去细胞同种异体神经移植修复人体长段周围神经缺损

目的：探讨周围神经缺损的治疗方法，评价去细胞同种异体神经移植修复人体长段周围神经缺损的效果。方法：实验于2003—04—14／2004—05—14解放军总医院骨科完成。取正常健康捐献者的周围神经，进行化学处理，应用化学萃取法制备去细胞同种异体神经，对11例周围神经缺损的住院患者进行神经移植，修复神经缺损。分别于术后定期对患者进行感觉、运动功能检查，并行肌电图检查。结果：参与的11例患者，均获得随访，无缺失。7例患者术后功能有恢复，改善率64％（7／11），其中1例移植9cm修复正中神经缺损的患者术后6个月，感觉与运动功能开始恢复，术后16个月，患手能够持物，感觉和肌力恢复。11例患者中6例缺损位于腕部以上的患者恢复3例，术后6个月行肌电图检测，有神经冲动穿过，改善率50％（3／6），5例缺损位于腕部以下的患者恢复4例，改善率80％（4／8）。结论：应用化学去细胞神经同种异体移植可修复人体周围神经缺损，并且可以避免取自体神经的弊端。     

双相磷酸钙组织工程骨块重建股骨头内骨缺损的实验研究

目的 观察在体外构建的具有仿生结构的双相磷酸钙（biphasic calcium phosphate，BCP）组织工程骨块植入犬股骨头缺损内的骨再生情况及预防股骨头塌陷的效果。方法 以犬股骨头的松质骨样本Micro—CT（micro—computed tomography）图像为基础，提取其中的图像信息，利用三维凝胶叠层成形法制备出具有仿骨小梁结构的陶瓷支架。在体外利用诱导分化的自体骨髓间充质细胞与仿生BCP支架复合，构建组织工程骨块，将其植入10只犬的股骨头负重区骨缺损内；另取10只火作为对照组，在股骨头骨缺损区内打球植入自体松质骨粒，对比观察仿生BCP骨块的植入效果。结果 制备出的股骨头仿生BCP支架具有良好的三维空间结构，支架小梁具有一定的方向性，呈板状模型；细胞在支架表面大量生长。植入动物体内30周后，实验组火股骨头外形基本完整，新生骨质包绕支架小梁并沿支架表面生长，而对照组犬股坩头均出现不同程度的塌陷。结论 仿生BCP组织工程骨块具有良好的生物相容性，植入犬股骨头负曩区骨缺损后，能在一定程度上防止股骨头塌陷。     

去势大鼠骨质疏松模型的综合评定

目的：多种方法评定大鼠去除双侧卵巢三个月后是否形成明显骨质疏松状态。方法：分别从6月龄SD雌性大鼠假手术对照（Sham）组和卵巢切除骨质疏松（0VX）组各取大鼠8只。将全部大鼠取血后处死。取一侧胫骨、股骨,去净软组织。分别行血生化骨代谢指标检测、MicroCT检查、骨组织计量学测量及组织病理学观察、三点弯曲试验。所得数据经SPSS13．0统计分析。结果：OVX组大鼠ALP、OC较Sham组明显升高,P〈0．05。骨小梁数目减少,排列稀疏,骨小梁断裂;骨小梁面积比和体积比、厚度和数目,骨矿含量和骨体积密度等均较Sham组显著降低,骨小梁分离度增加,P〈0．05。OVX组弹性载荷与Sham组升高明显,P〈0．05;最大应力和弹性应力显著降低P〈0.05。结论：经多种方法评定,3月龄SD雌性大鼠切除卵巢3月后,形成明显骨质疏松状态。OVX大鼠,骨量降低,骨小梁结构改变,骨生物力学性能变差。     

131Ⅰ标记单克隆抗体CL3瘤内注射对荷人结肠癌裸鼠的放射免疫治疗

我们采用１３１Ⅰ标记单克隆抗体ＣＬ３瘤内注射治疗荷人结肠癌裸鼠移植瘤，与腹腔注射比较：大剂量组每鼠给药１８．５ＭＢｑ，观察３４天，１６天后前者的肿瘤生长抑制率高于后者，分别为５７．９％±１０．２％和４７．２％±１６．６％（Ｐ＜０．０５），肿瘤完全抑制率分别为６／１６和１／８；小剂量组每例５．３６ＭＢｑ，观察１７天，６天后，前者的肿瘤生长抑制率明显高于后者，分别为４９．６％±１７．５％和２６．１％±３．４％（Ｐ＜０．０１）．计算小剂量给药后五天的肿瘤累积吸收剂量，瘤内注射是腹腔注射组的３．３倍，分别为１８．７Ｇｙ和５．７Ｇｙ．结果提示在肿瘤放射免疫治疗中采用瘤内注射法给药，具有低毒高效的治疗作用，临床实用价值较高。     

