血液中抗凝基因KLF2、KLF4表达与深静脉血栓形成的预测*☆

目前,临床上缺乏有效的预测深静脉血栓的手段。KLF2、KLF4在血栓形成前及形成过程中表达下调,有可能作为分子标记物预测诊断深静脉血栓。 目的：探讨抗凝基因KLF2、KLF4预测诊断深静脉血栓的可行性。 方法：从100只大鼠中随机取90只建立大鼠创伤性深静脉血栓模型,按取材时间点及是否有血栓形成分为血栓形成前组、血栓形成组和血栓消溶组,其余的10只大鼠作为正常组。在相应时间点采集各组大鼠血液,荧光实时定量PCR法检测各组大鼠血液中KLF2及KLF4 mRNA的表达。 结果与结论：荧光实时定量PCR结果显示血栓形成前及血栓形成组KLF2和KLF4 mRNA表达低于正常组,而血栓消溶组血清KLF2和KLF4 mRNA水平较正常组高。提示KLF2及KLF4可能成为预测诊断深静脉血栓的分子标记物。     

弥漫性轴索损伤BDNF及其Val66Met基因多态性与认知功能的相关性研究

目的探讨弥漫性轴索损伤（DAI）（Ⅱ型）患者伤后1个月血清脑源性神经营养因子（BDNF）水平及其Val66Met基因多态性与认知功能的关系。 方法选取晋江市医院神经外科自2015年8月至2020年8月收治的106例DAI（Ⅱ型）患者为病例组,选择同期来本院体检的105名健康体检者为对照组,采用第二版洛文斯顿作业疗法认知量表（LOTCA）、蒙特利尔评估量表中文版（MoCA）分别评估对照组和病例组伤后1个月时的认知功能;采用酶联免疫吸附试验测定2组研究对象的血清BDNF水平;聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析BDNF Val66Met基因多态性;多元逐步回归法分析病例组整体认知功能与BDNF及BDNF Val66Met基因多态性的相关性。 结果病例组伤后1个月相同基因亚型血清BDNF浓度均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;病例组Val/Val亚型血清BDNF浓度高于Val/Met、Met/Met亚型,差异有统计学意义（P<0.05）,而Val/Met和Met/Met亚型血清BDNF浓度比较差异无统计学意义（P>0.05）。病例组患者3种基因亚型伤后1个月的LOTCA和MoCA评分均低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;病例组Val/Val亚型评分高于Val/Met、Met/Met评分,差异有统计学意义（P<0.05）,而Val/Met和Met/Met亚型评分比较,差异无统计学意义（P>0.05）。DAI（Ⅱ型）整体认知水平与BDNF Val66Met基因多态性、BDNF浓度具有线性回归关系（F=11.417,P<0.001）,其具有一定的相关性（|β|=0.966、0.877;r=0.569、0.579）。 结论BDNF可影响DAI认知功能,其BDNF Val66Met基因多态性可能是影响DAI认知功能的风险因素之一。     

