荧光活性染料Dil标记人脂肪干细胞

目的观察荧光活性染料Dil标记的人脂肪干细胞生长增殖情况,为脂肪干细胞研究寻找理想的细胞标记方法.方法实验于2006-06/09在广州市创伤外科研究所完成.取人吸脂术中吸出的脂质部分,知情同意并签署知情同意书,用PBS缓冲液反复冲洗,剪刀剪碎.0.1%胶原酶37℃消化40min,使用等量体积含体积分数为0.1胎牛血清+DMEM+双抗完全培养基中和后,1 300 r/min离心5 min,去上清液,沉淀混悬后150 UM尼龙网过滤,按1×104-2×104接种于25 cm2培养瓶中,置入37℃、体积分数为0.05的CO2孵箱中培养,2～3 d换液.待细胞生长融合达80%即可传代,取第3～4代细胞供实验用.将收集细胞用PBS清洗离心2次,加入无血清DMEM制成细胞悬液,以1×109 L-1密度加入5μL Dil应用液,37 ℃下孵育20 min,1 500 r/min离心5 min,PBS清洗离心2次,加入含体积分数为0.1胎牛血清DMEM培养基,应用荧光显微镜观察24,48,72 h脂肪干细胞显色情况及形态变化.检测脂肪干细胞上清液乳酸脱氢酶含量及细胞XTT比色值,分析脂肪干细胞受损及增殖情况.结果①Dil标记脂肪干细胞体外观察台盼蓝染色见脂肪干细胞活力好,仅偶见蓝染细胞,荧光显微镜下观察,见全部细胞标记后均显红色荧光,标记的脂肪干细胞呈梭形,胞浆丰富,保持了良好的正常形态,Dil标记阳性率为100%.Dil标记后早期细胞形态呈荧光环状,48 h后细胞中荧光颗粒增多,荧光增强,细胞核未染荧光.②培养脂肪干细胞上清液中乳酸脱氢酶含量及XTT法检测脂肪干细胞受损及增殖情况未标记Dil的脂肪干细胞与标记Dil的脂肪干细胞形态、细胞上清液乳酸脱氢酶含量及XTT值差异不明显(P＞0.05).结论①Dil能有效标记体外脂肪干细胞,并在细胞内稳定表达.②Dil标记的脂肪干细胞形态良好,对活体细胞无毒性.     

Non-fusion expression in Escherichia coli, purification, and characterization of a novel Ca2+- and phospholipid-binding protein annexin B1

Annexin B1 is a novel member of the annexin family of Ca^2 - and phospholipid-binding proteins from Cysticercus cellulosae. To obtain high quality annexin B1 for biochemical and biophysical analyses, its cDNA was cloned into the prokaryotic expression vector pJLA503 and the translation initiation codon was immediately under the control of the inducible bacteriophage lambda promoters P(R) and P(L). Alter induction by shifting temperature, large amounts of non-fusion protein were produced in Escherichia coli in a soluble form. The recombinant protein was purified to homogeneity by means of two subsequent ion-exchange chromatographic steps. The final yield was about 25 mg/L bacterial culture.     

猝死型胰腺炎误诊分析3例

本文通过3例猝死型胰腺炎的发病过程及病理特点,分析了猝死型胰腺炎临床特征:(1)发病至死亡时间短暂;(2)无明显诱发因素;(3)无胰腺炎特异性体征;(4)胰腺病理改变比较轻微;(5)胰头部胰腺坏死与呼吸骤停可能相关.     

因卡膦酸二钠的合成

目的：合成因卡膦酸二钠,并进行工艺改进。方法：即以环庚胺、亚磷酸二乙酯、原甲酸三乙酸为为起始原料,经二步反应合成因卡膦酸二钠。结果：避免了硅胶柱分离工艺,产物经IR、NMR、MS及元素分析、热分析确证了化学结构。结论：合成方便收率稳定,工艺简单。     

人工神经网络在中药蟾酥化学模式识别特征提取中的应用

用对称的三层BP人工神经网络处理中药化学模式识别数据,既达到了提取特征和降维映射的目的,又减少了每引入一个样本重新计算各样本空间距离和分布的麻烦。提取的特征及相应误差用三维图形表示,可直接用于中药的化学模式识别。     

