过量运动对健康大鼠肾脏结构与功能的影响

目的：观察过量运动对健康大鼠肾脏结构与功能的影响并探讨其可能机制。方法：将30只健康Sprauge-Dawley(SD)大鼠按照随机数字表随机分为安静对照组和过量运动组,每组15只。安静对照组在鼠笼内安静饲养,过量运动组进行16周高强度跑台力竭运动。实验后,测定24 h尿蛋白（UP）、血尿素氮（BUN）和血清肌酐（SCr）含量评价肾功能;分别行HE、Masson染色观察肾脏组织病理学改变,同时获取肾小球和肾小管损伤评分以及纤维化指数（FI）;免疫印迹测定转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（E-CA）蛋白表达量。结果：与安静对照组比较,过量运动组肾脏结构异常,肾小球损伤评分、肾小管损伤评分、FI、UP、BUN和SCr增加（t分别为-6.895、-7.365、-9.234、-4.964、-7.753、-16.444,均P<0.05）,MMP-9蛋白表达下调（t=5.077,P<0.05）,而TGF-β1、α-SMA和E-CA蛋白表达差异无统计学意义（t分别为-1.801、-1.129、1.585,...     

SP-C对重组肺表面活性物质活性的影响

目的 探讨不同浓度的肺表面活性物质(PS)相关蛋白C(SP-C)与合成脂质构成的重组PS活性的变化。方法 从新鲜猪肺的灌洗液中提取PS,从PS中分离出SP-C。将二棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱和棕榈酰油酰磷脂酰甘油按60:20:20的重量比混合,即为合成脂质(SL),将SP-C按1％、2％、3％(与脂质的重量比)加入SL中,制成三种重组PS:RS-1、RS-2和RS-3。将上述物质溶于生理盐水中即为实验液体。用气泡型表面张力计测定各实验液体的表面张力。将PS缺如的未成熟胎兔随机分为4组:PS、SL、RS-3和对照组。分别向PS、SL和RS-3组气道内注入PS、SL、RS-3液;对照组未注入任何物质。然后进行人工通气,通气后5、10、15、20min测定各组潮气量。结果 PS的最小表面张力(γmin)为(0.9±0.3)mN/m,SL的γmin为(22.6±1.3)mN/m,明显高于PS(P<0.01);随SP-C浓度的增加γmin逐渐降低,RS-3的γmin降至(0.7±0.1)mN/m(与PS相比,P>0.05)。通气20min时,PS组、RS-3动物的潮气量分别达到(25±7)ml/kg、(25±4)ml/kg,明显高于对照组和SL组(P<0.01)。结论 不含SP-C的合成脂质表面活性低,加入SP-C后构成的重组PS表面活性明显增强。     

男性间质性膀胱炎18例临床诊治分析

目的 探讨男性间质性膀胱炎(IC)临床诊断和治疗方法,以提高男性IC的诊治效率. 方法 2010年1 -12月收治男性IC患者18例,患者均表现为明显的耻骨上区和腹股沟区疼痛,并伴有尿频、尿急症状.18例均曾误诊为ⅢB型前列腺炎,且治疗无效.按照NIDDK的IC诊断标准,根据PUF表评分＞15分、钾离子通透试验(PST)阳性以及麻醉下膀胱镜检查发现“红斑征”确诊IC.18例治疗前均行24 h排尿卡记录、尿常规、前列腺液常规及细菌培养等检查,并行麻醉下水扩张治疗.术后口服托特罗定缓释片治疗,每天1次,每次4 mg,疗程1个月;同时术后1周开始行膀胱灌注治疗(2％利多卡因20 ml+肝素3.75万U+5％碳酸氢钠5 ml),每周2次,疗程12周. 结果 18例患者水扩张术后采用PUF表评分和24h排尿卡记录进行随访,随访时间12～25个月,平均19个月,患者症状均获得缓解.治疗前后PUF评分值分别为(19.2±4.1)、(13.6±2.4)分;24 h平均排尿次数分别为(11.5±3.9)、(7.5±4.3)次;24h平均每次排尿量分别为(159.5±30.8)、(241.7±45.3)ml,差异均有统计学意义(P＜0.01). 结论 男性IC与(Ⅲ)B型前列腺炎临床症状相似,可通过PUF评分、PST试验以及麻醉下膀胱镜检查提高男性IC的诊断率,结合水扩张和术后口服托特罗定缓释片联合肝素膀胱灌注治疗可显著改善男性IC患者的临床症状.     

