针对不同靶位点的siRNA对人晶状体上皮细胞NF-κB P65表达的抑制作用

目的 探讨针对核因子-κB(NF-κB)P65亚基的小干扰RNA(siRNA)对晶状体上皮细胞(LECs)NF-κB表达的影响.方法 设计并合成3条NF-κB siRNA,1条阴性对照siRNA.实验分为6组,A组为正常对照组,常规体外培养HLE-B3细胞;B组为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激组;C、D、E、F组为转染组,分别转染4条siRNA,24h后加入含TNF-α的培养基培养.免疫印迹法、实时荧光定量PCR法分别检测NF-κB P65蛋白与mRNA的表达.结果 B组与A组比较,NF-κB P65表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.01).C组、D组与B组比较,NF-κB表达明显减少,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 特异性siRNA可以明显降低HLE-B3细胞株NF-κB P65蛋白及mRNA的表达,为RNA干扰治疗外伤性白内障奠定了基础.     

基于SD-OCT建立新的前膜分级法评估IMEM对年龄相关性白内障患者术后视功能的影响

目的：在单纯白内障术前,根据频域光学相干断层扫描技术(SD-OCT)显示年龄相关性白内障合并特发性黄斑前膜(IMEM)的患眼黄斑中心凹内部精细结构的紊乱程度建立新的IMEM分级法,评估其用于预测年龄相关性白内障患者的视功能预后的价值。

方法：选取2017-10/2018-11在暨南大学附属深圳市眼科医院因年龄相关性白内障单纯行超声乳化白内障摘除联合人工晶状体植入术,术前眼底检查发现合并IMEM者64例80眼,根据SD-OCT显示的IMEM对黄斑中心凹内部精细结构的破坏程度将IMEM分为4级。对合并各级IMEM的患者术前、术后3mo的最佳矫正视力(BCVA,LogMAR)、平均视敏度(MS)、黄斑中心凹厚度(CMT)、黄斑前膜进展率进行对比分析。

结果：在SD-OCT图像上,随着合并的IMEM分级的增高,前膜越明显,患者的黄斑中心凹凹部丢失和内部结构紊乱越严重。白内障术前及术后3mo的患眼BCVA随着所合并的IMEM分级升高而增加(F=37.72、26.43,均P<0.001)。白内障术前及术后3mo的患眼MS随着所合并的IMEM分级升高而降低(F=43.77、28.96,均P<0.001)。术后3mo CMT的改变和黄斑前膜进展率并不一致,合并各级IMEM的患眼CMT与术前均无差异(P>0.05),但黄斑前膜进展率呈显著上升趋势(χ²_趋势=12.59,P<0.001)。

结论：借助于SD-OCT对年龄相关性白内障合并的IMEM进行新的精细分级,可以更精准地预测该类患者单纯行白内障手术术后的视功能恢复情况。     

玻璃体内注射C_3F_8气体治疗复杂性陈旧性视网膜脱离

目的 探讨非玻璃体切割治疗复杂性视网膜脱离,尤其是PVH C级以上的病人。方法 对各种病因的复杂性视网膜脱离30只眼,采用改良的巩膜外扣带缝合方法,玻璃体腔内注入C_3F_8(全氟丙烷)气体。结果 术后随防半年～5年,平均1年半,视网膜复位25眼,术后18眼视力均有不同程度的提高。结论 在设备受限的情况下,对复杂性、陈旧性视网膜脱离的治疗。本方法简便易行,疗效可靠。     

角膜生物参数对青光眼患者眼压测量影响的研究

目的:探讨角膜生物参数对青光眼患者眼压测量的影响。方法:对80例121眼青光眼患者进行眼反应分析仪(ocular response analyzer,ORA)与Goldmann压平眼压计(Goldmann applanation tonometer,GAT)测量,并用先进的OrbscanⅡ眼前节分析系统测量中央角膜厚度(central corneal thickness,CCT)。结果:平均矫正眼压(IOPcc)值17.41±5.62mmHg;平均GAT值15.76±6.06mmHg;IOPcc与角膜滞后性(cornealhysteresis,CH)有相关性(P=0.000;r=-0.236);IOPcc与GAT显著相关(P=0.000;r=0.857);IOPcc与CCT无相关性。结论:对已经诊断的青光眼患者,平均IOPcc值高于平均GAT值;随着CH的降低,IOPcc值有升高的趋势;且IOPcc值不受CCT值的影响。     