基于纳米抗体的CAR-T细胞有望治疗实体瘤

<正>据Xie YJ2019年4月1日(Proc Natl Acad Sci USA,2019 Apr 1.doi:10.1073/pnas. 1817147116)报道,美国波士顿儿童医院和麻省理工学院的研究人员发现微型抗体(mini-antibody)经进一步缩小后可形成所谓的纳米抗体(nanobody),可能有助于解决癌症领域的一个问题:让嵌合抗原受体(CAR)-T细胞疗法在实体瘤中发挥作用。1989年,比利时布鲁塞尔自由大学的两名本科生被要求测试骆驼的冷冻血清,偶然发现了一类以前未知的抗体。它是人体抗体的小型化版本,仅由两条重蛋白链组成,而不是由两条轻链和两条重链组成。正如他们最终报道的那样,这类抗体的存在不仅在骆驼中得到证实,也在美洲驼和羊驼中得到证实。     

二种双脱氧脱氢核苷的合成研究

目的：对双脱氧脱氢核苷的合成进行了研究。方法：以２′－脱氧核苷为原料,先用甲磺酰氯（ＭｓＣｌ）将３′５′－位羟基保护,然后在ＮａＯＨ水溶液中形成了３′５′－Ｏ－环状物,再步丁醇钾（ｔ－ＢｕＯＫ）作用生成２′,３′－二脱氧－２′３′－二接脱氢核苷化合物。结果：合成了２′,３′－二脱氧－２′,３′－二脱氢尿苷（总收率３４．４％）及２′,３′－二脱氧２′３′－二脱氢胸苷（总收率５２．３％）。结论：产品经     

孕大鼠在胚泡着床前给醋氨酚对移植仔鼠发育及行为的影响

目的:探讨药源性大鼠着床前胚泡异常对移植胚胎发育及行为的影响.方法:采用胚胎移植生物技术,评价亲代孕d 3给醋氨酚(0.25,0.5,1.0 g·kg-1),对胚泡的细胞毒性和遗传毒性及对移植后仔鼠生理功能和行为发育的影响,探索仔鼠发育与胚泡异常间的相关性.结果:醋氨酚1.0 g·kg-1对胚泡细胞产生细胞毒性及剂量依赖性遗传毒作用.孕大鼠胚泡着床前给予醋氨酚0.5,1.0 g·kg-1可引起仔鼠某些生理功能发育延缓,导致仔鼠行为畸形.结论:醋氨酚对着床前胚泡遗传毒作用与仔鼠某些生理功能发育延缓及行为畸形相关.     

肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞的分化

目的:探讨肝细胞生长因子诱导前软骨干细胞向软骨细胞分化的机制。方法:实验于2005-12/2006-03在河南省正骨研究院完成。①实验材料:普通级新生兔10只,平均体质量3kg。②实验干预:采用免疫磁珠分离技术分离新生兔长骨干骺端前软骨干细胞。利用肝细胞生长因子(浓度分别为0.5,1,2,4μg/L)作用前软骨干细胞;另以2μg/L肝细胞生长因子作用前软骨干细胞,对照用相同剂量的培养基,检测前软骨干细胞Ⅱ型胶原及Ⅱ型胶原mRNA的表达。③实验评估:采用光学显微镜观察前软骨干细胞形态及生长情况;四甲基偶氮唑盐比色法检测前软骨干细胞的增殖;免疫荧光检测Ⅱ型胶原表达;反转录-聚合酶链反应检测Ⅱ型胶原mRNA的表达。结果:①前软骨干细胞形态及生长情况:分离纯化的前软骨干细胞贴壁稳定,在光学显微镜下呈多角和梭形,生长旺盛,曲光度好。②前软骨干细胞增殖情况:细胞增殖率上升,在24,48,72h内呈时间浓度依赖。③Ⅱ型胶原表达:肝细胞生长因子作用第5天前软骨干细胞出现Ⅱ型胶原蛋白的表达。④Ⅱ型胶原mRNA的表达:在肝细胞生长因子刺激3d开始出现表达,并且5d,7d逐渐增加。结论:肝细胞生长因子作用前软骨干细胞后,出现软骨特征标志抗原Ⅱ型胶原的表达,细胞增殖活性上升,表明肝细胞生长因子能诱导前软骨干细胞向软骨细胞方向分化。其机制可能是前软骨干细胞也存在肝细胞生长因子受体。