青少年抑郁症患者自杀行为的影响因素研究

目的 探讨家庭及其他因素对青少年抑郁症患者自杀行为的影响。方法 选取于 2020 年6 月至 2021 年 12 月在荆门市第二人民医院儿童青少年心理科住院的 126 例青少年抑郁症患者进行横断面调查,根据近 6 个月内是否有自杀行为分为自杀组（n=76）及非自杀组（n=50）。采用一般情况调查表、患者健康问卷抑郁症状群量表（PHQ-9）、自杀意念自评量表（SIOSS）、家庭亲密度与适应性评定量表（FACES Ⅱ-CV）对两组患者的一般资料、抑郁程度、自杀意念、家庭分型进行比较。采用 Spearman 相关分析患者自杀行为与一般资料、PHQ-9、SIOSS、FACES Ⅱ-CV 评分的相关性。采用二元 Logistic 回归模型对患者自杀行为的影响因素进行分析。结果 自杀组饮酒者占 40.8%（31/76）,有精神疾病家族史者占 27.6%（21/76）,分别高于非自杀组的 20.0%（10/50）、12.0%（6/50）,差异有统计学意义（P＜ 0.05）。自杀组患者 PHQ-9 评分、SIOSS 总分、绝望因子评分及睡眠因子评分高于非自杀组［19.0（15.0,21.8）分比 15.0（10.8,19.0）分、15.0（14.0,16.8）分比 13.0（11.0,15.0）分、12.0（10.3,12.0）分比 10.0（7.8,12.0）分、3.0（2.0,3.0）分比 2.0（1.0,3.0）分］,家庭亲密度评分低于非自杀组［50.5（43.3,57.0）分比 57.5（48.8,65.5）分］,差异均有统计学意义（P＜ 0.05）。自杀组患者中极端型家庭占 67.1%（51/76）,高于非自杀组的 44.0%（22/50）,差异有统计学意义（P＜ 0.05）。患者自杀行为与家庭亲密度呈负相关（r=-0.224,P＜0.05）,与 PHQ-9 评分、SIOSS 总分、绝望因子评分、睡眠因子评分、饮酒、有精神疾病家族史呈正相关（r=0.346、0.373、0.361、0.324、0.206、0.217、0.186;P＜ 0.05）。二元 Logistic 回归分析显示,饮酒（OR=3.066,95%CI=1.184～7.941）、家 庭 适 应 性 高（OR=1.126,95%CI=1.034～1.227）、PHQ-9 评 分 高（OR=1.197,95%CI=1.087～1.317）是青少年抑郁症患者自杀行为的危险因素（P＜ 0.05）,家庭亲密度高是自杀行为的保护因素（OR=0.878,95%CI=0.813～0.948）。结论 青少年抑郁症患者自杀行为发生率较高,家庭分型更多见于“僵硬 - 松散”的极端型家庭,有饮酒行为、严重抑郁、家庭关系不良者更容易自杀     

Comparative study of the distribution of the alpha-subunits of voltage-gated sodium channels in normal and axotomized rat dorsal root ganglion neurons

We compared the distribution of the α‐subunit mRNAs of voltage‐gated sodium channels Nav1.1–1.3 and Nav1.6–1.9 and a related channel, Nax, in histochemically identified neuronal subpopulations of the rat dorsal root ganglia (DRG). In the naïve DRG, the expression of Nav1.1 and Nav1.6 was restricted to A‐fiber neurons, and they were preferentially expressed by TrkC neurons, suggesting that proprioceptive neurons possess these channels. Nav1.7, ‐1.8, and ‐1.9 mRNAs were more abundant in C‐fiber neurons compared with A‐fiber ones. Nax was evenly expressed in both populations. Although Nav1.8 and ‐1.9 were preferentially expressed by TrkA neurons, other α‐subunits were expressed independently of TrkA expression. Actually, all IB4⁺ neurons expressed both Nav1.8 and ‐1.9, and relatively limited subpopulations of IB4⁺ neurons (3% and 12%, respectively) expressed Nav1.1 and/or Nav1.6. These findings provide useful information in interpreting the electrophysiological characteristics of some neuronal subpopulations of naïve DRG. After L5 spinal nerve ligation, Nav1.3 mRNA was up‐regulated mainly in A‐fiber neurons in the ipsilateral L5 DRG. Although previous studies demonstrated that nerve growth factor (NGF) and glial cell‐derived neurotrophic factor (GDNF) reversed this up‐regulation, the Nav1.3 induction was independent of either TrkA or GFRα1 expression, suggesting that the induction of Nav1.3 may be one of the common responses of axotomized DRG neurons without a direct relationship to NGF/GDNF supply. J. Comp. Neurol. 510:188–206, 2008. © 2008 Wiley‐Liss, Inc.     

Gender difference in acquired seizure susceptibility in adult rats after early complex febrile seizures

Gender differences are involved in many neurological disorders including epilepsy. However, little is known about the effect of gender difference on the risk of epilepsy in adults with a specific early pathological state such as complex febrile seizures（FSs） in infancy. Here we used a well-established complex FS model in rats and showed that：（1） the susceptibility to seizures induced by hyperthermia, pentylenetetrazol（PTZ）, and maximal electroshock（MES） was similar in male and female rat pups, while males were more susceptible to PTZ- and MES-induced seizures than age-matched females in normal adult rats;（2） adult rats with complex FSs in infancy acquired higher seizure susceptibility than normal rats; importantly, female FS rats were more susceptible to PTZ and MES than male FS rats; and（3） the protein expression of interleukin-1β, an infl ammatory factor associated with seizure susceptibility, was higher in adult FS females than in males, which may reflect a gender-difference phenomenon of seizure susceptibility. Our results provide direct evidence that the acquired seizure susceptibility after complex FSs is gender-dependent.     

