内洋地黄素拮抗剂上调缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞膜钠泵亚基的表达

目的： 观察内洋地黄素特异性拮抗剂地高辛抗血清对心肌缺血再灌注（MIR）损伤大鼠心肌组织内洋地黄素水平、钠泵活性、线粒体总钙浓度以及钠泵各亚基基因表达的影响，探讨内洋地黄素在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法: 将56只雄性SD大鼠随机分成7组，每组8只。假手术对照组（sham）：丝线穿过左冠状动脉前降支，但不结扎；缺血再灌注组（MIR）：结扎左冠状动脉前降支30 min，再灌注45 min；生理盐水组（NS）、维拉帕米组（Ver）、小剂量、中剂量、大剂量地高辛抗血清组（ADA）：于再灌注前5 min经股静脉分别注射生理盐水、维拉帕米5 mg·kg^-1、地高辛抗血清8.6 mg·kg^-1、 17.3 mg·kg^-1、34.5 mg·kg^-1，容积均为5 mL·kg^-1，5 min内注射完毕，其余同MIR模型组。再灌注结束后，立即取缺血区左室心肌检测心肌匀浆内洋地黄素水平、心肌细胞膜Na+ K+_ATP酶和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性、线粒体总钙浓度；分别采用RT-PCR及Western blotting方法和免疫组化方法检测心肌钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果: 心肌缺血再灌注损伤时，心肌组织内洋地黄素水平明显升高，心肌细胞膜钠泵和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性显著下降，线粒体总钙浓度升高，钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基在mRNA及蛋白水平基因表达均明显下降；维拉帕米除具有降低线粒体总钙浓度外，对其它各项指标无明显影响。地高辛抗血清呈剂量依赖性地显著降低心肌组织内洋地黄素水平，恢复细胞膜钠泵和Ca2+_Mg2+_ATP酶活性，降低线粒体总钙浓度，上调钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基mRNA及蛋白水平的基因表达。结论: 心肌缺血再灌注促进机体内洋地黄素分泌增加，后者通过下调心肌细胞膜上的钠泵α₁、α₂、α₃和β₁亚基基因表达抑制钠泵活性，进而抑制Ca2+_Mg2+_ATP酶活性，导致线粒体内钙超载，介导心肌缺血再灌注损伤。内洋地黄素特异性拮抗剂地高辛抗血清通过阻断内洋地黄素的生物学作用，上调钠泵各亚基的基因表达，发挥其抗心肌缺血再灌注损伤的作用。     

巢式序列特异性引物PCR方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合的临床应用研究

目的探索临床应用巢式序列特异性引物聚合酶链式反应（PCR-SSP）方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合状态的可行性。方法选取25对拟行HLA单倍体相合造血干细胞移植治疗的实体肿瘤患者及其供者,供受者为母子关系15例,父子关系10例。采集供受者外周血提取基因组DNA,采用巢式PCR-SSP方法检测患者外周血中供者来源的HLA-DRB1位点,并计算母胎微嵌合阳性率。随机选取经巢式PCR-SSP证实嵌合阳性和阴性且供受者性别不同的患者各4例,采用荧光原位杂交（FISH）技术进行重复检测,并与巢式PCR-SSP方法的检测阳性率进行比较,同时采用噻唑蓝法检测这8例患者分别与其亲缘供者和HLA完全不相合无关第3人之间的混合淋巴细胞增殖反应（MLR）,并计算增殖指数（SI）。结果巢式PCR-SSP方法灵敏度可高达0.001%,并具有较好的特异性。巢式PCR-SSP检测显示,在母子移植关系患者中母胎微嵌合阳性检出率为40%（6/15）,而在父子移植关系患者中母胎微嵌合阳性检出率为0。巢式PCR-SSP方法的检测灵敏度与FISH技术相比明显增高,其检测阳性率分别为50%（4/8）和12.5%（1/8）。MLR检测显示,嵌合阳性患者对其亲缘供者和无关第3人外周血单个核细胞（PBMC）的SI分别为（0.949±0.023）、（1.320±0.095）,嵌合阴性患者对其亲缘供者和无关第3人PBMC的SI分别为（1.133±0.036）、（1.245±0.069）;嵌合阳性患者对其亲缘供者PBMC的增殖反应强度与嵌合阴性患者相比明显降低（P=0.001）,并且也显著低于其对无关第3人PBMC的增殖反应强度（P=0.003）。结论巢式PCR-SSP方法灵敏度高、特异性好,适用于临床HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合状态的快速检测。     

