2005年广东省临床分离猪链球菌的MLST分子分型研究

在2005年四川发生猪链球菌人间感染疫情期间.广东省也加强了监测,并发现了5个散发感染病例.从这5个住院临床病例中,分别分离了5个致病性SS2.通过测定猪链球菌基因组上的7个看家基因dpr、thrA、cpn60、recA、gki、aroA和mutS的部分片段.对这5个猪链球菌进行了多佗点测序分型.通过对上述测序片段进行比对分析发现,5个菌株的dpr、cpn60、recA、gki、aroA和mutS等6个基因片段完全相同;而thrA基凶片段存在两个等位基因型即thrA-c和thrA-h,在该等位基因片段的360位的亮氨酸码子第三位发生了一个中性突变(TTA→TTG).MLST分析结果显示,广东省的临床猪链球菌分离株L-SS002、L-SS003和L-SS005菌株.与四川疫情株相同,属于ST7型;而L-SS004和L-SS006,与香港地区发现的猪链球菌相同,属于ST1克隆;但这5个菌株亲缘关系极近,都属于ST1克隆复合物;这一点与四川省暴发的人间猪链疫情明显不同,后者仅由单一的ST7猪链球菌克隆引起.属于ST7的克隆菌株很可能来源于四川;而其余两个ST1克隆系菌株的来源尚待鉴定.     

冠心病患者血清同型半胱氨酸、超敏C反应蛋白、脂蛋白(a)和D-二聚体的水平变化分析

目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hsCRP)、脂蛋白(a)[LP(a)]和D-二聚体(DD)与冠心病的关系.方法 检测160例冠心病患者血清tHcy、hsCRP、LP(a)和血浆DD的浓度,另外选择健康人群80例作为对照组.结果 冠心病患者血清tHcy、hsCRP、LP(a)和血浆DD的浓度显著高于正常对照组(P<0.05).结论 联合监测血清tHcy、hsCRP、LP(a)和血浆DD的浓度变化对冠心病的预防和早期诊断及动态监测有着十分重要的临床价值.     

脑梗死与颈动脉斑块及血脂的相关性分析

目的:探讨脑梗死与颈动脉粥样硬化斑块及血脂代谢的关系。方法:对70例脑梗死患者(病例组)和38名正常体检者(对照组)行动脉彩色多普勒超声检查颈动脉硬化斑块,同时检测两组的血浆脂质代谢水平,包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和脂蛋白(a)[LP(a)]。结果:病例组70例,斑块检出率70.0%(49/70),明显高于对照组的18.4%(7/38)(P<0.01);同时比较两组的TC、TG、HDL-C、LDL-C和LP(a)水平。脑梗死组血浆TC、LDL-C水平高于对照组(P<0.05),其它血脂指标无显著差异,而LDL-C/HDL-C比值在两组有明显差异(P<0.01)。将病例组按颈动脉斑块的有无分为脑梗死 斑块组(CI P)、脑梗死无斑块组(CI-P),发现CI P组LDL- C、HDL-C较CI-P组分别有升高、下降趋势,但各自差异无显著统计学意义,而研究LDL-C/HDL-C比值则CI P组明显高于CI-P组(P<0.05)。结论:脑梗死发病与颈动脉粥样硬化斑块密切相关;高血浆TC、LDL-C水平促发脑梗死的发生,分析LDL-C/HDL-C水平与脑梗死的发生有很大的相关性,尤其对有颈动脉粥样斑块的脑梗死有重要意义。     

增抗宁胶囊质量标准研究

目的:建立增抗宁胶囊(白芍、黄芪)的质量标准.方法:用薄层色谱法鉴定白芍、黄芪;用HPLC法对白芍进行含量测定.色谱柱:岛津VP-ODS C18柱(4.6μm×250nm,5μm),乙腈-0.1%磷酸溶液(14:86)为流动相.流速1.0ml.Min-1,柱温:30℃,检测波长为230nm.结果:芍药苷在0.051μg～1.02μg范围内,芍药苷的浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9998).平均回收率为98.60%,RSD=0.52%,薄层图斑点清晰,阴性对照无干扰.结论:该质量控制方法简便可靠,精密度高,分离效果好,可用于增抗宁胶囊质量控制.     

shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰对人结肠癌LoVo细胞mTOR基因表达的抑制作用

目的探讨shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰技术对人结肠癌LoVo细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）基因表达的抑制作用。方法合成编码shRNA的特异性DNA序列，连接到质粒pGenesil-1，采用脂质体Lipofectamine^TM 2000转染LoVo细胞，G418筛选4周。根据转染质粒的不同，实验分为3组：A组（正常对照组）为未转染的正常培养LoVo细胞，B组（阴性对照组）为转染pGenesil-1空载体质粒，C组（阳性实验组）为转染质粒pGenesil-1-mTOR。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测LoVo细胞mTOR基因mRNA表达，免疫印迹（Western blot）法检测mTOR蛋白表达。结果双酶切产物琼脂糖凝胶电泳显示，重组质粒pGenesil-1-mTOR和空载体质粒pGenesil-1分别切出一条410、350bp大小的片段。G418筛选的转染细胞在倒置荧光照相显微镜下可观察到绿色荧光。C组LoVo细胞mTOR基因mRNA表达水平明显低于A组（P〈0.05），表达抑制率为73．0％。C组LoVo细胞mTOR蛋白表达水平明显低于A组（P〈0．05），表达抑制率为72．5％。结论shRNA真核表达质粒介导的RNA干扰可明显抑制人结肠癌LoVo细胞mTOR基因表达。     

