低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞增殖及抗癌活性的实验研究

目的探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL)增殖和抗肿瘤效应的影响。方法采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;将LIUPS强度0设为对照组,10 mW/cm^2组、20 mW/cm^2组、30 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组为刺激组刺激HPBL增殖,每天一次,每次刺激10 min,连续刺激2 d。CCK-8法检测各组细胞增殖活性;酶联免疫吸附法检测抗肿瘤因子[γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)]表达情况;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌95D细胞检测其抗肿瘤活性。结果 LIPUS刺激HPBL2 d共2次后,30 mW/cm^2组的细胞增殖能力增强,与对照组和其他强度刺激组比较,细胞数量和细胞团块数量均增多。CCK-8检测结果显示,30 mW/cm^2组光密度值与对照组、20 mW/cm^2组、40 mW/cm^2组、50 mW/cm^2组比较差异均有统计学意义(P=0.032、0.027、0.027、0.001)。抗肿瘤因子检测显示,30 mW/cm^2组INF-γ、IL-2、TNF-α和GM-CSF分别为(39.66±8.30)ng/L、(619.84±125.94)ρg/ml、(461.29±14.08)ng/L、(108.11±2.07)ng/L,均高于对照组[(24.40±6.84)ng/L、(279.56±128.18)ρg/ml、(417.17±21.44)ng/L和(96.53±1.56)ng/L]和50 mW/cm^2组[(16.52±0.87)ng/L、(141.00±93.71)ρg/ml、(171.96±9.46)ng/L、(72.56±8.95)ng/L],差异均有统计学意义(均P<0.01)。共培养实验显示,30 mW/cm^2组人肺巨细胞癌95D细胞杀伤率为51.11%±5.21%,显著高于对照组(42.86%±0.55%)和50 mW/cm^2组(42.00%±3.67%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 LIPUS刺激可提高HPBL的增殖活性和杀伤率。     

海口地区α地中海贫血缺失型基因类型分析

目的探讨海口地区α地中海贫血的发病率及分析缺失型基因的类型。方法对具有仪地中海贫血高风险的278人使用裂口PCR（gap—PCR）法进行缺失型基因的检测。结果278人中检出仪地中海贫血111人,发病率为39．93％。d地中海贫血缺失型基因类型分布为东南亚缺失型杂合子（-SEA／αα）28例,东南亚缺失型纯合子（-SEA,-SEA）4例,右缺失型杂合子（-α3．7／αα）23例,右缺失型纯合子（-α3．7／-α3．7）4例,左缺失型杂合子（-α4．2／αα）17例,左缺失型纯合子（-α4．2／-α4．2）2例,血红蛋白H病21例,3．7＼4．2双重杂合子（-α3．7／-α4．2）4例,α地中海贫血复α地中海贫血8例。结论α地中海贫血是最常见、危害最大的单基因遗传病,在海口地区属于高发病区,做好α地中海贫血基因类型的诊断对于优生优育起到极其重要的指导意义,提高整体人类出生素质。     

非小细胞肺癌中长链非编码RNA LINC00460表达及其临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）患者组织中长链非编码RNA LINC00460（lncRNA LINC00460）的表达情况及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法 将中南大学湘雅医学院附属海口医院2014年1月—2015年6月收治的73例NSCLC患者纳入研究对象,使用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测NSCLC患者癌组织样本和对应癌旁正常组织中lncRNA LINC00460的表达水平,并分析其与患者临床病理特征（性别、年龄、肿瘤大小、临床类型、临床分期、分化程度、是否淋巴转移）及预后的关系。结果 RT-qPCR检测结果显示,73例NSCLC患者癌组织中lncRNA LINC00460的平均相对表达量（8.45±2.91）高于癌旁组织（1.73±0.92）,二者相比差异具有统计学意义（P<0.05）。不同性别、年龄、肿瘤直径及病理分型的NSCLC患者癌组织中lncRNA LINC00460相对表达量比较差异均无统计学意义（P>0.05）,但不同TNM 分期、分化程度及是否发生淋巴结转移的差异均有统计学意义（P<0.05）,即TNM分期越高、分化程度越低、发生淋巴结转移者,则lncRNA LINC00460相对表达量越高。根据患者癌组织中lncRNA LINC00460的表达水平,将其分为高表达组（≥8.45）和低表达组（<8.45）,其中高表达组（24例）与低表达组（49例）的无进展生存期分别为9.7个月（95%CI：7.6~11.9个月）和18.6个月（95%CI：13.8~23.6个月）,差异有统计学意义（P<0.05）;高表达组与低表达组的总生存期分别为13.2个月（95%CI：10.1~17.2个月）和23.8个月（95%CI：17.4~28.8个月）,差异也有统计学意义（P<0.05）。结论 lncRNA LINC00460在NSCLC患者癌组织中表达上调,其表达水平升高与NSCLC的恶性程度有关,可能对NSCLC的预后判断具有一定的指导意义。     

