H460小型细胞团在天然活性Ⅰ型胶原中三维立体培养模型的构建

目的:建立H460小型细胞团在天然活性Ⅰ型胶原中的三维立体培养技术。方法:实验于2006-07/11在解放军兰州军区兰州总医院呼吸内科实验室(博士后工作站)完成。①实验材料:H460细胞系由解放军总医院惠赠;Wistar大鼠,体质量150～200g,实验中的胶原仅从大鼠的尾部肌腱提取,该大鼠来源为其他科室实验过程中未做任何处理的大鼠。②实验方法:将H460小型细胞团悬液、鼠尾提取的天然胶原(4g/L)与4倍体积的DMEM共同混合为细胞浓度2×108L-1、胶原浓度为1g/L、1倍体积DMEM浓度。③实验评估:倒置显微镜观察细胞团在天然胶原中的生长状态,并与平面培养细胞相比较。结果:平面培养的细胞,其细胞团生长呈分散平铺的方式,单个细胞为不规则多边行,细胞之间有明显的间隙存在,而立体培养的细胞呈团块状,周围可见放射状毛刺突起,无法观察单个细胞。结论:H460小型细胞团在天然胶原中的三维立体培养为体外研究细胞生长及肿瘤细胞生长方式提供了一个更为类似体内环境的模型。     

帕金森病大鼠发病过程中黑质神经元的缺失形式

目的:帕金森病最终都表现为患者中脑黑质多巴胺能神经元缺失,观察帕金森病发病过程中黑质神经元的缺失形式。方法:实验于2003-05/12在北京市神经外科研究所完成。取SD大鼠25只,按随机数字表法分为2组:①帕金森病模型组大鼠(n=21)立体定向下于右侧内侧前脑束区注射6-羟多巴(2g/L),术后皮下注射阿扑吗啡05mg/kg诱导旋转行为,大于7r/min视为成功偏侧帕金森病大鼠模型。②对照组大鼠(n=4)注射等剂量含0.2g/L抗坏血酸的生理盐水。分别于术后7d,2周、4周随机抽取帕金森病模型组大鼠(n=7)处死,取中脑组织切片进行Nissl染色,检测切片黑质致密区灰度值;应用DNA原位末端标记技术检测凋亡细胞,并与对照组对比。结果:死亡大鼠作随机补充,进入结果分析仍为25只大鼠。①实验成功复制出21只符合临床特点的帕金森病大鼠模型,多数大鼠于术后一两周出现旋转行为,2周时达到高峰,显著高于术后3,7d[(13.83±2.69,2.67±1.00,9.33±4.07)r/min(P<0.05)]。②术后7d,2周、4周模型组大鼠损毁侧黑质致密区的灰度值分别为149.50±13.14,117.29±10.62,110.41±17.34,均显著低于对照组(169.56±7.13)(P<0.05),模型2周组显著低于模型7d组(P<0.05)。③模型组大鼠术后2周的凋亡细胞最多,显著高于术后7d和4周组(3.60±0.27,3.07±0.39,2.27±0.43,P<0.05)。对照组未见到明显凋亡细胞。结论:6-羟多巴诱导的帕金森病大鼠损毁侧中脑组织黑质致密区中存在多巴胺能神经元凋亡,细胞凋亡在帕金森发病中可能起关键作用。     

硬膜外超前镇痛对全髋置换手术患者血儿茶酚胺影响的特征

目的:观察超前硬膜外镇痛对全髋置换手术患者血儿茶酚胺的影响,评价其镇痛效果。方法:选择2004-06/2005-05经新乡医学院一附院骨外科检查确诊拟行全髋置换手术的患者40例。随机分为超前镇痛组和对照组,每组各20例。超前镇痛组硬膜外导管输入0.2%罗哌卡因5mL/h,对照组输注生理盐水。采用硬膜外麻醉,术毕开始病人自控硬膜外镇痛,药物为0.2%罗哌卡因5mL/h。记录局麻药用量、按压次数。采用100mm视觉模拟积分法,记录放置硬膜外导管前、到手术室后、术毕、术后1,2,3,6,9,12,24h的视觉模拟评分。用高效液相色谱法测定血浆去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺。结果:所有病例手术中麻醉效果完善,40例患者均进入结果分析,中途无脱落。①两组术前的罗哌卡因用量差异显著[(140.37±38.20),0mg,P<0.01];与硬膜外穿刺前及对照组进手术室后比较,超前镇痛组进手术室后的视觉模拟评分降低显著[(32.15±9.51),(31.13±11.28),(96.26±4.86)分,P<0.01]。②对照组病人自控硬膜外镇痛的按压次数明显多于超前镇痛组[(38.36±12.30),(24.48±9.50)次,P<0.01];两组术后罗哌卡因用量差异显著[(288.13±38.20),(384.61±67.44)mg,P<0.01]。③两组患者去甲肾上腺素、肾上腺素、多巴胺含量在术毕显著高于术前(P<0.01),术后24h超前镇痛组去甲肾上腺素、肾上腺素显著低于对照组。两组均没有发生明显的局麻药毒副作用。结论:超前硬膜外镇痛能有效抑制术后儿茶酚胺的增高反应,用于髋关节置换患者的镇痛效果良好。     