apoE基因敲除小鼠主动脉尾加压素Ⅱ受体GPR14表达的变化

目的：观察apoE敲除小鼠主动脉组织尾加压素Ⅱ受体-GPR14表达的变化，以探讨UⅡ及其受体系统在动脉粥样硬化发病中的作用。 方法： 取不同周龄（18、28 和38周）的apoE基因敲除及同龄对照C57BL/6J小鼠（各亚组n=6只），取主动脉，提取mRNA，行竞争RT-PCR。 结果： apoE敲除小鼠GPR14表达分别较同龄对照增加54.2%（18周，P<0.05）、50.0%（28周，P<0.05）、97.0%（38周，P<0.01）。取28周apoE基因敲除及同龄对照小鼠（各8只）主动脉行［125I］-尾加压素Ⅱ放射性配基实验，apoE基因敲除组最大结合力（Bmax）较对照组增大64%（P<0.01），而解离常数Kd值无明显变化（P>0.05）。 结论： 尾加压素Ⅱ/GPR14通路可能参与动脉粥样硬化的发病过程。     

放射损伤对于移植的骨髓间充质干细胞在受体大鼠不同器官中植入的影响

目的： 探讨放射损伤对于骨髓间充质干细胞（MSCs）移植后在受体大鼠不同器官中植入的影响以及可能的机制。方法：采用DNA缺口末端标记法(TUNEL)检测正常对照组和单纯放射组大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏的细胞凋亡率。应用密度梯度离心法结合贴壁法提取雄性大鼠骨髓MSCs，培养后把MSCs移植到［60COγ］照射和未经照射的雌性大鼠体内，通过PCR和Y染色体荧光原位杂交（Y- FISH）示踪雄性大鼠MSCs在雌性大鼠体内的分布情况。结果：照射后大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏细胞凋亡率显著高于对照组。PCR结果显示照射后移植MSCs的大鼠心脏、肾脏、肝脏、肺脏和外周血中可以扩增出Sry基因的DNA序列，而且Y- FISH显示照射后移植MSCs的大鼠在心脏、肾脏、肝脏、肺脏中可发现Y染色体阳性的细胞。但是未经照射行MSCs移植的大鼠在上述器官中未发现Y染色体阳性的细胞。结论：全身放射促进组织细胞的凋亡，并导致移植的MSCs在受体大鼠心脏、肾脏、肝脏和肺脏的植入。     

表达前列腺特异性膜抗原的DNA疫苗对肿瘤细胞的抑制作用

目的构建表达前列腺特异性膜抗原（PSMA）的DNA疫苗，观察其在体外对肿瘤细胞的免疫攻击和在体内对肿瘤细胞攻击的免疫保护作用。方法通过稳定转染构建表达PSMA的小鼠黑色素瘤细胞系B16-PSMA，将DNA疫苗pCDNA3．1-PSMA通过肌肉注射导入C57BL／6小鼠体内，分离小鼠脾细胞，检测细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）反应。以B16-PSMA细胞攻击免骺小鼠，观察免疫动物的无瘤生存期和肿瘤体积增长情况，评价DNA疫苗的抗肿瘤作用。结果DNA疫苗可诱导小鼠脾淋巴细胞CTL活性，经过免疫后的小鼠成瘤率降低，无瘤生存期延长，肿瘤生长缓慢，肿瘤组织内有较多淋巴细胞浸润，表明产生较强的抗肿瘤反应。结论表达PSMA的DNA疫苗能够诱导小鼠产生特异性免疫反应，对表达PSMA的肿瘤细胞的攻击产生免疫保护作用，为前列腺癌的预防和免疫治疗提供了新的思路。     

磷酸组织胺诱导的Ⅰ型超敏反应对肝损伤作用的研究

目的:通过观察与Ⅰ型超敏反应相关的生物活性介质--组织胺对家兔肝脏有无直接损伤作用,进一步论证Ⅰ型超敏反应对肝脏的损伤作用.方法:选择34只家兔随机分为对照组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组3组;对照组只进行正常饲料喂养,实验Ⅰ组在正常饲料喂养的同时每天给予0.4μg/kg耳静脉注射磷酸组胺注射液,实验Ⅱ组在正常饲料喂养的同时每天给予0.08 μg/kg耳静脉注射磷酸组胺注射液;动态观察以上3个组的血清谷丙转氨酶(ALT)及血清谷草转氨酶(AST)变化;利用光学显微镜观察以上3个组肝组织的病理变化.结果:无论是实验Ⅰ组或实验Ⅱ组,经过一段时间的观察,发现血清内ALT和AST含量均显着高于对照组(P＜0.01),但Ⅰ、Ⅱ组之间无显着性差异(P＞0.05);实验Ⅰ组和实验Ⅱ组在显微镜下观察,其肝脏均有不同程的损伤和病理改变,且实验Ⅱ组的损伤和变化大于实验Ⅰ组,而对照组的肝脏则无明显的病理变化.结论:组织胺对家兔肝脏确实有一定的损伤作用,而且随着投予剂量和时间的增加,肝脏的损伤和病理变化也越显著;通过本研究,可以得出Ⅰ型超敏反应导致肝脏病理变化及损伤的见解.     

