Screening host cell miRNA regulating HBV proliferation and HBsAg expression

目的 筛选调节乙型肝炎病毒( HBV)增殖和乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)产生的宿主细胞的miRNA.方法 用328种miRNA的反义链转染HepG2 2.2.15细胞,72 h收获上清,MTS检测细胞的增殖活性,ELISA检测表面抗原和e抗原的表达水平,实时定量PCR检测其中HBV DNA的拷贝数.构建筛选到的miRNA的过表达载体,转染HepG22.2.15细胞,也分别用MTS、ELISA和实时定量PCR进行检测.结果 miR-199a-3pASO、miR-210ASO和miR-185ASO促进了HBsAg产生和HBV增殖(P ＜0.05);miR-199a-3p、miR-210、miR-185的过表达,分别抑制了HBsAg的产生和HBV的增殖(P＜0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的ASO转染组与对照组相比,分别降低了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P＜0.05);miR-199a-3p、miR-210和miR-185的过表达载体转染组与对照组相比,分别增加了细胞内miR-199a-3p、miR-210和miR-185的表达水平(P＜0.05).结论 在没有对细胞的增殖活性产生影响的情况下,miR-199a-3p、miR-210和miR-185抑制了HBV表面抗原的产生和HBV的增殖,miRNA作为病毒与宿主细胞相互作用中的调节因子,在HBV的生命活动周期中具有重要作用.     

槐杞黄颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织nephrin和podocin表达的影响

目的：通过观察槐杞黄颗粒对阿霉素肾病大鼠肾组织中nephrin与podocin基因及蛋白表达的影响,探讨槐杞黄颗粒治疗肾病综合征的作用机制。方法：将Sprague-Dawley大鼠20只随机分为5组（即正常对照组、模型组、激素组、槐杞黄组和槐杞黄＋激素组）,除正常组大鼠外,各组大鼠尾静脉一次性注射阿霉素造模。分别在建模后第7、14、21及28天收集24h尿液,检测大鼠24h尿中的蛋白含量;第29天处死所有大鼠,取肾脏组织,光学显微镜和电子显微镜下观察大鼠肾脏病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测肾组织nephrin与podocin mRNA的表达,蛋白质印迹法检测肾组织nephrin与podocin蛋白的表达。结果：与正常对照组比较,从建模第14天开始模型组大鼠24h尿液中蛋白量增多（P=0.005）,并随造模时间延长逐渐增加（P=0.015,P=0.012）;从第14天开始,槐杞黄组与正常对照组相比,其尿蛋白减少不明显（P〈0.05）;第21天时,激素组与正常对照组相比,其尿蛋白明显增加（P=0.045）。光学显微镜下发现：模型组肾间质有灶性炎症细胞浸润,伴少量纤维组织增生;药物治疗组炎症细胞浸润较少。电子显微镜下发现：模型组肾小球足突大部分融合、消失,或出现部分微绒毛;槐杞黄组基底膜基本光滑均匀,足突融合明显减轻;激素组及槐杞黄＋激素组足突清晰,甚至接近正常对照组。与正常对照组相比,模型组肾组织中nephrin、podocin mRNA及蛋白表达均明显减少（P〈0.05）;与模型组比较,药物治疗组nephrin、podocin mRNA及蛋白表达均明显增加（P〈0.05）。24h尿蛋白量与nephrin mRNA以及nephrin和podocin蛋白的表达呈负相关。结论：槐杞黄颗粒可通过上调裂孔隔膜上的nephrin及podocin的表达维持足细胞裂孔隔膜的完整性,减轻肾小球滤过屏障的损伤,以此降低尿蛋白漏出。     

CTX-M-14和CTX-M-24编码基因的检测及其功能表达

目的　了解上海华山医院临床分离大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产生的超广谱 β 内酰胺酶 (ESBL)的基因型及其流行情况。方法　双纸片法和美国国家临床实验室标准委员会 (NCCLS)表型确定实验检测产ESBL菌株并对产ESBL菌株进行接合实验 ;提取产ESBL菌株及其转移接合子中的质粒 ,进行电泳分析 ;采用琼脂稀释法 ,测定各种菌株对多种抗菌药物的敏感性 ;TEM、SHV、CTX M 1组、CTX M 13组、Toho 1组通用引物检测产ESBL菌株及其转移接合子 ;编码框以外设计引物、聚合酶链反应 (PCR)扩增转移接合子中的CTX M 13组全编码基因 ,克隆入 pHSG398质粒、表达 ,并对PCR产物进行测序 ,分析其基因型 ;对这些产ESBL菌株进行脉冲场电泳 (PFGE)检测。结果　产ESBL菌株对多种 β 内酰胺类和非 β 内酰胺类抗生素耐药 ;产ESBL菌株可通过接合转移方式传递其耐药性 ,转移频率多为 10 -4～ 10 -5,多数非 β 内酰胺类抗生素的耐药性可以和ESBL耐药性发生共转移 ,琼脂糖电泳显示接合子从供体菌得到了一个 >2 3 1kb的质粒 ;转移接合子中仅CTX M 13组通用引物检测为阳性 ;4株转移接合子中CTX M 13组全编码基因序列与CTX M 14编码基因序列的同源性为 10 0 % ,其余 6株转移接合子中CTX M 13组全编码基因序列与CTX M 2 4编码基因序列的同源     

高血压性脑出血术后脑缺血的相关因素及治疗

目的:回顾性分析178例高血压脑出血术后脑缺血,脑水肿的相关因素及治疗方法.方法:随机将术后5～7 d后采用扩张血管降低血液粘滞度等药物的分为一组(治疗组)共108例.另一组为术后一直未用扩管药物的病例70例(对照组).并就两组病人的术后,功能康复的等级(ADL)及住院日等进行分析.结果:术后使用扩管药物组的ADL预后分级明显好于对照组,其住院日也明显缩短.结论:高血压脑出血术后5～7 d采用扩张血管改善微循环药物,其愈后明显优于不用扩管药物.故作者主张高血压脑出血术后5～7 d采用扩管及降低血液粘滞度药物,有利于脑功能的康复.     

