5分钟短时心率变异性自回归模型频域分析的临床应用价值

目的:基于自回归模型5min心率变异性频域分析的临床价值,检验糖尿病患者5min短时心率变异性自回归模型分析频域指标的变化。方法:实验对象为50岁以上糖尿病患者9例和正常人7例,糖尿病史>6年7例,糖尿病史<3年2例。被试者采用坐姿,静息状态,测试30min的ECG信号,采样率为1000Hz。对每个样本取第10～15分钟的时长5min的RR间期作为心率变异性信号,进行基于自回归模型的频域分析。依据功率谱估计计算16例受试者的总能量,低频段能量,高频段能量,低频段高频段能量比值等指标参数。结果:通过对5min心率变异性自回归模型计算结果得出,糖尿病史>6年患者总能量、低频段能量、高频段能量低于正常人,差异有显著性意义(t=2.4952,2.7027,1.7299,P<0.05)。糖尿病史<3年患者总能量、低频段能量、高频段能量与正常人差异不明显。两类糖尿病患者与正常人低频段高频段能量比值无明显差异。结论:5min短时心率变异性自回归模型分析能够有效反映糖尿病患者自主神经的病变,可能成为检测自主神经病变的方法。     

急性ST段抬高型心肌梗死行急诊经皮冠状动脉介入治疗的二联和三联抗血小板治疗比较

<正> 在药物洗脱支架(DES)时代,对于急诊经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者,三联抗血小板治疗优于还是相同于二联抗血小板治疗?结论仍不明确。韩国急性心肌梗死注册研究(KAMIR)于2005年11月至2007年12月期间通过互联网络在41家具备急诊PCI条件和后备心脏外科手术的医院共注册13 632例患者。在排除了非ST段抬高型心肌梗死、使用金属裸支架或仅进行了球囊扩张治疗的STEMI、STEMI进行择期PCI或仅接受非PCI的保守治疗、心功能Killip Ⅳ级、禁忌抗血栓药物、已知有出血倾向、血小板减少症患者(<100×10~9/L)、正在服用抗血栓药物、经溶栓治疗的STEMI、桥血管病变致心肌梗死、严重肝功能或肾功能异常(血肌酐>20 mg/L)及预期寿命少于12个月等的患者,最终入选4203例。该研究对这4203例在急诊PCI(症状发生24 h内)并使用药物洗脱支架的患     

脐血单个核细胞成功培养的相关影响因素

目的:脐血来源丰富且免疫原性低,移植后排斥反应低的特性决定其具有临床应用的可行性。实验拟验证脐血单个核细胞数量与孕妇年龄条件、脐血量及制备因素的相关性,并证实其在体外培养的最佳条件。方法:实验于2006-03/2007-01在辽宁省血液中心输血医学研究所细胞研究中心完成。①实验材料:300份脐血均来源于足月分娩的健康孕妇,全部签署知情同意书。孕妇年龄20～35岁,其中≤25岁36例,>25岁264例;脐血采集量15～130mL,其中<33mL18例,≥33mL282例;采集到制备时间差为2～24h,其中>12h30例,≤12h270例。红细胞裂解液由本实验室自制,主要成分为高渗盐水和三蒸水。②实验方法:人脐血用枸橼酸钠抗凝,采用密度梯度离心法分离得到脐血单个核细胞,锥虫蓝染色结果表明活细胞比率达95%～100%。将脐血单个核细胞分别按1×106,5×106,1×107的密度接种,以未加细胞因子作为对照组,在无血清DMEM/F12培养液中加入20μg/L神经生长因子和2%神经营养因子B27作为扩增诱导组,于培养后的1,3,7d进行换液,培养周期选择5d、7～10d和15d。③实验评估:分别对脐血单个核细胞数与孕妇年龄、脐血采集量、采集到制备时间差的相关性进行分析。倒置荧光显微镜下观察细胞形态、细胞因子作用及最佳的种植密度、首次换液时间、培养周期。观察使用红细胞裂解液后对脐血单个核细胞增殖和分化的影响。结果:①脐血细胞的生长及形态特征:脐血单个核细胞刚接种时为散在的圆形细胞,2d贴壁,为散在的单个或数个细胞,呈长梭形,形态均一。3d左右细胞突起增加,细胞数量增多。随着培养时间的延长,可见多个细胞之间形成网络,诱导后出现神经样细胞形态。②脐血单个核细胞数的影响因素:脐血单个核细胞数与孕妇年龄不相关(r<0.3),与脐血量、采集到制备时间差均具有相关性(r>0.8)。③脐血单个核细胞培养影响因素:种植密度为5×106L-1、首次换液时间在3d左右、培养周期为7～10d的细胞生长状态较好。扩增诱导组脐血单个核细胞增殖和分化状态好于对照组。④红细胞对脐血单个核细胞生长分化的影响:红细胞裂解的最佳时间为45～50s,并发现红细胞对脐血单个核细胞的生长有一定程度影响,且破骨细胞较多。红细胞裂解后的脐血单个核细胞增殖分化较好,细胞形态较为均一。结论:①采集量为33mL、且采集到制备的时间差为12h的脐血制备单个核细胞数量超过1×108的成功例数较高。②5×106L-1接种密度、首次换液时间为3d、培养周期7～10d的脐血单个核细胞生长状态较好,神经细胞生长因子可促进其增殖分化。③红细胞裂解后脐血单个核细胞增殖分化更好,破骨细胞较少。     

