我国HIV-1 B''亚型毒株gag基因变异特征研究

目的研究我国人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）B’亚型主要流行株在宿主免疫压力下的基因变异及抗原表位的变化特征，探讨选择压力、基因离散率和抗原表位变化之间的关系。方法从确诊的HIV-1感染者的全血样本中提取基因组DNA，经套式聚合酶链反应（PCR）扩增后，将扩增产物进行纯化和测序。然后将所得序列进行系统进化树和氨基酸变异分析，使用GCG软件包的Distance程序对P17和P24两个区段计算基因距离，用Diverge程序计算同义替换（1（s）和非同义替换（1（a）及二者之间的比值，并对我国人群中较常见的HLA型别限制的CTL表位的突变情况进行分析。结果HIV-1B’亚型毒株的P17区段的Ks／Ka值〈1，而P24区段的Ks／Ka值〉1；P24部分的基因离散率低于P17部分；P17区段抗原表位的保守率为34．94％，而P24区段抗原表位的保守率为67．38％；从基因离散率、所受的选择压力及抗原表位的突变率3个方面来看，HIV-1的P17区段均明显大于P24区段。结论HIV-1B’亚型毒株的P17区段的抗原表位变化较大，而P24区段的抗原表位相对较为保守。提示P24区段的CTL表位更适合于表位疫苗的研制。     

天然角蛋白自身反应性B细胞亚群及功能的分析

目的:明确天然角蛋白反应性B细胞的亚群及解剖定位,初步分析其分泌天然抗角蛋白自身抗体(anti-keratinautoantibody,AKautoAb)的能力。方法:取SPF级C57BL/6小鼠的脾细胞和腹腔细胞,荧光抗体染色后用流式细胞仪分析角蛋白反应性B细胞亚群。将脾脏和腹腔淋巴细胞体外培养后,用ELISA分析AKautoAb的滴度,用ELISPOT法分析分泌AKautoAb的B细胞数。结果:腹腔中几乎所有结合角蛋白的B细胞均为B-1a细胞,脾脏中结合角蛋白的B细胞以边缘带B细胞为主。腹腔细胞中分泌AKautoAb的细胞数显著多于脾细胞,其培养上清中AKautoAb的滴度显著高于脾细胞。结论:角蛋白反应性B细胞存在于3个成熟B细胞亚群:B-1细胞、滤泡B细胞和边缘带B细胞,其中CD5 的B-1a细胞具有活跃的分泌AKautoAb的能力。     

IL-13对小鼠哮喘模型气道黏蛋白基因Muc5ac及Bcl-2、Bax表达的作用

目的研究白细胞介素-13(IL-13)处理小鼠支气管哮喘(哮喘)模型前后肺组织黏蛋白基因Muc5ac、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的作用,探讨气道黏液过度分泌的机制.方法45只雄性BALB/c小鼠随机分为对照组、哮喘组和IL-13组,每组15只.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和免疫组化法分别检测Muc5acmRNA、Muc5ac蛋白、Bcl-2蛋白以及Bax蛋白在肺组织的表达.结果哮喘组和对照组肺组织Muc5acmRNA分别为(0.1552±0.0057)和(0.0633±0.0013),Muc5ac蛋白分别为(0.8849±0.0257)和(0.1166±0.0064),两组比较差异均有统计学意义(P<0.01);IL-13组肺组织Muc5acmRNA和蛋白分别为(0.2807±0.0027)和(1.6138±0.0483),与哮喘组、对照组比较差异也均有统计学意义(P均<0.01).与对照组Bcl-2蛋白(0.3279±0.0136)、Bax蛋白(1.7284±0.0263)相比,哮喘组分别增加和降低(分别为0.8383±0.0310和0.8987±0.0106),两组差异均有统计学意义(P均<0.01);IL-13处理后可分别促进Bcl-2和Bax蛋白增加和降低(分别为1.6934±0.0229和0.3522±0.0152),其和哮喘组的差异均有统计学意义(P均<0.01);哮喘组和IL-13组小鼠肺组织Muc5acmRNA、蛋白表达与Bcl-2蛋白表达均呈直线正相关(P均<0.05),而与Bax蛋白表达则均呈直线负相关(P均<0.05).结论IL-13是引起哮喘气道黏液过度分泌的重要细胞因子,它可能通过改变Bcl-2和Bax的表达导致了上述病变.     