不同降温速度对保存的角膜内皮细胞活性的影响

目的通过调节程序控制降温仪的降温速度保存兔角膜，以提高保存角膜的内皮细胞的存活率（ESR）。方法供体角膜150只随机分为对照组和实验组。对照组不做冷冻处理；实验组冷冻147只角膜，带巩膜缘1～2mm的角膜片分别在4种不同浓度梯度的冻存液中预处理各10min，再经过两个阶段（0～-18℃，-18～-80℃）49种不同程序逐步降温至-80℃，最后放入液氮中保存。1个月后水浴复苏供体角膜，洗脱冻存液、染色、同定，行镜下形态学观察并计算角膜内皮细胞存活率。结果镜下观察第一阶段降温速度为2℃／min、第二阶段降温速度为5℃／min时的方法较好，计数细胞的存活率达到75％以上，与其他不同速度下比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论不同阶段不同降温速度下，深低温保存兔角膜对角膜的内皮细胞存活率有明显影响。     

泪道硅膠插管及復方一枝蒿衝洗液治療泪道阻塞的療效評價

目的探索治療泪道阻塞的新器具、新藥液、新方法.方法實驗組99祗眼泪道阻塞(包括泪小管、泪總管、鼻泪管阻塞)病人采用硅膠管逆行置人插管,留管2～3個月,用復方一枝蒿泪道衝洗液定期衝洗.對照組36眼泪道阻塞用慶大霉素和地塞米鬆衝洗.結果觀察12個月以上,實驗組泪道通暢者達84眼(84.8%),對照組25眼(69.4%).結論泪道硅膠逆行插管及復方一枝蒿泪道衝洗治療泪道阻塞,爲該病種提供了一種新的治療途徑及方法.     

小干扰RNA沉默 HIF-1α对缺氧状态下脉络膜黑色素瘤细胞中MMP-2 表达的影响

目的：以小干扰RNA沉默人眼脉络膜黑色素瘤细胞中的低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)基因,在缺氧状态下观察其对人眼脉络膜黑色素瘤(human uveal melanoma cell,OCM-1)细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)基因表达的影响。

方法：将脉络膜黑色素瘤细胞分为正常组与缺氧组,其中将缺氧组再分成单纯缺氧组、干扰组、脂质体对照组、阳性对照组和阴性对照组; 对正常组细胞用含有浓度为10%的胎牛血清和1%的双抗(青-链霉素混合液)的DMEM高糖培养基进行培养。在缺氧组人眼OCM-1细胞的培养瓶中加入100μmol/L CoCl₂以构建肿瘤细胞内部的缺氧微环境。干扰组转染HIF-1α siRNA,阴性对照组转染无义siRNA,阳性对照组转染β-actin siRNA,脂质体对照组转染空脂质体。RT-PCR检测细胞中HIF-1α和MMP-2 mRNA的表达,行Western-blot检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达。

结果：与正常组相比,单纯缺氧组HIF-1α蛋白的表达增高(P<0.05),而其mRNA表达量无明显变化(P>0.05); MMP-2 mRNA及蛋白的表达升高(P<0.05)。缺氧培养的各组之间相比,阳性对照组β-actin mRNA表达下降(P<0.05),证实转染成功; 干扰组HIF-1αmRNA和MMP-2 mRNA和蛋白表达均下降(P<0.05),阴性对照组、脂质体对照组各检测因素均无明显差别(P>0.05)。

结论：缺氧条件下可以提高人眼脉络膜黑色素瘤细胞中HIF-1α蛋白的表达,而且HIF-1α蛋白的表达水平可以影响MMP-2的转录与翻译,从而可能进一步影响人眼脉络膜瘤细胞的外周浸润和远处转移能力。     

荧光标记大鼠全角膜新生血管和淋巴管的方法研究

目的探讨标记大鼠全角膜新生血管和淋巴管的方法。方法应用心脏灌注荧光联合全角膜免疫荧光法．共焦显微镜下区分并标记全角膜的新生血管和淋巴管。结果适度的抗体浓度和灌注时间下可标记出全角膜新生血管和淋巴管。血管呈黄绿色，淋巴管呈红色。结论心脏灌注荧光联合全角膜免疫荧光法可用于标记大鼠全角膜新生血管和淋巴管。     

反复自然流产绒毛生化学改变的研究

木研究对３４例反复自然流产（ＲＳＡ）、１０例１次流产及３８例正常妊娠人流绒毛组织，应用生物化学及免疫组化方法，检测绒毛组织中谷胱甘肽硫转移酶（ＧＳＴ）活性、腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）活性和还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量及γ谷氨酸转肽酶（γ－ＧＴ）免疫组化定位进行对比性研究。结果表明，ＲＳＡ绒毛组织较正常绒毛组织中ＧＳＴ活性和ＡＤＡ活性均有明显改变（Ｐ＜０．０１）。γ－ＧＴ免疫组化定位、阳性颗粒的分布及强度也有明显的差别。自然流产３次以上较２次和１次流产的ＧＳＨ含量和ＧＳＴ活性明显降低，经统计学分析均有非常显著差别（Ｐ＜０．０１）。该结果提示绒毛组织本身某些生化功能的改变，可能是原因不明的ＲＳＡ的原因之一。