失神经支配在大鼠骨折愈合过程中降钙素基因相关肽对骨保护素/破骨细胞分化因子影响的实验研究

目的 通过建立选择性切断大鼠感觉/运动神经联合胫骨骨折的动物模型,研究感觉/运动神经损伤后对骨折愈合的影响,并检测骨折愈合过程中降钙素基因相关肽(calcitonin gene related peptide,CGRP)对骨保护素(osteoprotegerin,OPG)/破骨细胞分化因子(receptor activator nuclear factor kappa B ligand,RANKL)体系的影响,初步探讨周围神经调节骨折愈合的机制.方法 取60只Wistar大鼠随机分为3组:前根(运动神经)切断+胫骨骨折组(anterior rhizotomy group,ART组);后根(感觉神经)切断+胫骨骨折组(posterior rhizotomy group,PRT组);单纯胫骨骨折组(sham operated group,SO组).分别于骨折术后7、14、21、28d处死大鼠,在骨折处上、下5mm部位取骨痂标本.免疫组织化学检测CGRP、OPG、RANKL的表达;采用软件Image-proplus 6.0进行图片分析;采用SPSS16.0进行统计学分析.结果 CGRP在SO组各时间点均呈强阳性表达,术后14 d和21 d,SO组、ART组和PRT组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).OPG在SO组术后7d呈强阳性表达,以后逐渐下降但保持较高水平;术后14 d,PRT组和SO组、ART组比较差异有统计学意义(P＜0.05);术后21 d,SO组和PRT组、ART组比较差异有统计学意义(P＜0.05).RANKL在SO组21 d为表达高峰,以后逐渐下降;术后14 d,PRT组和ART组、SO组比较差异有统计学意义(P＜0.05);术后21 d,SO组和ART组、PRT组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在骨折愈合过程中,感觉神经纤维对骨折愈合的影响较运动神经纤维显著.CGRP能够调节OPG/RANKL的表达量的比值,从而影响骨折的愈合过程.失神经支配(尤其是感觉神经)导致CGRP对OPG/RANKL表达的调节作用降低,这不利于骨折的愈合.完整的神经支配是正常骨折愈合的必要条件之一.     

氧化应激介导的Ras-ERK信号通路活化参与醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖

目的 探讨氧化应激介导的Ras-胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路活化在醛同酮( ALDO)诱导的系膜细胞增殖中的作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞,应用3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)掺入法和细胞计数测定系膜细胞增殖;Western印迹检测Ki-RasA、c-Raf、MEK1/2和ERK1/2活化.结果 ALDO可显著促进系膜细胞增殖,抗氧化剂乙酰半胱氨酸(NAC)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖(均P＜ 0.01).ALDO刺激系膜细胞3h,活化的Ki-RasA、c-Raf、MEK1/2和ERK1/2表达显著增强,分别是对照组的4.05倍、3.62倍、4.52倍和3.40倍(均P＜0.01).抗氧化剂NAC几乎完全阻断ALDO诱导的Ki-RasA、c-Raf、MEK1/2和ERK 1/2活化(均P＜0.01).Ki-RasA siRNA可呈浓度依赖性降低系膜细胞Ki-RasA表达,并显著抑制ALDO诱导的Ki-RasA活化及系膜细胞增殖(P＜0.01).c-Raf抑制剂GW5074和MEK1/2抑制剂PD98059亦显著抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖,其抑制率均达到65％(P＜0.01).Ki- RasA siRNA不能降低ALDO诱导的磷酸肌醇-3激酶( PI3K)磷酸化.联合应用PI3K抑制剂LY294002和MEKl/2抑制剂PD98059可完全阻断ALDO诱导的系膜细胞增殖(P＜0.01).结论 ALDO可通过氧化应激活化Ki-RasA-c-Raf-MEK-ERK信号通路.同时阻断ERK1/2和PI3K信号通路可完全抑制ALDO诱导的系膜细胞增殖.     

右心系统子宫静脉平滑肌瘤病的诊断与外科治疗

目的 探讨右心系统子宫静脉平滑肌瘤病(ICL)的诊断与手术治疗效果.方法 1995年2月至2011年6月收治ICL患者18例,术前诊断右心房黏液瘤2例,右心房或右心室内血栓2例,肺栓塞2例,下腔静脉和右心房肿瘤3例,下腔静脉占位病变9例.全组经心脏超声、磁共振、螺旋增强CT和血管造影检查.18例ICL均在全麻体外循环下经胸部切口,胸腹联合切口或腹部切口行平滑肌瘤切除术.结果 全组无死亡.术后血管超声检查示右心房、下腔静脉、双侧肾静脉及双侧髂静脉内均未见肿瘤栓子.随访5 ～ 106个月,平均(49±42)个月,1例未完全切除肿瘤患者于术后5个月复发死亡,余17例随访无症状,术后心功能Ⅰ级10例,Ⅱ级7例.应用Kaplan - Meier生存曲线计算ICL术后5年生存率为(93±5)％.结论 子宫静脉平滑肌瘤的诊断较困难,手术治疗可取得较好的中长期生存率和生存质量.     