人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3的克隆

目的：克隆人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3。方法：从已获得的小鼠稳睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的表达序列标签片段（BE644537）入手，构建人同源表达序列标签重叠群，应用基因特异性引物和载体特异性引物，在睾丸cDNA文库的DN或进行巢式PCR扩增、测序，对测序结果进行生物信息学分析。结果：从睾丸cDNA文库中分离出人类睾丸凋亡相关基因的5’末端而获得全长cDNA,命名为TSARG3，GenBank登录号为AF419291（保密期为1年），同时应用相同方法克隆了该基因在小鼠中的同源基因，GenBank登录号为AF419292。结论：获得人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3，该基因可能与人类睾丸生精细胞凋亡有关。     

舒芬太尼用于腹部手术患者自控静脉镇痛的临床观察

目的探讨腹部手术病人自控舒芬太尼静脉镇痛的临床效果及安全性。方法选择气管内插管全身麻醉腹部手术患者计80例，ASA分级Ⅰ～Ⅱ级，年龄18～86岁，高中以上文化程度。随机分为两组，每组40例，一组为舒芬太尼镇痛组（S组），术后镇痛药物配方：舒芬太尼2μg／kg＋格拉司琼6mg加生理盐水至100ml；另一组为芬太尼镇痛组（F组），术后镇痛药物配方：芬太尼20μg／kg＋格拉司琼6mg加生理盐水至100ml。镇痛泵参数均设置为：负荷剂量4ml，背景输注速度1ml／h，自控剂量0．5ml，锁定时间15min。观察S组与F组的镇痛效果及不良反应。结果S组在各个时段静态和动态VAS评分均低于F组（P〈0．05）；S组镇静效果较F组评分略高，但两者差异无统计学意义（P〉0．05）；S组不良反应发生率少于F组（P〈0．01）；两组患者均未见明显的呼吸抑制发生。术后随访两组患者对镇痛效果的总满意度均在90％以上。结论腹部手术病人自控舒芬太尼静脉镇痛，具有良好的镇痛和镇静作用及安全性，且心血管的稳定性好，不良反应低。     

纤维蛋白原Bβ链基因-1420G/A、-993C/T和-854G/A多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病的关联研究

目的调查健康人和冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)患者的纤维蛋白原B(fibrino-genB,FGB)β基因-1420G/A、-993C/T和-854G/A的基因多态性频率分布,以及与血浆Fg水平的关系。方法应用等位基因特异性PCR扩增技术和限制性片段长度多态性技术对186例冠心病患者和149名健康对照者进行分析。比浊法测定血浆Fg浓度。结果等位基因频率-1420A在冠心病组为0.33,在对照组为0.26,冠心病组明显比对照组升高,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。等位基因频率-993T和-854A在两组之间无差别。Logistic回归分析显示β-1420G/A与冠心病相关(OR=1.922,P=0.003)。冠心病组血浆Fg水平(3.87±1.75)g/L较健康人组(3.10±0.77)g/L明显升高,且差异有统计学意义(P<0·05)。结论纤维蛋白原Bβ-1420G/A可能与冠心病发病相关联。     

家兔各组织蛋白二硫键异构酶的活性及含量研究

目的　探讨蛋白二硫键异构酶 (PDI)的生物学功能及与微粒体的关系。方法　应用改良的Hill son方法及酶联免疫技术 ,测定家兔不同组织细胞内PDI的活性及其含量。结果　家兔不同组织细胞内均有PDI分布 ,但酶活性及含量差异显著 ,在分泌功能旺盛的胰腺细胞、肝细胞其含量占细胞总蛋白的 2～ 6 % ,是肌细胞的 10 0倍 ,酶比活性为 4～ 2 4unit/g ,约为肌细胞的 80～ 40 0倍 ,不同细胞微粒体获得率明显不同 ,单位重量微粒体蛋白含量基本相同。结论　不同细胞内质网含量不同 ,而单位重量内质网的蛋白种类和含量具有一定保守性     