银杏酚酸通过抑制PKD-2活性提高Tca8113细胞对化疗药物的敏感性

目的 探讨蛋白激酶D-2( protein kinase D-2,PKD-2)在银杏酚酸(ginkgolic acid,GA)提高舌鳞状细胞癌细胞株Tca8113对化疗药物敏感性过程中的作用.方法 通过MTT方法检测GA对Tca8113的增殖抑制及提高Tca8113对化疗药物敏感性;Western blot检测在GA不同作用时间下PKD-2在Tca8113中的表达及磷酸化特性;利用shRNA干扰技术基因沉默Tca8113中的PKD-2基因;利用佛波酯(PMA)诱导Tca8113中的PKD-2高磷酸化;以MTT方法检测经shRNA干扰后的Tca8113和及经PMA诱导后的Tca8113细胞对GA及化疗药物的敏感性.结果 GA抑制Tca8113生长的半数抑制浓度( IC50)为20 mg/L,GA明显提高Tca8113对化疗药物卡铂(CBP)和紫杉醇(PTX)的敏感性,分别提高4.37倍和39.20倍(P＜0.05);在野生型Tca8113中与非磷酸化PKD-2蛋白质表达相比较,GA对Tca8113中磷酸化PKD-2蛋白质的表达呈时间依赖性抑制作用(P＜0.05);经shRNA沉默后的Tca8113细胞建立稳定细胞株,同与GA联合用药作用相似,PKD-2基因沉默后的Tca8113细胞对CBP和PTX的敏感性明显提高,分别提高1.6517倍和1.5016倍(P＜0.05);PMA激活Tca8113中的PKD-2后,Tca8113对CBP和PTX的敏感性明显降低,同时发现GA能明显拮抗PMA作用.结论 GA通过抑制PKD-2活性途径提高Tca8113对化疗药物的敏感.     

颈动脉内膜切除后基质金属蛋白酶9动态表达对早期血管再狭窄形成的意义

背景：颈动脉内膜切除后发生血管再狭窄是影响治疗效果的重要因素。 目的：观察颈动脉内膜切除后基因基质金属蛋白酶9 mRNA动态表达在早期血管再狭窄发生中的意义。 设计、时间及地点：随机分组设计,对比观察,实验于2006-02/2007-12在解放军北京军区总医院完成。 材料：健康雄性新西兰兔41只,体质量3.0 kg左右,其中36只用于制备颈动脉粥样硬化性狭窄模型。 方法：将41只新西兰兔分为2组,对照组(n=5)：不做任何干预。实验组(n=36)：于造模后4 h,1,3,7,30,90 d 6个时间点各取6只,以40 g/L多聚甲醛灌注固定取材,行常规病理切片苏木精-伊红染色观察形态变化。 主要观察指标：采用实时定量-聚合酶链反应技术观察术前即刻、术后1,3,7 d颈动脉内膜切除后基因基质金属蛋白酶9 mRNA在早期血管再狭窄过程中的表达变化。 结果：颈动脉内膜切除后内膜修复过程大体上可以分为血栓形成阶段,炎症反应阶段,内皮修复阶段,血管平滑肌增殖阶段,基质形成、堆积阶段。基质金属蛋白酶9 mRNA水平在术后1 d开始表达,术后3 d达峰值,术后7 d显著回落。 结论：基质金属蛋白酶9对早期血管平滑肌细胞的增殖、迁移,介导的局部血管重建和再塑,对血管再狭窄的形成有重要作用。     

Calcyon is necessary for activity-dependent AMPA receptor internalization and LTD in CA1 neurons of hippocampus

