RP-HPLC同时测定银杏达莫注射液中4种成分的含量

目的:建立银杏达莫注射液中双嘧达莫、槲皮素、山柰素和异鼠李素4种成分的反相高效液相色谱分析方法。方法:以SCIENHOME Kromasil C18柱(250mm×4.6mm,5μm),甲醇-0.4磷酸溶液(55∶45,v/v)为流动相,柱温(32±0.1)℃,于360nm测定银杏达莫注射液中上述4种成分的含量。结果:双嘧达莫、槲皮素、山柰素和异鼠李素分别在21.7~261.0μg/mL,8.0~96.0μg/mL、7.75~93.0μg/mL及5.75~69.0μg/mL内峰面积与浓度呈良好的线性关系。精密度(RSD分别为1.16%,1.35%,1.21%和1.58%)良好。4种成分的平均回收率分别为100.3%,100.0%,99.9%,99.8%。结论:本实验建立了可同时测定双嘧达莫、槲皮素、山萘素和异鼠李素4种成分的RP-HPLC方法。该方法简便、准确,可用于银杏达莫注射液的质量控制。     

白术的化学模式识别

目的:建立白术质量的化学模式识别方法。方法:采用高效液相色谱法对32个白术样品进行测定,并将获取的指纹图谱采用系统聚类分析和逐步判别分析进行化学模式识别研究。结果与结论:根据化学模式识别的研究结果,将32个样品分为优等品、一般品和伪品3个等级,初步建立了评价白术真伪优劣的新方法。     

人参药材色谱指纹图谱分析方法研究

目的:采用HPLC法建立了人参药材指纹图谱。方法:色谱柱:Zorbax SB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水(梯度洗脱),检测波长:203 nm,柱温:40℃,流速:1.0 mL/m in,分析时间:90 m in。结果:共标示出人参药材指纹图谱中18个共有峰。利用指纹图谱相似度测试软件,以夹角余弦为测度,测得10批人参药材指纹图谱相似度结果均在0.90~1.00之间。结论:本实验所建立的人参药材指纹图谱分析方法准确、重复性好,为有效控制人参药材的质量提供了可靠依据。     

本草蒜素液β—环糊精包合物的制备

目的：研究β-环糊精包合本草蒜素液的最佳工艺。方法：正交试验法,考察本草蒜素液的利用率、包合物含油率及包合物收得率3个指标。结果：优选出包合工艺为：本草蒜素液;β-环糊精1:12,pH值为6,包合时间为5h。本草蒜素利用率为94.61%。结论：此工艺适合制备环糊精包合物。     

INF-γ基因转染肺泡巨噬细胞抗肿瘤活性的研究

背景与目的活化的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)具有抗肿瘤功能,γ干扰素(interferon-γ,INF-γ)是巨噬细胞的活化因子之一,其与巨噬细胞体外共同培养可增强巨噬细胞的免疫功能。本研究旨在了解人INF-γ基因体外转染肺癌患者的AM后对其抗肿瘤功能的影响。方法经肺泡灌洗获AM,分离纯化,以INF-γ基因转染AM,以RT-PCR方法和ELISA方法检测人INF-γ基因的成功转染;分别检测AM产生TNF-α、NO、IL-1的水平及AM杀伤L1210细胞的活性。结果 RT-PCR方法和ELISA方法均显示人INF-γ基因已成功转染AM;经人INF-γ基因转染后,肺癌患者AM产生TNF-α、NO、IL-1的水平较对照组明显升高(P<0.05);AM杀伤L1210细胞的活性较对照组明显增强(P<0.05)。结论 INF-γ基因体外转染肺癌患者的AM,能使AM的抗肿瘤活性明显增强。     

bcl-2反义寡核苷酸对小细胞肺癌NCI—H69细胞凋亡的影响

目的探讨bcl-2反义寡核苷酸能否增加小细胞肺癌细胞NCI—H69的凋亡。方法将NCI—H69细胞培养传代,细胞共分4组,反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同浓度的寡核苷酸导人细胞中,WesternBlot法检测bcl-2蛋白的表达,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果与空白对照组比较,反义寡核苷酸组的bcl-2蛋白表达明显受到抑制,而正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组细胞的bcl-2蛋白表达则与空白对照组差异不明显。反义寡核苷酸组细胞在10、20、40umol／L 3个不同浓度时的凋亡率分别是（9．97±1．54）％、（15．28±1．73）％、（21．41±1．85）％,明显高于空白组和正义链、无义链组阴性对照组,且差异有统计学意义（F=7．19～15．48,q=5．21—7．98,P〈0．01）,而转染正义链和无义链组与空白组比较则差异无统计学意义。结论bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭bcl-2基因的表达,增加小细胞肺癌细胞的凋亡。     

