褪黑素对电离辐射诱导小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的:探讨褪黑素(MLT)对电离辐射诱导小鼠胸腺细胞和脾细胞凋亡的影响及其机制。方法:采用流式细胞术(FCM)和荧光分光光度法分别检测离体和在体小鼠淋巴细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率。结果:在离体研究中,小鼠胸腺和脾淋巴细胞体外接受(0.5-6.0)Gy X射线照射前预先加入2 mmol/L MLT,细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率均显著低于单纯照射组,胸腺和脾淋巴细胞凋亡小体百分率分别为单纯照射组的86.25％和89.44％,DNA裂解率分别为单纯照射组的87.23％和89.16％。在体研究中,2 Gy X射线全身照射前60 min腹腔注射MLT,小鼠胸腺和脾淋巴细胞凋亡小体百分率和DNA裂解率显著低于单纯照射组,接近或低于假照水平,MLT剂量在0.1-2.5 mg／kg范围内均有作用,但无明显剂量依赖性。结论:MLT在体内和体外均可减轻电离辐射诱导的小鼠淋巴细胞损伤,且体内比体外作用更明显。     

大剂量X射线头部和全身照射后神经内分泌功能的变化

本研究应用１０ＧｙＸ射线头部和全身照射动物模型，观察神经内分泌系统功能的变化。结果证实，头部照射后４８ｈ下丘脑Ｌ－ＥｎＫ和垂体Ｍ－ＥｎＫ含量降低，下丘脑ＮＥ和ＤＡ含量增高，血清ＬＨ、ＦＳＨ、ＰＲＬ、ＴＳＨ和ＧＨ水平增高；而全身照射后４８ｈ神经内分泌系统功能的变化与头部照射后变化基本相反。提示头部和全身照射后产生的神经内分泌系统功能的改变与辐射的直接作用和间接作用有关。     

头部照射对去肾上腺雄性大鼠下丘脑—垂体—性腺轴的影响

研究采用10GyX线头部照射去肾上腺雄性大鼠动物模型,观察血清LH、FSH和睾丸嗣(TS)水平及睾丸cAMP含量变化。其结果证实,去肾上腺雄性穴鼠垂体—性腺轴功能低下。经10GyX线头部照射后第1天,血清LH和FSH(P<0.01)水平降低,与正常大鼠头部照射后第1天变化基本一致。但是,照射后第2天二者都趋于增高(P>0.05),这可能与下丘脑CRF和GnRH两种神经元相互作用有关。而照射后第1天和第2天,血清TS(P<0.01)水平和睾丸cAMP(P<0.05)含量皆增高,其变化可能与皮质类固醇激素分泌缺乏直接影响睾丸内分泌功能或与睾丸本身的自我调节有关。     

多次小剂量pEgr-IFN-γ基因 放射治疗的抑瘤效应及其机制的研究

目的: 探讨多次小剂量pEgrIFNγ基因放射治疗对接种B16黑色素瘤小鼠的抑瘤效应及其免疫学机理。方法: 肿瘤局部注射脂质体包裹的重组质粒pEgrIFNγ后36 h，接受不同剂量X射线照射，观察各组小鼠照后不同时间肿瘤生长速率和平均存活时间。照后第3天用RTPCR法检测瘤内IFNγ转录水平，ELISA法检测小鼠血清中IFNγ含量，并于照后第15天检测小鼠部分免疫学指标。 结果：照后第9~15天，4次（质粒+5Gy）组小鼠肿瘤生长速率明显低于质粒+20 Gy组，且平均生存时间明显延长；照后第3天质粒+20 Gy组瘤内IFNγ转录水平明显高于质粒组，照后第1，3天血清中IFNγ含量明显高于质粒组和对照组，照后第15天脾脏NK细胞毒活性、IL2和IFNγ分泌活性均明显高于20 Gy照射组。结论: 多次小剂量基因放射治疗的抑瘤效应优于单次大剂量基因放射治疗。基因放射治疗组可能通过诱导瘤内IFNγ表达增强，使血液中IFNγ浓度升高，从而提高荷瘤机体免疫功能和抗肿瘤能力。     

RNAi的肿瘤基因治疗

近年来研究表明，通过特异性阻断剂抑制肿瘤细胞DNA损伤修复过程中关键调控基因功能，可以抑制DNA修复，增强其放疗效果。RNA干扰（RNAinterference，RNAi）作为一种转录后基因沉默机制，从1998年Fire首次报道双链RNA可以特异性地沉默基因表达以来，RNAi已经在各个领域广泛应用，尤其在肿瘤的治疗领域中，已显示巨大的潜力。     