Calcyon is a single transmembrane endocytic protein that regulates clathrin assembly and clathrin-mediated endocytosis in the brain. Ultrastructural studies indicate that calcyon localizes to spines, but whether it regulates glutamate neurotransmission is not known. Here, we show that deletion of the calcyon gene in mice inhibits agonist-stimulated endocytosis of α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid receptors (AMPARs), without altering basal surface levels of the GluR1 or GluR2 subunits. Whole-cell patch-clamp studies of hippocampal neurons in culture and CA1 synapses in slices revealed that knockout (KO) of calcyon abolishes long-term synaptic depression (LTD), whereas mini-analysis in slices indicated basal transmission in the hippocampus is unaffected by the deletion. Further, transfection of green fluorescent protein-tagged calcyon rescued the ability of KO cultures to undergo LTD. In contrast, intracellular dialysis of a fusion protein containing the clathrin light-chain-binding domain of calcyon blocked the induction of LTD in wild-type hippocampal slices. Taken together, the present studies involving biochemical, immunological and electrophysiological analyses raise the possibility that calcyon plays a specialized role in regulating activity-dependent removal of synaptic AMPARs.     

肝脏射频消融对大鼠外周血单个核细胞OX62，OX6及CD86表达的影响

背景：既往已有研究证实经皮射频消融在有效灭活肿瘤的同时,能够在一定程度上改善机体免疫抑制状态。抗原呈递细胞在机体的抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用,树突状细胞是目前所知机体内功能最强的专职性抗原提呈细胞。 目的：观察肝脏射频消融后大鼠外周血单个核细胞OX-62,OX-6和CD86的表达变化。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2005-06/2006-03在北京大学临床肿瘤学院完成。 材料：选用SD大鼠12只,按随机数字表法分为2组,对照组和射频后1周组各6只。 方法：对照组大鼠处死后抽取外周血2 mL。将射频后1周组大鼠肝脏左叶牵出,斜置电极针入肝,展开电极针,射频作用时间 4 min。射频完毕给予抗感染治疗,射频治疗后1周处死后抽取外周血。 主要观察指标：①正常鼠肝射频后大体和病理学改变。②射频前后外周血内单个核细胞OX-62,OX-6以及CD86表达水平。 结果：鼠肝组织射频灶病理组织学检查显示从中心到外围呈凝固性坏死-细胞变性-肉芽组织形成的演变特点。射频后1周组大鼠外周血单个核细胞中树突状细胞特异性标志OX-62的阳性表达率为(0.70±0.16)%,显著高于对照组[(0.34±0.08)%,P < 0.05]。2组大鼠外周血树突状细胞中OX-6,CD86的阳性表达率差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：射频消融可促进大鼠外周血中树突状细胞前体细胞数量增多,可能会对提高机体在免疫应答中的抗原提呈能力起到促进作用。     

携带GJB2基因突变中老年人的听力学特点分析

目的 对中老年人进行GJB2基因突变筛查,探讨携带不同GJB2基因突变的中老年人的听力情况.方法 收集648例中老年人的听力学资料和血样,提取基因组DNA,经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增GJB2基因编码区,利用直接测序方法获得基因型,并应用统计学分析方法研究携带GJB2基因突变的中老年人在不同听力组间的分布情况及携带不同GJB2基因突变中老年人的听力情况.结果 根据听力学资料,将所有中老年人分为四组:正常对照组(A组,157人,24.23%)、轻度听力下降组(B组,199人,30.71%)、中度听力下降组(C组,226人,34.88%)、重度听力下降组(D组,66人,10.19%);通过直接测序的方法,共发现22例分别携带4种移码突变,包括235delC杂合突变(16例,2.78%)、299-300delAT杂合突变(3例,0.46%)、176-191del16杂合突变(1例,0.15%)、512insAACG杂合突变(2例,0.31%);所有突变携带者在不同组间的分布情况为:正常对照组3人(13.64%)、轻度听力下降组6人(27.27%)、中度听力下降组8人(36.36%)、重度听力下降组5人(占22.73%);对四种突变携带者的听力学情况进行分析,176-191del16突变携带者的听力下降程度最轻,而512insAACG突变携带者的听力下降程度最重,经统计学分析, 左耳0.25 kHz频率的平均听阈值在各种突变携带者间的差异具有统计学意义(P=0.03).结论 与整体中老年人群相比,携带GJB2 基因突变的中老年人在中度听力下降组和重度听力下降组间所占的比例增高;各种突变携带者听力下降程度不同.