Akt基因治疗大鼠肝硬化门静脉高压症

目的:探讨肝硬化时肝组织内Akt和eNOS的活化是否受到抑制以及腺病毒介导的Akt基因治疗门静脉高压症的可行性.方法:以细胞内同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Ad-myr-HA-Akt和Ad-EGFP.采用四氯化碳复合法制备肝硬化门静脉高压症大鼠模型.取10只正常大鼠作为对照,另取40只肝硬化大鼠随机均分为4组:未处理组、Akt治疗组、EGFP组和生理盐水组.后3组分别经尾静脉分别注射Akt重组腺病毒、Ad-EGFP和生理盐水后,3 d后,分别测定各组的门静脉压力、平均动脉压和心率.用免疫印迹法检测各组大鼠肝组织内Akt,p-Akt,eNOS,p-eNOS蛋白的表达;硝酸还原酶法检测各组肝内NO含量.EGFP组于转染后3 d处死大鼠,取肝、心、肺、肾、脑、脾和睾丸,快速冰冻切片,观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果:Ad-myr-HA-Akt和Ad-EGFP经纯化后滴度分剐为5.5×1011vp/mL和6.0×1011 vp/mL.肝硬化大鼠肝内Akt和eNOS的活化均受到抑制,肝内NO生成减少,门静脉压力升高.Akt重组腺病毒治疗能使受到抑制的Akt和eNOS磷酸化得到恢复,同时增加肝内NO含量,降低门静脉压力.而经Ad-EGFP和生理盐水处理组,Akt和eNOS磷酸化不能恢复,肝内NO含量和门静脉压力与未经治疗大鼠相似.EGFP组在Ad-EGFP转染后3 d肝组织中可见大量绿色荧光,肺和肾组织中仅见少量荧光,而其他实质器官未见EGFP表达.结论:肝硬化时,大鼠肝内Akt和eNOS的活化均受到抑制,导致NO生成减少而肝内血管阻力增加,表现为门静脉压力升高.以腺病毒介导的Akt基因治疗门静脉高压症可行.     

低、高频超声在急性阑尾炎诊断中的应用价值

目的探讨低、高频超声在急性阑尾炎诊断中的应用价值。方法对100例患者先应用低频探头进行检查(其检查结果设为A1组),然后再用高频探头进行补充检查(为A2组);另97例先用高频探头检查(其结果为B1组),再用低频探头进行补充检查者(为B2组)。将超声检查结果与病理结果对照。结果仅应用低频超声诊断急性阑尾炎(A1组)符合率为65%,补充应用高频探头后(A2组),符合率为84%;仅用高频超声诊断急性急性阑尾炎(B1组)符合率为79.3%,补充应用低频探头后,符合率为85.6%(B 2组)。综合应用高频与低频探头诊断急性阑尾炎的诊断符合率(A 2、B2组)与应用单一探头(A1、B1)相比有显著差异(P<0.05)。结论低频与高频探头综合应用诊断急性阑尾炎可相互取长补短,明显提高超声诊断阑尾炎的符合率,可为临床治疗提供更多依据。     

人源性抗核抗体Fab片段的筛选及鉴定

目的:制备人源性抗核抗体Fab片段.方法:通过4轮淘筛,富集已构建的人源性抗核抗体Fab片段噬菌体抗体库,间接ELISA法鉴定4轮淘筛后抗核抗体Fab片段噬菌体抗体;提取阳性克隆的噬菌粒DNA,切除gⅢ基因片段,自连接后转化大肠杆菌XL1-Blue,以IPTG诱导表达可溶性人源性抗核抗体Fab片段;应用间接ELISA法及荧光免疫法对表达上清进行鉴定.结果:第4轮洗脱的噬菌体滴度较第1轮增加200条倍,从抗核抗体Fab片段噬菌体库中筛选出2株阳性克隆,切除gⅢ基因后自连的噬菌粒DNA经XhoⅠ单酶切证实连接成功.间接ELISA法检测结果显示:制备的可溶性人源性抗核抗体Fab片段均呈现抗dsDNA阳性,具有抗原特异性;免疫荧光法结果显示:Hep2细胞和猴肝脏组织细胞核显示均质型荧光,绿蝇短膜虫的动基体显示均质型荧光.结论:成功制备具有抗原特异性的可溶性、人源性抗核抗体Fab片段,为高亲和力抗核抗体Fab片段的制备奠定了基础.     