大鼠外侧隔核的传出纤维联系

用HRP、WGA—HRP及CB—HRP法顺行追踪了大鼠外侧隔核的传出纤维联系。结果表明外侧隔核发生较多的纤维经内侧前脑束投射到下丘脑;经丘脑髓纹投射到丘脑带旁核、双侧内侧缰核,也有少量纤维投射到外侧缰核,外侧隔核向扣带皮质的投射主要终止在扣带皮质前部,少量纤维投射到后部。此外,有少量纤维投射到杏仁中央核、杏仁内侧核、中缝背核、中央灰质腹、外侧部、被盖腹侧区、脚间核及蓝斑等。     

无钛夹小操作孔腹腔镜阑尾切除术86例临床分析

目的探讨在腹腔镜阑尾切除术中运用丝线结扎阑尾动脉及阑尾根部的安全性及可靠性以及小操作孔的应用。方法 2009年7月至2010年12月间施行无钛夹小操作孔腹腔镜阑尾切除术的86例患者的临床资料进行回顾性分析。结果平均手术时间为41.5 min,术后平均住院3 d,无严重并发症发生。结论无钛夹小操作孔腹腔镜阑尾切除术具有创伤小、康复快、安全可靠、手术费用低的优点,可消除钛夹留置体内对患者心理及磁共振检查产生的不利影响。     

齐墩果酸片的处方优化设计

目的：筛选齐墩果酸片处方,确定其最佳制备工艺。方法：参照《化学药物制剂研究基本技术指导原则》,以齐墩果酸溶出度为指标,采用单因素考察及正交设计,对齐墩果酸片处方工艺进行优化。结果：优化处方为：预胶化淀粉与蔗糖5：1,硬脂酸镁（0．14％）,十二烷基硫酸钠（0．07％）,微晶纤维素（10％）。结论：齐墩果酸片处方合理,工艺可行,符合片剂的质量要求。     

Decorin inhibits MMP13 gene expression in human chondrocytes: an in vitro study

目的 体外原代细胞培养人正常关节软骨细胞,观察不同浓度的外源性核心蛋白聚糖(decorin,DCN)对软骨细胞基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteases 13,MMP13)表达的影响.方法 采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶结合消化法分离培养人透明软骨细胞,观察体外培养的软骨细胞形态,阿尔新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴定透明软骨细胞,从基因水平(实时定量PCR)检测不同浓度的外源性DCN(对照组:0,A组:2.5μg/ml,B组:25 μg/ml,C组:250 μg/ml)作用下透明软骨细胞对MMP13、X型胶原(Collagen X)表达的影响.结果 ①正常透明软骨细胞培养呈多角型,扁平状,换液培养5d时,细胞呈多边形、星形等,排列紧密呈“铺石板”样.②本法分离培养的原代透明软骨细胞的阿尔新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化均为阳性.③随着外源性DCN浓度(0～250μg/ml)的不断增大,Collagen X的表达明显降低(P＜0.01),且成剂量依赖关系(A:0.78±0.03,B:0.71±0.04,C:0.63±0.01),MMP13的表达则在DCN高浓度组(250 μg/ml)时明显降低(0.85±0.02,P＜0.01).结论 外源性DCN抑制透明软骨细胞的Collagen X的表达且成剂量依赖关系,高浓度(250μg/ml)对MMP13的表达起明显抑制作用.表明外源性DCN可能通过抑制透明软骨细胞肥大化抑制软骨细胞MMP13的表达.     

胆管空肠十二指肠X—Y分流术的研究

采用改良的胆肠内引流术式,即在端侧侧盲袢胆空Roux—en—Y吻合术基础上,附加一胆肠支空肠与十二指肠降段的侧侧吻合。经对照的动物实验后临床运用,术后胆管内不存在高压状态,胆汁引流通畅,可避免肠胆返流,胆汁与食物接触时间接近正常。病人术后胃酸分泌量不增高。术后随访3月～3年,优良率95.53％。     

乳腺癌围手术期中西医结合临床路径观察

目的：评估乳腺癌围手术期临床路径实施对住院天数、住院费用及医疗品质的影响。方法：制订乳腺癌围手术期中西医结合临床路径表,选择2006年至2009年可手术的乳腺癌病人153例随机分为两组,临床路径组75例按路径表实施诊疗过程,对照组78例按普通诊疗方法治疗,比较两组间的治疗效果。结果：实施临床路径可降低住院日平均费用（P〈0.05）,缩短住院天数（P〈0.01）。结论：乳腺癌临床路径可降低住院费用,缩短住院天数,值得推广应用。