 和CD1a(40.2±10.3 vs 60.2±9.3, P<0.01)的表达，明显促进DC细胞因子IL-12［(44.3±8.9)ng/L vs (65.1±10.4)ng/L, P<0.05］的分泌，但却降低IL-2［(43.6±7.8）ng/L vs （10.0±4.5）ng/L, P<0.01］。 结论： DC可通过摄取ox-LDL形成泡沫细胞，而后者与成熟DC的功能相似，说明DC可能是泡沫细胞新的来源，在动脉粥样硬化免疫病理发生中具有重要的作用。     

人体腰椎活动节段应力分布的实验研究

本文采用三维光弹性实验方法观察了正常腰椎活动节段的应力分布。用精密浇铸,严格几何相似的光弹性环氧树脂腰椎和硅橡胶椎间盘模型进行三维光弹性实验,并观察腰椎的等应力差图和有效应力值分布。本实验观察到,腰椎椎体上下缘应力分布较均匀对称,其后缘应力大于前缘,后部结构应力较小。作者认为,三维光弹性实验方法具有直观性强,能有效和准确地确定腰椎的应力分布,对腰椎生物力学研究具有重要的实用价值。腰椎后缘应力大于前缘,使椎体后缘承载较大,将会增加腰椎间盘退变和损伤的机会,这可能是引起腰腿痛的重要因素。