低剂量电离辐射对小鼠下丘脑cAMP,cGMP及Fos蛋白表 …

目的 研究低剂量辐射对小鼠下丘脑ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ及Ｆｏｓ蛋白表达的影响。方法 ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ和Ｆｏｓ蛋白分别采用竞争性蛋白结合分析、放免分析和免疫组织化学法。结果 ７５ｍＧｙＸ射线全身照射后，小鼠下丘脑ｃＡＭＰ含量迅速增高，１５ｍｉｎ即达峰值，而后迅速回降，１ｈ后接近假照射水平，以后出现小的波动；ｃＧＭＰ含量的变化基本与ｃＡＭＰ的变化相反；Ｆｏｓ蛋白在下丘脑诸多神经元核团内均呈阳性，照射后８     

生精细胞凋亡与电离辐射

哺乳动物睾丸精子发生过程中具有自发的生殖细胞死亡现象。这种死亡主要是通过细胞凋亡机制实现的。深入了解睾丸生财亡规律，性激素和理化因素对其影响，以及电离辐射的关系，对示生殖细胞凋亡的本质具有重要的生物学和遗传学意义。     

携带Egr-1启动子和Endostatin基因的腺病毒穿梭质粒构建及鉴定

目的构建含辐射敏感启动子Egr-1和人内皮抑素（endostatin）基因的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-Endo-statin。方法利用RT-PCR方法从人胎肝中扩增出人endostatin cDNA序列，从T-Egr1质粒中扩增出Egr-1基因序列，并将它们连接到pMD19T质粒进行测序，利用基因重组技术构建含有辐射诱导启动子Egr-1的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egrl-Endostafin。结果经测序证实，获得的人endostatin基因和Egr-1基因与GenBank公布的完全一致，表明克隆人帆．dostatin基因和Egr-1启动子成功，并经鉴定证实含有辐射诱导启动子Egr-1的腺病毒穿梭质粒pshuttle-Egr1-Endostatin构建正确。结论本实验成功克隆了人endostatin基因和Egr-1启动子并构建了含辐射敏感启动子的腺病毒穿梭质粒pshtntle-Egr1-Endostatin。     

pEgr1-TRAIL重组质粒联合电离辐射对乳腺癌MCF-7细胞死亡受体通路相关基因和蛋白表达的影响

目的: 将Egr1-TRAIL重组质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞且加X线照射,探讨MCF-7细胞中死亡受体通路相关基因和蛋白表达的变化。方法: 将MCF-7细胞分为对照组、空质粒组、pEgr1-TRAIL质粒组、4.0GyX射线组、空质粒+4.0GyX射线组和pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组。Real-timePCR法检测各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6mRNA表达水平;Western blotting法检测各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白相对表达水平。结果: 经4.0GyX射线照射后4h,与对照组比较,各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6mRNA表达水平升高(P<0.01),8h达最高值,之后开始降低,到24h恢复到照射前水平;各组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6mRNA表达由高到低的顺序为pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组> 空质粒+4.0GyX射线组> pEgr1-TRAIL质粒组> 空质粒组> 4.0GyX射线组> 对照组,其中pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6mRNA表达水平明显高于其他各组(P<0.01)。MCF-7细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白在照射后6h开始表达,12h达高峰,48h后细胞中DR4、caspase-9和caspase-6蛋白表达水平仍高于6h时蛋白表达水平。与对照组比较,其他各组MCF-7细胞中蛋白相对表达水平由高到低的顺序为pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组> 空质粒+4.0GyX射线组> 4.0GyX射线组> pEgr1-TRAIL质粒组> 空质粒组> 对照组,其中pEgr1-TRAIL+4.0GyX射线组MCF-7细胞中蛋白相对表达水平明显高于其他各组。结论: pEgr1-TRAIL重组质粒联合放疗对MCF-7细胞具有杀伤和诱导凋亡的作用,其效果优于单纯质粒或单纯照射。     

RNAi的肿瘤基因治疗

近年来研究表明,通过特异性阻断剂抑制肿瘤细胞DNA损伤修复过程中关键调控基因功能,可以抑制DNA修复,增强其放疗效果.RNA干扰(RNA interference,RNAi)作为一种转录后基因沉默机制,从1998年Fire首次报道双链RNA可以特异性地沉默基因表达以来,RNAi已经在各个领域广泛应用,尤其在肿瘤的治疗领域中,已显示巨大的潜力.