低氧诱导因子1α诱导卵巢癌细胞周期阻滞的研究

目的：探讨低氧诱导因子1α（HIF-1α）对卵巢癌细胞周期的阻滞作用。方法: 采用化学性低氧诱导剂氯化钴（CoCl2）和物理性低氧培养箱两种方法对体外培养的卵巢癌SW626细胞诱导低氧，用诱骗法（decoy）阻断HIF-1α功能，Western blotting、RT-PCR和流式细胞术分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达水平和细胞周期比率。结果： B1组(3.75±1.31)和C1组(3.48±1.01) HIF-1α蛋白表达水平明显高于A1组(0.97±0.31)（P<0.05), decoy法对HIF-1α蛋白表达没有明显影响(P>0.05)；A1组（0.65±0.32）和B1组（0.64±0.34）HIF-1α mRNA表达水平明显低于C1组（1.28±0.62）（P<0.05），decoy法对HIF-1α mRNA 表达没有明显影响（P>0.05）；流式细胞术检测发现B1组（81.78±24.33）和C1组（77.62±22.76）G0/G1期细胞比率显著高于A1组（49.49±18.54）（P<0.05）；B2组（61.54±20.84）明显低于B1组（P<0.05），C2组明显低于C1组（56.03±21.42），而A1组和A2组之间无明显差异（P>0.05）。结论：CoCl2或物理性低氧均能明显诱导卵巢癌细胞SW626 G0/G1期细胞周期阻滞和HIF-1α的表达，HIF-1α在低氧引起的卵巢癌细胞SW626的细胞周期阻滞中起重要作用。     

2008年北京市HIV-1耐药株传播调查

目的 了解2008年北京市未经抗病毒治疗HIV-1感染者中耐药株传播水平,为耐药监测和临床抗病毒治疗工作提供本底资料.方法 参照WHO提出的HIV耐药警戒线调查方法(HIV drug resistance threshold survey,HIVDR-TS)指导方案,收集6个月内检测发现的60～70名小于25岁的感染者血浆样本,检测HIV-1 pol区亚型及耐药基因型,并计算耐药株检出率、评价传播水平.结果 61份符合要求的样本共获得50个有效pol区序列.感染途径以同性传播为主,占62%;亚型分布以B(42%)、CRF01_AE(28%)、CRF07_BC(26%)3种为主.出现1例针对PI类药物的耐药突变株,检出率为2%(1/50);出现1例针对NRTI类药物的耐药突变株,检出率为2%(1/50);未出现针对NNRTI类药物的耐药突变株,检出率为0.蛋白酶(PR)区和逆转录酶(RT)区的耐药突变株检出率均为2%,均属于低度传播范围(<5%).结论 北京市未经抗病毒治疗HIV-1感染者中出现PR和RT区的耐药突变株,传播水平尚处于低流行状态,现有的抗病毒治疗方案是可行的,治疗前尚不需要进行大规模耐药性检测.     

白细胞介素及肿瘤坏死因子基因超家族在先兆子痫胎盘中的表达

为探讨白细胞介素和肿瘤坏死因子 (受体 )超家族基因表达与先兆子痫病理发生的关系 ,以包含 2 4 3种人类细胞因子相关基因cDNA片段的基因芯片 ,检测严格配对的先兆子痫和正常胎盘组织中基因表达谱的差异。结果显示受检的白细胞介素和 (或 )白细胞介素受体基因共 2 2种 ,绝大多数基因在先兆子痫胎盘中的表达增强 ,而IL 2受体 (IL 2Rα )基因 (Gen Bank :X0 10 5 7)在先兆子痫胎盘中的表达低于正常胎盘。肿瘤坏死因子 (GenBank :X0 2 910 )及其配体 (GenBank :U0 3398、U375 18、AF0 5 3712、AF0 5 5 872 )、受体 (GenBank :X6 0 5 92、X6 3717、M835 5 4、AF0 16 2 6 6、AF0 16 2 6 7、U812 32 )等 10余种肿瘤坏死因子 (受体 )超家族基因在先兆子痫胎盘中的表达也较高。说明 ,白细胞介素及肿瘤坏死因子 (受体 )基因超家族的高表达可能与先兆子痫的病理发生关系密切