鬼臼毒素-固体脂质纳米粒的皮肤毒理学实验

目的:考察鬼臼毒素-固体脂质纳米粒经皮肤用药的安全性。方法:实验于2005-12/2006-11在南方医科大学药学部实验室完成。选择Wistar大鼠140只,Fmmu豚鼠78只。采用改良的乳化蒸发-低温固化法制备5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒。①取豚鼠48只,按随机数字表法分成5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒完整皮肤组和破损皮肤组,每组4只,分别进行单次和多次给药皮肤刺激试验。单次给药方法:豚鼠背部两侧对称脱毛后用手术刀片作#字划痕,以渗血为度。采用同体左右侧自身对照法,左侧为受试区,分别取5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒混悬液0.1mL均匀涂布于受试区,右侧为空白对照区,再以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区。分别于去除敷料和清洗受试物后1,24,48h观察涂药部位有无红斑和水肿等情况,以及上述变化的恢复情况与时间。多次给药方法:皮肤处理方法、观察指标及评价指标同上,每日给药1次,连续给药14d。②取大鼠140只,按随机数字表法分成5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒完整皮肤组和破损皮肤组、正常对照组,每组10只,分别进行急性和长期皮肤毒性试验。急性毒性试验方法:脱毛后,分别取5,50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒混悬液1mL均匀涂布于受试区,连续观察14d,每日观察大鼠体质量、进食量、皮肤、呼吸、体态、眼、中枢神经系统、四肢活动、粪便性状及死亡情况。长期毒性实验方法:皮肤处理方法及观察指标同上,每日给药1次,药量均为0.1mL,连续给药30d,末次给药后24h麻醉后处死动物,取血3￣4mL进行血液学、血液生化学及皮肤病理检查。③取豚鼠30只,按随机数字表法分成50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组、阴性对照组及阳性对照组,每组10只,进行皮肤变态反应试验。方法:脱毛后,3组左侧脱毛区分别涂50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒混悬液、空白固体脂质纳米粒混悬液及10g/L二四二硝基氯苯0.1mL,涂药后以自制单层塑料薄膜和双层纱布封包受试区,6h后去除敷料和清洗受试物。第7天和第14天,以同样方法各重复1次,共3次。于末次给受试物致敏后14d,将受试物0.1mL涂于豚鼠背部右侧脱毛区,6h后去掉受试物,即刻观察皮肤变态反应情况,之后于24,48,72h再次观察皮肤反应。结果:纳入大鼠140只,豚鼠78只,均进入结果分析。①单次和多次给予鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠完整和破损皮肤均无刺激作用。②单次大剂量给予5mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒,未见对大鼠有急性毒性反应。给予50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组大鼠分别于给药后的前3,8d出现体质量减轻、食欲下降等全身中毒症状,尤以皮肤破损组表现较明显,以后逐渐恢复;每日小剂量给予5mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒及空白固体脂质纳米粒,未见对大鼠有明显长期毒性反应。③给予50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒组大鼠于给药后的18￣25d,均出现轻度的皮肤红斑、水肿、糜烂和结痂等炎症反应,于停药后1周内消退,皮肤组织病理学检查可见以表皮为主的急性炎症反应;鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠皮肤无致敏性。结论:在有效观察时间和一定质量浓度范围内,鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对豚鼠皮肤无刺激性及致敏性,对破损皮肤大鼠应用50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒大剂量时易出现全身急性中毒反应而完整皮肤及5mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒应用则较安全,小剂量长期应用鬼臼毒素-固体脂质纳米粒对大鼠比较安全无系统吸收毒性,但应用50mg/L鬼臼毒素-固体脂质纳米粒时可以出现轻度的皮肤炎症反应。     