朝藿甙甲和朝藿甙乙的结构鉴定

自朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)地上部分中分离得到二个黄酮类化合物I和II,根据理化数据及光谱分析,其结构分别鉴定为:脱水淫羊藿素3-O-β-D-(6-乙酰基)吡喃葡萄糖(1→3)-α-L-(4-乙酰基)吡喃鼠李糖甙(I)和脱水淫羊藿素3-O-β-D-(2,6-二乙酰基)吡喃葡萄糖(1→3)-α-L-(4-乙酰基)吡喃鼠李糖-7-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(II)。I和I为新化合物,分别命名为朝藿甙甲(korepimedoside A)和朝藿甙乙(korepimedoside B)。     

炎性肠病活动性的分子标志物

炎性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)包括两个重要的肠病:溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn's disease,CD).IBD活动性的评估结果可指导临床制定治疗方案。现在临床上多采用复合指标进行评估,如:CD活动性指标、IBD研究国际分类法等。胃肠病学者希望能找到一个IBD活动性的分子标志物,有足够的特异性和灵敏度并易于监测。 1 抗体的检测 1.1 抗中性粒细胞胞质IgG抗体抗中性粒细胞胞质IgG抗体(antineutropil cytoplasmic IgG antibody,ANCA)是粒细胞特有的,最早见于血管炎,尤Wegener肉芽肿病多见,免疫荧光染色呈弥漫性胞质染色,后发现UC患者核旁ANCA染色带     

紫外分光光度法测定水杨酸软膏的含量

目的为准确测定水杨酸软膏的含量.方法采用紫外分光光度法测定软膏中水杨酸的含量,测定波长为296±1nm.结果水杨酸的平均回收率为100.6%,RSD为0.60%,线性范围12.5～25.0μg/ml,r＝0.9998.结论本方法简便、快速、准确、专属性强,可用于水杨酸软膏的含量测定.     

胃癌中微卫星不稳定性及DNA错配修复系统

1993年Altonen[1]首次发现遗传性非息肉病性大肠癌(herediary nonpolyposis colorectal cancer,HNPCC)细胞中存在高频率微卫星不稳定性(MSI)以后,许多学者相继发现在多种肿瘤中存在着微卫星不稳定性[2-6].DNA错配修复系统的发现,使微卫星不稳定性的起源得到深入的研究.近年来胃癌中微卫星不稳定性及其可能的致癌机制成为研究的热点,东西方学者由于地域、人群及研究的方法不同,对此研究存在不少争议[7-15].     

紫外分光光度法测定人参及三七中总皂苷含量

目的人参和三七及制剂中皂苷含量测定方法的系列研究.方法①用水饱和正丁醇提取样品中的皂苷;②超声波处理30min;③通过大孔树脂除去糖分等杂质;④用紫外分光光度法测定总皂苷含量.结果用本法测得的结果与文献报道结果相近.结论本法稳定性可靠,重复性好.     

养正合剂质量标准研究

目的建立养正合剂的质量控制方法.方法用薄层色谱法对其中枸杞子、人参进行了定性鉴别;用薄层光密度法对黄芪中有效成分黄芪甲苷进行了含量测定.结果表明本品定性鉴别色谱特征明显,易于区别;本品中黄芪甲苷含量测定线性范围为2～10μg,平均回收率95.8%,RSD为2.5%.结论建立了该制剂的质量标准,其鉴别与含量测定方法简便、可靠、实用.