SG序列在MRI中的应用研究

目的:研究磁共振成像特殊序列SG序列的成像功能,和常规SE序列作对比分析,借以评价SG序列在MRI中的应用价值.方法:采用日立0.3T扫描机,分别应用参数优化后的SG序列与常规SE序列对模体进行信噪比、对比度、对比噪声比测试,对50例颅脑患者和30例膝关节患者分别进行扫描成像,并对图像进行分析研究.结果: SG序列在扫描参数优化后具有成像速度快,分辨率较高,单次扫描占用时间较短,而成像层面多,获取成像信息较多等优势.结论:SG序列可以作为常规MRI扫描的优先替补序列.     

RhoA、RhoC串联RNA干扰载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达

目的 探讨RhoA、RhoC串联RNA干扰载体的构建及在结直肠癌细胞中的表达.方法 设计合成4对靶向RhoA与RhoC基因的各两对寡核苷酸序列,退火后分别克隆入shRNA表达载体;通过一系列的酶切与连接,将该4段干扰片段串联起来,构建一个同时表达4个shRNA的重组质粒.经酶切和测序鉴定重组质粒.脂质体法转染HCT116,荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各细胞中RhoA、RhoC mRNA的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性.结果　经酶切和测序证实重组质粒pGenesil2.7-A1+A2+C1+C2构建成功.转染该重组质粒后细胞中RhoA、RhoC mRNA的表达水平分别为(0.78±0.11)和(0.90±0.21),明显低于空白对照组(0±0.15、0±0.09)和阴性对照组(-0.05±0.12、0.11±0.10,P＜0.05),且细胞的生长增殖率(63.8±12.5)%也显著低于对照组和质粒对照组(101.6±13.7)%(P＜0.05).结论　成功构建4个shRNA串联的重组表达载体,该载体可在体外高效表达.

Abstract：

Objective To construct and identify recombinant RhoA and RhoC shRNAs Tandem expression vector pGenesil2. 7-A1 + A2 + C1 + C2 and observe its expression in human colorectal carcinoma cells HCT116. Methods Four pairs of hairpin-like oligonucleotide sequences special for human RhoA or RhoC gene were designed and synthesized. The annealed oligonucleotide fragments were subcloned into four plasmids each with a different promotor. Then the four oligonucleotide fragments were series connected to construct an efficient multiple shRNAs expression system. The tandem array multiple shRNAs expression vector was confirmed by enzyme digestion and DNA sequencing and then was transfected into HCT 116 usingLipofectamneTM 2000. The expression of RhoA or RhoC mRNA was detected by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR). Cellular proliferation inhibitory activity was determined by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) assay. Results Enzyme digestion and DNA sequencing showed that the oligonucleotide fragments were correctly inserted into pGenesil2. 7-A1 + A2 + C1 + C2 plasmid. After transfection, the expression of RhoA or RhoC mRNA was (0.78 ±0. 11)or (0.90 ±0.21) ,significantly lower than that in control group (0 ±0. 15、0 ±0. 09) and plasmid control group ( -0. 05 ±0. 12、0. 11 ±0. 10)(P＜0. 05) ,and the proliferation rate (63. 8 ± 12. 5)% was also lower as compared with control group and plasmid control group ( 101.6 ± 13.7 ) % ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion The recombinant tandem array multiple shRNAs expressing vectors can effectively silence the expression of RhoA or RhoC in human colorectal carcinoma cells.     

腱索折叠与人工腱索矫治二尖瓣前瓣脱垂的比较分析

目的 评价腱索折叠和人工腱索两种成形术治疗二尖瓣前瓣脱垂(ALP)的效果.方法 回顾性分析1990年3月至2008年3月接受上述两种成形术治疗的50例ALP患者的临床资料.全组男性29例,女性21例;年龄(42.6±11.3)岁.其中腱索折叠组23例,人工腱索组27例.结果 围手术期腱索折叠组病死率13.0%(3/23),高于人工腱索组的3.7%(1/27)(P=0.199).随访时间为1个月～18年,总随访时间为278人年.两组晚期死亡各3例,5～8年生存率腱索折叠组为70.0%±18.2%,人工腱索组为86.8%±9.2%(χ2=8.17,P=0.046).再次手术腱索折叠组4例,人工腱索组1例,两次手术间隔时间为(26±17)个月;5年免除再次手术率分别为83.3%±15.2%和100%(χ2=12.06,P=0.007).多因素回归分析显示,腱索折叠术是ALP成形术晚期心脏事件的独立危险因素.结论 人工腱索成形术矫治ALP在远期生存上要优于腱索折叠术.