应用水溶性壳聚糖为主要载体的重组人骨形态发生蛋白2缓释系统：降解缓释和成骨作用评价

目的：将水溶性壳聚糖为主要载体的重组人骨形态发生蛋白2缓释系统用于下颌骨缺损的修复,评价其降解缓释特性和诱导成骨作用。 方法：实验于2006-06/10在兰州大学动物实验中心完成。①实验分组：普通级家兔24只,体质量2.5～2.7kg,随机数字表法分为实验组（n=16）,对照组（n=8）。②实验方法：将复方骨形态发生蛋白生物黏附膜制备成试样1（复合材料,重组人骨形态发生蛋白/壳聚糖）,其中含重组人骨形态发生蛋白2100μg;将单纯壳聚糖经同法制成试样2（单纯壳聚糖）,并将其用于兔两侧下颌骨缺损动物模型的骨缺损修复。实验组分别于右侧骨缺损处置入试样1,左侧骨缺损处置入试样2;对照组则造成两侧下颌骨缺损后未置入任何材料。③实验评估：分别于第2,4,8,12周分批麻醉后处死动物,取下标本作大体观察、X线片、常规组织学检查,分别采用Motic Images Advanced3.0和Freemax图像分析处理软件计算骨矿化沉积速度以及组织学成骨面积定量分析。 结果：纳入家兔24只,均进入结果分析。①实验期间各组实验位点均未发生炎症和排异反应,各组创口愈合均良好,成骨活跃。②4,8,12周时试样1组的骨矿化沉积速度分别为1.91,1.5,1.12μm/d,明显优于对照组（P〈0.05）,4周时试样1组成骨量最多,其余两组成骨量差异不大;12周时试样2组与试样1组相比,成骨量的差异无显著性意义。但是试样2组也存在一定的成骨活性。 结论：复方骨形态发生蛋白生物黏附膜呈现良好的生物相容性和骨引导性,复合骨形态发生蛋白后早期通过骨形态发生蛋白的骨诱导作用对骨再生具有较明显的促进作用。其修复颌骨缺损具有较好的效果和临床应用前景。     

构建双突变型低氧诱导因子1α腺病毒载体的实验

目的:前期实验已成功构建无突变及564位是单突变腺病毒载体。在此基础上构建人双突变型低氧诱导因子1α腺病毒表达载体,为进一步研究低氧诱导因子1α基因及其突变体的临床应用奠定基础。方法:实验于2005-12/2006-12在南方医院心内科重点实验室完成。①实验材料:限制性内切酶PacI(NEB),PI-SceI、I-CeuI(Clontech);IPTG、X-Gal(Takara),转染试剂Lipofectamine2000(Invitrogen),凝胶回收试剂盒(Omega);DMEM(Omega);小牛血清(PAA);北京天为时代公司病毒基因组提取试剂盒;HIF-1α单克隆抗体(Chemicon International公司);羊抗鼠辣根过氧化物酶标记二抗(北京鼎国生物公司)。质粒、菌珠、细胞系等:Adeno-XTM-Adenoviral Expression Systems(BD.CLONTECH):包括有pShuttle2、pShuttle2-lacZ、Adeno-XTMViralDNA等;重组穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803及pShuttle2-lacZ(本室已构建成功);大肠杆菌DH5α(本室保存);HEK293A细胞(中科院上海细胞所)。②实验方法:采用分子克隆技术,以PI-SceI和I-CeuI双酶切重组穿梭质粒pShuttle2-HIF-1α-Ala564-Ala803,然后切下含有低氧诱导因子1αcDNA表达的盒片段,通过体外连接法与线性化的腺病毒骨架质粒Adeno-XViralDNA连接,重组成pAdeno-HIF-1α腺病毒质粒,经酶切及测序鉴定正确后,在HEK293A细胞中包装成为重组腺病毒Adeno-HIF-1α-Ala564-Ala803。③实验评估:进行PCR鉴定及滴度测定。用重组腺病毒转染293A,采用Westernblot鉴定低氧诱导因子1α蛋白表达。结果:提取重组腺病毒质粒pAdeno-HIF-1α-Ala564-Ala803以引物A、B和引物1、2、3、4进行PCR鉴定,分别扩增出287,460,214bp的3种引物片段,与预期一致,经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功。pAdeno-lacZ转染293A细胞后X-Gal原位染色,显示约有近20%左右细胞染成蓝色,病毒滴度为6.8×107pfu/mL。Adeno-HIF-1α-Ala564-Ala803转染293A后稳定表达低氧诱导因子1α蛋白。结论:成功构建了重组腺病毒突变型的Adeno-HIF-1α-Ala564-Ala803。     

赤芝子实体中三萜化学成分的研究

自赤芝[Ganoderma lucidum (Fr.)Karst]的二氯甲烷溶解部分分离得到一个新的三萜内酯化合物,命名为灵芝内酯(ganolactone)。根据光谱(UV,IR,¹HNMR,¹³CNMR,MS和2DNMR)解析,确定其结构为I式。同时还从赤芝子实体中分到三个已知化合物,即灵芝醇A(ganoderiolA,II),灵芝醇B(ganoderiolB,II)和灵芝三醇(ganodermatriolIV)。     

N-甲基-N-(α-取代萘甲基)取代苄胺类化合物的合成及抗真菌活性

报道25个N-甲基-N-(α-取代萘甲基)取代苄胺类化合物的合成及抗真菌活性。抑菌测试结果表明,目标化合物对于8种试验菌种均有不同程度的抑菌活性,化合物6,7,8,10,11和21等活性为naftifine的4～20倍,化合物8,10,11和21等活性为butenafine的2～10倍,化合物8,9,10,11和21等对Sporotrichum schencki及Aspergilus fumigatus的活性为clotrimazole的8～15倍,化合物7,8,9和21等对Cryptococus neoformans亦表现出较高活性,MIC为0.31～1.25μg·ml^-1。