电磁场促进骨髓间充质干细胞体外诱导分化时细胞增殖

目的 观察脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMF)对5-氮胞苷(5-aza)诱导大鼠骨髓问充质干细胞(mesenehymal stem cells,MSCs)向心肌样细胞分化时细胞增殖的影响.方法 50 Hz脉冲低频电磁场刺激5-aza诱导后7 d后的MSCs,根据不同的感应强度分为A、B、C组,每组根据作用时间的不同分为4个亚组;设未暴露PEMFs的细胞为对照组.用MTT法测定细胞增殖变化,用流式细胞技术检测细胞周期.结果 0.5 mT和1 mT的感应强度下20～30 min细胞比对照组有显著性增殖,5 mT作用30～60 min以及1 mT作用60 min与对照组相比较呈显著性抑制.流式检测细胞周期显示0.5 mT和1 mT在20～30 min内可以引起细胞S G2%增高,各感应强度下作用60 min以及5 mT感应强度下作用20 min以上均引起S G2%的下降.结论 50 Hz脉冲低频电磁场0.5 mT和1 mT的感应强度下,作用20～30 min可通过引起诱导后的MSCs周期中S G2%增高而促进它的增殖.     

辛伐他汀对高脂血症大鼠氧化应激状态的干预研究

目的：观察高脂血症大鼠氧化应激状态的变化及辛伐他汀对它的影响．方法：40只雄性SD大鼠随机分组,对照组16只给予正常饮食,24只大鼠喂食高脂饲料（30g／kg胆固醇、2g／kg去氧胆酸钠、100g／kg猪油、1g／kg丙基硫氧嘧啶、867g／kg基础饲料）8wk后分为3组：模型8wk组（n=8）,模型16wk组（n=8）继续喂饲高脂饲料,辛伐他汀组（n=8）喂饲高脂饲料并给予辛伐他汀（每日10mg／kg）混悬液灌胃,模型16wk组及对照组给予等体积生理盐水灌胃,各组自由饮水进食．实验8wk分别处死对照组及模型8wk组大鼠各8只．实验16wk处死各组动物．留取血清及左心室组织,测定血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,戊二醛（MDA）,谷胱苷肽过氧化物酶（GPx）及过氧化物歧化酶（SOD）活性．结果：与对照组相比,模型8wk组血清总胆固醇升高,血清及心肌组织MDA含量增加,GPx活性降低（P均〈0．05）,但甘油三酯及血清和心肌组织SOD活性没有统计学差异（P均〉0．05）;与模型8wk组相比,模型16wk组胆固醇和甘油三酯继续升高,血清及心肌组织MDA含量增加,SOD和GPx活性降低（P均〈0．05）;与模型16wk组相比,辛伐他汀组胆固醇和甘油三酯均降低（P均〈0．05）,血清及心肌组织MDA含量减少,SOD和GPx活性升高（P均〈0．05）．结论：高脂血症大鼠存在氧化应激,给予辛伐他汀可减轻氧化应激损伤,从而可能减缓动脉粥样硬化的形成．     

美国法中的“告知后同意”理论

作为医学领域的一个基本伦理原则,医师的说明义务起源于英美法系的"Inform ed Consent"理论,并且主要是在美国的判例中形成的。在美国,主要是以"侵权行为"对"告知后同意"理论进行规范,并经历了从故意伤害到过失侵权的法理演变过程。     