翼状胬肉切除联合自体角膜干细胞移植术后巩膜融解

目的:探讨翼状胬肉切除联合自体角膜干细胞移植术后巩膜融解的原因及处理方法。方法:回顾性分析276例2001年3月至2006年8月在我院行翼状胬肉切除联合自体角膜干细胞移植术治疗原发性翼状胬肉患者,术后有7例(2.54%)术区巩膜出现融解坏死,取坏死组织涂片、微生物培养及病理检查,并对7例患者进行血清学检查。1例融解范围大者行带蒂球结膜瓣转位移植,修补将要穿孔处。7例采用贝复舒眼药水点眼并泰利必妥眼膏包眼,每天换药,持续3-5 d。待有血管长入术区巩膜时改为环孢霉素A眼水点眼4次/d。结果:7例患者细菌及真菌培养均未见微生物生长,病理检查:7例均未见白细胞浸润。1例修补术后及另外6例均恢复良好,眼球运动正常,视力同未行胬肉切除术前时视力。随访12-24月,7例术区外观无异常变化。结论:手术因素造成的局部损伤缺血及诱发的免疫反应等可能是自体角膜干细胞移植术后巩膜融解的因素。     

人视网膜色素上皮细胞条件培养液对视网膜干细胞生物学特性的影响

目的观察人胚视网膜色素上皮细胞条件培养液(HRPE-CM)对人胚视网膜干细胞(HRSCs)体外生物学特性的影响。方法利用HRPE-CM模拟体内环境,分为对照组、表皮生长因子(EGF) 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)组和HRPE-CM组。体外培养HRSCs,通过细胞计数方法比较不同环境条件对HRSCs体外生物学特性的影响,并进一步鉴定其神经干细胞特性。结果与对照组比较,HRPE-CM对HRSCs有明显的促增殖作用(P<0.01);与EGF bFGF组相比较,HRPE-CM的促增殖作用也更为强大(P<0.01)。在HRPE-CM中培养的原代和子代HRSCs均表达Nestin,具有自我更新能力和多向分化潜能。结论HRPE-CM对HRSCs的增殖能力具有明显的促进作用,并且能很好地维持其神经干细胞特性。     

外周血穿孔素和颗粒酶B mRNA检测对胰腺移植急性排斥反应早期诊断的价值

目的 研究胰腺移植术后外周血穿孔素和颗粒酶B的基因表达对急性排斥反应早期诊断的价值.方法 实验动物为杂种长白猪,分为3组(n=8):对照组,移植组.免疫抑制剂治疗组.移植手术为同种异体门静脉回流、肠内引流全胰十二指肠移植.免疫抑制剂治疗组在行同种异体胰十二指肠移植的同时应用环孢A 骁悉 甲强龙三联免疫抑制治疗.分别于术前1 d和术后1、3、5、7 d采集受者锁骨下静脉血,抽提总RNA,RT.PCR方法检测静脉血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达,检测受者血糖、胰岛素、胰高血糖素水平.在术后1、3、5、7d,开腹取胰腺组织进行常规病理学检查,与血液中穿孔素和颗粒酶B的mRNA表达水平进行比较分析.结果 ①对照组、移植组、免疫抑制剂组之间受体的血糖、胰岛素、胰高血糖素水平变化差异无统计学意义.②与移植组比较,免疫抑制剂组静脉血淋巴细胞中穿孔索和颗粒酶B的mRNA表达水平下降(P<0.05).③胰腺移植术后静脉血穿孔素、颗粒酶B mRNA表达变化比急性排斥反应病理学改变早2～d.结论 监测外周血淋巴细胞中穿孔素和颗粒酶B mRNA表达的变化,可以对胰腺急性排斥反应做出早期诊断.     

血清妊娠相关蛋白A水平对代谢综合征患者预后评价

目的探讨血清妊娠相关蛋白A(PAPP-A)水平对代谢综合征(MS)患者危险分层和预后判断的价值。方法测定120例MS患者血清PAPP-A水平,根据检测的血清PAPP-A水平,以PAPP-A水平的75%百分位数值作为分界点,分为高PAPP-A水平组和低PAPP-A水平组,各组随访6个月,报告主要急性心血管事件发生率(包括不稳定型心绞痛、非致命性心肌梗死)及发生急性心血管事件后行经皮冠状动脉介入治疗(PC I)或冠状动脉旁路移植术(CABG)进行血运重建及死亡发生情况。结果随访期间无死亡病例。高PAPP-A水平组发生急性心血管事件8例,其中7例行PC I治疗,1例行CABG治疗,急性心血管事件发生率为26.7%(8/30);低PAPP-A水平组发生急性心血管事件3例,其中2例行PC I治疗,无CABG治疗者,急性心血管事件发生率为3.33%(3/90),高PAPP-A水平组急性心血管事件发生率明显高于低PAPP-A水平组(P<0.05)。随着血清PAPP-A水平的升高,6个月急性心血管事件的发病危险性随之上升,2组之间存在正向中等强度联系(OR=3.62,95%CI=1.83~6.21,P<0.05)。结论血清PAPP-A水平可作为MS患者有价值的预测指标,对筛选MS患者中高危患者具有重要意义。     

广东省人感染猪链球菌2型10株病原学特征

目的分析广东省2005-2006年分离的10株2型猪链球菌菌株的病原学特征，为诊断、治疗和制定今后防控措施提供科学依据。方法对10株菌进行常规方法鉴定及PCR技术检测。结果经血清学分型和生化鉴定，10菌株均为猪链球菌2型，其中9株菌三种基因（菌种基因（16SrRNA）、荚膜多糖编码基因（CPS2J）和溶菌酶释放相关蛋白基因（mrp））均阳性，1株菌mrp基因检测阴性。结论广东省人感染猪链球菌病由2型猪链球菌引起。