酸性氧化电位水用于室内环境表面消毒效果的观察

目的观察酸性氧化电位水（EOW）对无菌室物体表面消毒后的效果。方法采用EOW浸泡拖布、抹布擦拭实验室、细胞培养室内的地面、墙、桌面，水浴锅内表面及拖鞋用EOW各浸泡5min，前5处物体表面经擦拭、浸泡后，用培养皿扣贴取材，并按A、B、C、D4组进行菌落计数；A组：为消毒前；B组：使用EOW擦拭、侵泡消毒后；C组：采用紫外线照射30min后，从5处表面取材培养；D组：采用紫外照射30min后，用EOW擦拭、浸泡后消毒采样培养。结果A组：GLP实验室、细胞培养室内环境表面均有菌落，有的无法计数；B组：除水浴锅中有1个平皿长出1个菌落处，有效率达90％；C组：虽经紫外线照射，空气中消毒效果较好，但从5处物体表面取材培养，可能与紫外线消毒离地面的距离较高有关；D组：细菌培养均为阴性。结论EOW消毒效果肯定、价格低廉，大面积、高处擦拭消毒使用方便，对皮肤刺激性小，符合环保要求，值得推广应用。     

人喉腺泡型横纹肌肉瘤细胞系(PLA-802)的建立及其生物学特性

本文报告了一例喉部腺泡型横纹肌肉瘤病人死后8小时尸体解剖时,从转移至肺与胸膜肿瘤组织中培养成活的横纹肌肉瘤细胞系,定名为PLA-802。体外培养23个月,传代168次,细胞生长良好。细胞系由圆形与梭形细胞所组成。光镜下见细胞胞浆内有横     

破骨细胞分化相关因子在骨巨细胞瘤内的表达及其作用

目的:明确肿瘤坏死因子超家族成员在骨巨细胞瘤的表达及对其肿瘤细胞的作用,同时观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合干扰素γ作用于骨巨细胞瘤肿瘤细胞的效果。方法:实验于2005-01/2006-08在解放军总医院骨科研究所完成。①用免疫组织化学染色方法检测肿瘤坏死因子超家族成员核因子κB受体激活因子配基、核因子κB受体激活因子、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、死亡受体4、死亡受体5、骨保护素等因子的表达。②骨保护素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、干扰素γ分别以不同的浓度作用于培养的骨巨细胞瘤肿瘤细胞24h;随后用干扰素γ(1000 U/mL)先诱导24h再加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200μg/L)作用于细胞24h,用CCK-8方法来检测细胞存活率。③选取在药物合理浓度范围内有明显抑制作用的用药方式所作用的细胞,用流式细胞仪检测其凋亡率,倒置显微镜下观察细胞药物作用后的形态学改变。结果:①破骨细胞分化相关因子在细胞和组织水平的表达:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、骨保护素、核因子κB受体激活因子配基在骨巨细胞瘤所有细胞成分内均有表达,死亡受体4,死亡受体5在多核巨细胞内强阳性表达,在梭型单核细胞表达强度较弱,部分标本内死亡受体4呈阴性表达。核因子κB受体激活因子仅在多核巨细胞内强阳性表达。②CCK-8检测药物作用后细胞抑制作用:骨保护素对肿瘤细胞无抑制作用,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体仅在较高浓度时对肿瘤细胞有弱的抑制作用,干扰素γ对巨细胞瘤细胞抑制作用有浓度依赖性,当先以干扰素γ(1000 U/mL)诱导24h再加入肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200μg/L)共同作用24h,细胞存活率明显下降。③凋亡分析:流式细胞检测发现干扰素γ(1000 U/mL)诱导24h再联合不同浓度肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(100,200μg/L)作用后,凋亡率分别为(39.94±2.87)%,(48.32±3.33)%,倒置显微镜观察也可见明显的细胞抑制表现。结论:干扰素γ与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体序贯用药后在各自合理用药浓度范围内对骨巨细胞瘤肿瘤细胞的凋亡作用明显增强,为骨巨细胞瘤的治疗提供了一种全新的选择。     