Mirizzi综合征26例诊治分析

目的:探讨Mirizzi综合征的临床特点,总结Mirizzi综合征的诊断和治疗方法。方法:回顾性分析了26例经手术证实的Mirizzi综合征的临床资料,探讨其临床特点和手术方法。结果:术前确诊仅3例(11.5%),其中2例经ERCP确诊,1例经MRCP确诊。26例分别施行了胆囊切除术,胆囊大部切除术,胆囊瓣瘘口修补加"T"管引流术以及胆肠Rouxen-Y吻合术。25例术后一期愈合,1例并发胆漏再次手术。结论:Mirizzi综合征术前诊断困难,术中极易损伤胆管,手术探查应认真仔细,治疗应根据不同类型选择适当的手术方式。     

腺病毒介导的人内皮型一氧化氮合酶基因和增强型绿色荧光蛋白基因在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达

目的:研究腺病毒载体介导人内皮型一氧化氮合酶(human endothelial nitric oxide synthase,heNOS)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)在体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymalstem cells,MSCs)的表达。方法:体外培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞,并对培养的细胞进行成骨、成脂肪诱导分化和细胞免疫表型鉴定;用Pme I线性化后去磷酸化的pShuttle-heNOS-EGFP转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态BJ 5183,使其在细菌内发生同源重组,获得阳性重组质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定正确后经PacⅠ酶切,转入AD 293细胞,包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。用重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP对MSCs进行转染,并用荧光显微镜及免疫荧光染色法观察转染细胞内EGFP和heNOS蛋白质的表达。结果:pShuttle-heNOS-EGFP与pAdeasy-1在BJ 5183中成功地发生了同源重组,得到了重组腺病毒质粒pAdEasy-heNOS-EGFP。重组质粒在AD 293细胞中包装成重组腺病毒Ad-heNOS-EGFP。经基因转染的MSCs中高表达heNOS和EGFP。结论:采用腺病毒载体可以将外源性的heNOS基因转染至MSCs中,并得到有效表达,且携带的EGFP标记可以直观地检测靶细胞感染和外源基因的表达情况,这将为勃起功能障碍的细胞治疗提供一条新的途径。     

CIN患者外周血CD4、CD8T淋巴细胞的表达及意义

目的探讨宫颈上皮内瘤变（CIN）不同级别的患者外周血T淋巴细胞亚群的CD4^＋、CD8^＋细胞数量的变化及与临床意义。方法采用流式细胞术分析128名CINI一Ⅲ级的患者与30例正常人静脉血CD4^＋、CD8^＋、以及CD4^＋／CD8^＋比值以及之间相关性，并对36例CIN治疗后随访。结果CINI组与正常组之间CD8值（P〉0，05）无显著差别；CINⅠ、CINⅡ与正常组CD4，CINI与CINⅡ，CINⅡ与CINⅢ的CD8差别有显著性（P〈0．05）；其他组之间都有高度显著的差异（P〈0．01）。且随CD4数量减低CD8相对增加，CD4／CD8减低；随访结果疗效显著的，CD4^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋比值都有明显增加。疗效差的CD4^＋，CD4^＋／CD8^＋比值较治疗前减少，预后不佳。结论CD4^＋、CD8^＋细胞表达的数量随CIN患者病情变化而改变，对临床调节免疫力，提高疗效及预后的判断有重要的指导意义。     

笑气吸入用于临床无痛分娩1000例临床研究

目的探讨笑气用于分娩镇痛的疗效及对母儿影响。方法对1000例笑气吸入镇痛和同期1000例非镇痛分娩的镇痛效果、产程进展、分娩方式、产后出血量及新生儿Apgar评分等指标进行比较。结果镇痛组在镇痛效果、缩短产程时间方面均优于对照组，差异有极显著性（P〈0.01）；两组在产后出血量、新生儿窒息发生率方面差异无显著性（P〉0．05）。结论笑气吸入对分娩疼痛有良好的镇痛效果，可缩短产程，降低剖宫产率，对母儿无不良影响，方法简便，容易掌握，是理想的分娩镇痛方法。