系统性红斑狼疮患者新的内源性逆转录病毒 NP9基因表达及其蛋白功能预测

目的研究新发现的人内源性逆转录病毒 NP9基因在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)患者体内表达及其蛋白功能预测.方法逆转录PCR、T-A克隆技术和DNA序列测定分离、克隆和分析 NP9基因, 检测40例SLE患者和48名正常对照的 NP9基因表达, 借助NCBI BLAST系列分析工具及相应的基因分析软件预测其蛋白功能.结果 SLE患者组逆转录病毒 NP9基因表达阳性率为77.5%(31/40),明显高于正常对照的8.3%(4/48), P<0.01. NP9基因编码产物由74个氨基酸组成,含有多个细胞核内分布信号,其等电点(pI)为9.59,与SLE患者体内高表达的某些细胞因子具有较高同源性.结论 SLE患者存在逆转录病毒 NP9基因特异性转录, NP9表达可能与SLE发生发展相关.     

脑缺血后TLR4作用与小胶质细胞的激活

脑缺血性损伤早期小胶质细胞即被激活。激活的小胶质细胞既有细胞毒性又有神经营养作用。小胶质细胞行使免疫功能的信号转导受体之一是TLR4（toll-like receptor 4）。TLR4在脑内主要表达在小胶质细胞，是一种模式识别受体（pattern recognition receptor，PRR）, 识别一些外源性和内源性的配体。最近的研究表明，TLR4信号通路在脑缺血再灌注损伤中起重要作用。TLR4通过激活小胶质细胞，大量表达炎症因子，加重脑缺血性损伤。     

基于骨和无有机成分骨与羟基磷灰石压缩性能实验比较的强度分析

目的分析判定以珊瑚为基体,通过水热交换法制成的羟基磷灰石植入体内后的强度是否可以达到活体骨的水平。方法实验测量羟基磷灰石、含有机成分的骨、无有机成分的骨的压缩极限应力。通过对比羟基磷灰石、骨及无有机成分的骨的压缩强度差别,确定胶原纤维对骨压缩强度的作用,进而应用经验模型预估人造羟基磷灰石在一定空隙度(0.1～0.5)范围变化时的强度。结果羟基磷灰石、骨及无有机成分的压缩强度分别为14.1 GPa、207 GPa和31.7 GPa。结论去除骨中的有机成分后其压缩强度降低约80%。水热交换法制成的羟基磷灰石抗压强度可能高于骨内羟基磷灰石,这种骨替代材料植入体内后,随着骨和纤维组织在内部生长,其强度有可能达到活体骨的水平。     

CT模拟定位三维适形放射治疗食管癌的临床研究

目的探讨CT模拟定位三维适形放射治疗食管癌的疗效。方法1997年4月～2002年7月,经病理证实的食管鳞状细胞癌87例患者，其中男性56例，女性31例，年龄42～75岁，平均年龄62.5岁，随机分为2组，两组患者一般情况、性别、年龄及病变部位构成经统计学检验无统计学意义，一组为采用CT模拟定位进行三维适形放射治疗，另一组为常规模拟定位放射治疗，两组的剂量都为64～66Gy／32.33次／6.4～6.6周。结果采用Kaplan—Meier法计算生存率，并用Log—Rank检验其差异性。治疗计划各指标分析采用kolmogorowSmirnov法行正态分布检验，继而行t检验，以P〈0.05为差异有统计学意义。CT模拟定位三维适形放射治疗组和常规模拟定位放射治疗组1、2、3、4年生存率分别为70.1％、55.6％、40.4％、36.3％和65.4％、50.6％、30.6％、20.9％（p〉0.05）。但是对Ⅰ～Ⅱ期患者，CT模拟定位三维适形放射治疗组和常规模拟定位放射治疗组的生存率分别为81.2％、75.5％、67.3％、61.5％和80.1％、65.7％、54.9％、29.7％（P〈0，05），局部控制率分别为75.6％、71.7％、65.5％、59.0％和65.4％、50.6％、33.3％、25.6％（P〈0.05）。而对于Ⅲ～Ⅳ期的患者，两组之间的生存率和局部控制率差异无统计学意义。结论CT模拟定位三维适形放射治疗的疗效明显好于常规模拟定位放射治疗组。特别对Ⅰ-Ⅱ期早期食管癌患者两组之间差异有统计学意义，而对晚期患者差异无统计学意义。