鸡肌腱的玻璃化冷冻保存

目的:筛选出适合于肌腱玻璃化冷冻保存的溶液及保存程序,并通过细胞培养来进一步检测玻璃化肌腱的活性。方法:实验于2003-11/2005-02在解放军总医院骨科研究所完成。实验包括①筛选与检测:取来亨鸡30只,切取屈趾深肌腱,按随机数字法分为2组,新鲜鸡肌腱组,玻璃化组。运用正交设计和肌腱活性快速检测技术,筛选出适合鸡屈趾肌腱玻璃化保存程序,再从6种玻璃化溶液中(二甲基亚砜 乙酰胺 丙二醇 聚乙二醇;乙二醇 二甲基亚砜 蔗糖;乙二醇 二甲基亚砜 丁二醇;丙二醇 二甲基亚砜 蔗糖;二甲基亚砜 乙酰胺 丙二醇;二甲基亚砜 丙二醇)筛选出适于肌腱玻璃化保存的配比方案。②细胞培养:将玻璃化法保存鸡屈趾深肌腱进行细胞培养,观察培养后细胞的存活情况,以了解玻璃化法保存肌腱的细胞活性。结果:①通过统计学分析,肌腱玻璃化保存的最佳程序为平衡处理选择4℃3个浓度梯度、平衡时间选择4℃30min、洗脱处理选择4℃3个浓度梯度、洗脱时间选择4℃20min。玻璃化溶液二甲基亚砜 丙二醇为的最佳配比方案。②应用酶消法测得新鲜肌腱活性为89.26%,玻璃化法优化组合所保存肌腱的活性为78.49%。③将玻璃化组肌腱进行细胞培养,细胞第8天自组织块周边长出,第21天后传代,培养3代后出现明显的退化现象,玻璃化组肌腱细胞的生物学特性与新鲜肌腱组相似。④将两组肌腱所培养的细胞分别进行免疫组织化学染色,经鉴定均为肌腱细胞。结论:玻璃化法冷冻保存的肌腱具有良好的细胞活性,经细胞培养获得成功,其生物学特性无明显变异。     

兔膝关节软骨及软骨下骨改变生存环境后的转归

目的应用关节镜灌洗术、软骨下钻孔术、骨膜或软骨膜移植等方法治疗关节软骨损伤,透明软骨得不到真正的修复。因此以自体或异体软骨细胞、骨髓基质细胞为种子细胞修复关节软骨并观察关节透明软骨细胞和骨髓基质细胞在体内不同微环境中的变化。方法新西兰兔9只,在股骨髁髌骨滑车关节面钻取两个直径2.5mm、深3mm的骨软骨块,将软骨面向下、软骨下骨向上原位倒置,分别于4,8,12周取材,做大体观察和苏木精-伊红(HE)染色、safranin-O染色、II型胶原免疫组化。结果4周时倒置体表面有纤维组织覆盖,原关节软骨细胞形态结构正常。8～12周,倒置体表面有纤维软骨再生,原关节透明软骨基本保持其原有特性。结论以骨松质为支架的骨髓基质细胞未能完全修复关节软骨损伤。修复关节软骨最好采用同一组织来源的透明软骨细胞。     

去细胞同种异体神经移植修复人体长段周围神经缺损

目的:探讨周围神经缺损的治疗方法,评价去细胞同种异体神经移植修复人体长段周围神经缺损的效果。方法:实验于2003-04-14/2004-05-14解放军总医院骨科完成。取正常健康捐献者的周围神经,进行化学处理,应用化学萃取法制备去细胞同种异体神经,对11例周围神经缺损的住院患者进行神经移植,修复神经缺损。分别于术后定期对患者进行感觉、运动功能检查,并行肌电图检查。结果:参与的11例患者,均获得随访,无缺失。7例患者术后功能有恢复,改善率64%(7/11),其中1例移植9cm修复正中神经缺损的患者术后6个月,感觉与运动功能开始恢复,术后16个月,患手能够持物,感觉和肌力恢复。11例患者中6例缺损位于腕部以上的患者恢复3例,术后6个月行肌电图检测,有神经冲动穿过,改善率50%(3/6),5例缺损位于腕部以下的患者恢复4例,改善率80%(4/8)。结论:应用化学去细胞神经同种异体移植可修复人体周围神经缺损,并且可以避免取自体神经的弊端。