抗癌活性肽对人胃癌BGC-823细胞周期的调控

目的:探讨抗癌活性肽(anti-cancer bioactive peptide,ACBP)对人胃癌细胞BGC-823细胞周期的影响及其作用机制。方法:体外培养BGC-823细胞,将不同浓度的ACBP作用于细胞,MTT法测定不同浓度的ACBP对BGC-823细胞的生长抑制率;HE染色观察形态学变化;半定量RT-PCR检测细胞周期负性调控分子p27基因mRNA表达的变化。结果:不同浓度(10.0～25.0mg/L)ACBP均能抑制BGC-823细胞的生长,细胞出现明显的凋亡特征性改变,且具有浓度和时间依赖性,25.0mg/LACBP作用72h抑制率为(84.4±2)%,中效浓度(IC50)为7.86mg/L。RT-PCR发现经ACBP处理后,BGC-823细胞的p27mRNA表达明显增加。结论:ACBP对BGC-823细胞的生长有明显的抑制作用,并可诱导细胞凋亡,其抑癌机制可能与其调控细胞周期有关,使p27mRNA重获表达,从而发挥抗BGC-823细胞增殖的作用。     

平调饮抗肿瘤作用的实验研究

背景与目的:建立H22肝癌腹水瘤荷瘤小鼠模型,通过给予模型鼠平调饮灌胃评价其抗肿瘤作用.材料与方法:用H22腹水肝癌株种植于小鼠右腋皮下,致移植性肿瘤,建立H22肝癌腹水瘤荷瘤小鼠模型.将模型鼠分成阴性对照组,平调饮组,平调饮+5-Fu组和5-Fu组,共4组,各组模型鼠分别灌胃生理盐水、平调饮、平调饮+5-Fu和5-Fu,连续灌胃10 d后,观察瘤体大小、胸腺指数、脾脏指数、抑瘤率、生命延长率和VEGF在肿瘤及肿瘤周围组织中的表达.结果:平调饮组肿瘤平均瘤体、VEGF值减小,胸腺指数、脾脏指数、抑瘤率(48.6%)及生命延长率(168.3%)增高.结论:平调饮可提高胸腺指数,降低5-Fu对免疫功能的毒性作用,显著延长荷瘤小鼠的生存期.平调饮可能通过促进肿瘤细胞分化成熟,抑制肿瘤细胞增殖,降低肿瘤组织和肿瘤周围组织中VEGF表达,而对H22腹水型小鼠肿瘤的发展起抑制作用.     

BMP-2联合温热化疗对SW480中GDF15和TFF3表达的影响

目的：探讨骨形态发生蛋白-2（Bone morphogenetic protein-2,BMP-2）联合温热化疗对SW480中GDF15和TFF3表达的影响。方法：BMP-2作用于大肠癌SW480细胞系,置于43 ℃温热化疗30 min,培养6 h。（1）流式细胞法检测SW480细胞的凋亡;（2）Western blot法检测GDF15和TFF3蛋白表达情况;（3）RT-PCR半定量检测GDF15和TFF3 的mRNA表达。结果：BMP-2联合43 ℃温热化疗后SW480细胞凋亡增加,GDF15和TFF3蛋白表达水平下降,GDF15和TFF3 的mRNA表达亦下调。结论：BMP-2联合温热化疗通过抑制大肠癌SW480的GDF15和TFF3蛋白及其相关基因表达,增强抑制SW480的增殖及转移复发的作用;温热疗法联合化疗对GDF15和TFF3表达抑制有协同作用。     

Slc4a11基因缺失在CHED发病中的作用

目的　探讨Slc4a11缺失在先天性遗传性角膜内皮营养不良（congenital hereditary endothelial dystrophy, CHED）发病中的作用及其与自噬信号通路的潜在调控关系。方法　利用CRISPR/Cas9技术构建Slc4a11基因敲除小鼠模型。以野生型小鼠（wild type, WT）和Slc4a11基因敲除小鼠（knockout, KO）为实验对象,通过Western印迹法、RT-qPCR、茜素红染色、H-E染色、透射电镜评估KO小鼠角膜表型特征的变化。通过Western印迹法和RT-qPCR检测自噬标志物LC3、beclin1、p62在角膜内皮的表达量。透射电镜观察两组小鼠角膜内皮细胞自噬情况。结果　Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示与CHED相似的表型特征,包括角膜厚度增加;角膜内皮细胞体积增大,密度减小;后弹力层增厚;角膜内皮空泡形成。KO小鼠与WT小鼠相比,LC3、beclin1的mRNA和蛋白的相对表达量上升,差异有统计学意义（P<005）,而p62的mRNA和蛋白的相对表达量下降,差异有统计学意义（P<005）。KO小鼠角膜内皮细胞内自噬体明显多于WT小鼠。结论　利用CRISPR/Cas9技术构建的Slc4a11基因敲除小鼠角膜显示CHED特征的表型。同时Slc4a11缺失通过增强自噬信号通路参与CHED的发病机制。