重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达

目的构建重组质粒pcEgr-hp63,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3．1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEg-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒坶hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞053基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEg-hp63构建正确。与0Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0．5-5Gy照射后,p53mRNA水平增高;A549．hp53在2-5Gy后,p53蛋白表达显著增高（P〈0．01）,SKOV-3-hp63其蛋白表达随剂量（0．5-5Gy）增加而明显增加（P〈0．05-P〈0．01）。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0．5Gy照射后明显下降（P〈0．05）,2-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）;SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0Gy时增高,0.5-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。     

电离辐射联合自噬和凋亡抑制剂或诱导剂对MCF7细胞的影响

目的 探讨电离辐射联合自噬抑制剂、诱导剂和凋亡抑制剂对MCF7细胞自噬和凋亡的影响。方法 MCF7细胞经0 Gy、4 Gy、4 Gy+rapamycin、4 Gy+3-MA、4 Gy+z-VAD-fmk不同方法处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞的生长倍增时间;采用Western blot检测MCF7细胞经不同方法处理后自噬特异蛋白LC3和beclin1的表达,并比较蛋白表达量的差异;流式细胞仪(FCM)检测不同处理方法MCF7细胞凋亡百分率。结果 经4 Gy照射后,MCF7细胞生长倍增时间明显长于未经照射的细胞生长倍增时间(t= 4.41,P<0.05);而4 Gy+rapamycin处理后,明显长于单纯4 Gy照射组(t= 4.35, P<0.05);经4 Gy + 3-MA和4 Gy+z-VAD-fmk处理后,均明显短于4 Gy+rapamycin组 (t= 4.32, P<0.05)。Western blot检测结果表明,Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达4 Gy+rapamycin组为最高,4 Gy+3-MA组为最低,除4 Gy+3-MA组与4 Gy+z-VAD-fmk组比较差异无统计学意义外,其余各处理组间比较差异有统计学意义(t= 3.91~4.78, P<0.05)。结论 电离辐射联合自噬诱导剂可促进MCF7细胞凋亡;联合自噬抑制剂抑制自噬发生,进而延缓肿瘤细胞凋亡。     

自噬体的检测及其对肿瘤的作用

1自噬的概述 1．1自噬（autophagy）简介自噬来源于希腊词汇,意思是“self”和“eating”,用来描述细胞在饥饿时,为了存活而降解细胞内成分获得营养。自噬是真核细胞蛋白降解的重要途径,其作用主要是清除降解细胞内受损伤的细胞结构、衰老的细胞器及不再需要的生物大分子等,     

人类重组酸性成纤维细胞生长因子对新生大鼠生长发育的影响

目的：比较野生酸性成纤维细胞生长因子（waFGF）和其核转位序列 (NLS) 敲除后的重组aFGF（raFGF）对新生大鼠生长发育的影响,评价raFGF的有丝分裂活性及其相关的生物学特性。 方法：实验用Wistar新生大鼠,观察waFGF、raFGF和suramin对其体重、外观、存活率和睁眼时间的影响。 结果：体重时程的变化表明,suramin+raFGF组大鼠在生后16 d内体重明显低于suramin+waFGF组,但两组均明显低于正常组和空白对照组,且明显高于suramin组。suramin组和suramin+raFGF组幼鼠背部有皮屑现象, 出现不同程度的角弓反张症状。suramin组幼鼠生后均未睁眼,在16 d内全部死亡;而正常组幼鼠、空白对照、suramin+waFGF和suramin+raFGF组幼鼠分别在出生后14、14、19和22 d睁眼,21 d其存活率分别为99.3％、87.6％、66 .7%和20.0%,后两者比较差异有显著性（P<0.05）。 结论：suramin作为aFGF的抑制剂,可抑制机体的生长发育,在一定程度上可被外源waFGF反转,但raFGF作用较弱。提示,aFGF经过基因敲除核转位序列后,对新生大鼠发育影响较小,可能与其促细胞分裂性降低有关。     

T细胞共刺激反应与电离辐射

近年来，对Ｔ细胞的活化及其抗肿瘤机制有了新的突破性认识，Ｔ细胞共刺激反应是激发有效的细胞免疫应答所必需的，Ｂ７分子家族及ＣＤ２８／ＣＴＬＡ－４等共刺激分子在共刺激反应的信号传递过程中起重要作用，本文简要综述共刺激反应信号转导形式，诱导细胞免疫，抗肿瘤及与电离辐射的关系等方面的内容。     

下丘脑弓状核损毁对大鼠某些组织Se—GSH—Px活性和LPO水平的影响

本研究证实,弓状核损伤后大鼠睾丸和肾上腺谷胱甘肽过氧化酶(Se—GSH—Px)活性明显降低(P<0.05),而脂质过氧化物(LPO)水平在两种组织中都不同程度增高;肝脏中两种物质都非常明显增高(P<0.01);脾脏中两者变化不明显。提示,下丘脑弓状核损毁可影响大鼠睾丸、肾上腺和肝脏Se—GSH—Px活性和LPO水平变化,而对脾脏无影响。     

紫外线照射充氧自血回输疗法对细胞遗传学的影响

作者对采用紫外线照射充氧自血回输疗法（ＵｌｔｒａｖｉｏｌｅｔＢｌｏｏｄＩｒｒａｄｉａｔｉｏｎ，ＵＢＩ）治疗的１０名患不同疾病的患者，在ＵＢＩ治疗前、治疗后（第５和第１０次）进行外周血淋巴细胞微核及染色体畸变的检测。结果发现，随着治疗次数增加，染色体畸变率略有增加趋势，但未超出正常范围（＜１％）；淋巴细胞微核率随治疗次数的增加也有增高趋势，但均在正常值（０～２‰）范围内。提示：人体少量自血经ＵＢＩ处理后再回输体内，对细胞遗传学无明显不良影响。     

低剂量X线照射对小鼠脑啡肽和内分泌激素的影响

本文报道C_(57)BL/小鼠75mGy全身X线照射后9小时用SRBC腹腔注射进行免疫。在免疫后不同时间,下丘脑脑啡肽(M-Bhk,L-Enk)含量明显降低,血清睾丸酮(TS)水平一直波动在对照组之上,睾丸cAMP含量与TS变化不一致,血清皮质酮(CS)水平与TS变化相反。这些结果提示,低水平电离辐射可引起神经内分泌功能的改变,使下丘脑脑啡肽神经元释放M-Enk和L-Enk降低,CRF-ACTH-CS轴受抑,而GnRH-LH-TS轴增强。