活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶在系统性红斑狼疮患者肾组织中的表达及临床意义

目的 探讨活化诱导的胞嘧啶核苷脱氨酶（AICDA）在系统性红斑狼疮（SLE）患者肾组织中的表达及临床意义。方法 收集2013年3月至2017年6月于中南大学湘雅医学院附属海口医院就诊的73例SLE患者和36例原发性膜性肾病（Ⅱ期）患者（对照组）肾穿刺活组织检查的肾组织,利用免疫组织化学染色方法检测肾组织中AICDA的表达水平。分析AICDA的表达与SLE患者临床病理参数（病理分型、系统受累情况、疾病活动度评分、治疗转归）的关系。结果 SLE患者肾组织中AICDA的表达水平高于原发性膜性肾病患者,差异有统计学意义（6.12±2.47 vs 3.33±1.91,P<0.05）。Ⅲ型（5.25±4.06）、Ⅳ型（6.88±2.20）、Ⅴ型（6.10±1.66）、Ⅲ+Ⅴ型（5.75±2.34）、Ⅳ+Ⅴ型（5.72±2.37）狼疮性肾炎患者间AICDA的表达水平差异无统计学意义（P均>0.05）。有口腔溃疡、间质性肺炎、神经系统损害、关节炎、血液系统损害和浆膜炎SLE患者肾组织中AICDA的表达水平分别高于无上述系统损害者（7.02±2.14 vs 4.17±1.97,7.86±2.39 vs 4.98±1.76,9.83±1.34 vs 5.39±1.92,6.88±2.04 vs 2.93±1.21,7.51±1.81 vs 3.70±1.23,7.29±2.33 vs 5.34±2.29;P均<0.01）。SLE疾病活动度评分越高,AICDA的表达越强,组间差异有统计学意义（P<0.01）。SLE完全缓解患者肾组织中AICDA表达低于未完全缓解患者,但差异无统计学意义（5.84±2.39 vs 6.80±2.56,P>0.05）。结论 AICDA与SLE的发生和发展有关,有望为SLE的治疗带来新的靶点。     

儿童MELAS综合征临床误诊分析

目的探讨儿童线粒体脑肌病高乳酸血症和卒中样发作综合征(MELAS)临床的误诊原因,提高对该病的早期诊断和治疗能力。方法对1例长期误诊为癫痫的MELAS综合征儿童患者的临床表现、实验室检查、影像、病理进行回顾性分析。结果该患者的主要表现为发热、抽搐、肌无力、听力和视力障碍、失语、脑卒中样发作、智力下降、生长发育迟滞、血乳酸增高等;脑电图检查提示广泛性异常脑电图;病理检查可见线粒体增加及形态结构异常;头部MRI示左侧顶叶及右侧颞枕顶表现为不符合脑血管分布的多发长T1长T2信号;基因检测结果为A3243G位点杂合突变。结论 MELAS综合征的诊断必须与临床、神经影像学、病理、基因检测相结合,对于临床无法解释的青少年脑卒中、癫痫患者首先应考虑MELAS综合症。早期诊断及积极治疗,对于改善患者整体预后具有重要的临床意义。     

低强度脉冲超声增强人外周血淋巴细胞的增殖及抗癌活性

目的：本研究我们为了探讨低强度脉冲超声(LIPUS)对人外周血淋巴细胞(HPBL) 增殖和抗肿瘤效应的影响。方法：采用Ficoll梯度离心法分离HPBL;采用强度为0-80 mW/cm_²的LIUPS刺激HPBL增殖;CCK-8法检测细胞增殖活性;ELISA法检测抗肿瘤因子(γ干扰素(INF-γ)、白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF))在培养基上清中的表达;采用共培养HPBL与人肺巨细胞癌细胞(95D)检测其抗肿瘤活性。结果：与对照组(0 mW/cm_²)相比,LIPUS刺激组(30 mW/cm_²)每天刺激10 min,刺激2d后HPBL细胞增殖增强(P<0.01)。抗肿瘤因子刺激组INF-γ(39.66ng/L±8.30)、IL-2(619.84 pg/mL ± 125.94)、TNF-α(461.29 ng/L ± 14.08)和GM-CSF (108.11 ng/L ± 2.07),分别大于对照组(24.40ng/L±6.84)、(279.56 pg/mL ± 128.18)、(417.17 ng/ ± 21.44)和(96.53 ng/L ± 1.56);共培养实验显示,30 mW/cm_²组肺癌杀伤率为51.11%±5.21,对照组为42.86%±0.55。结论：LIPUS刺激后可提高HPBLs的增殖活性和杀伤率。本研究结果可能对LIPUS联合淋巴细胞治疗肿瘤具有较大的治疗潜力和依据。     

一MYH9-RD家系患者血小板中NMMHC-ⅡA检测与分析

非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病(non-muscle myosin heavy chain 9 related disease,MYH9-RD)是一类罕见的常染色体显性遗传性血液性疾病,典型病例具有巨大血小板、血小板减少和粒细胞包涵体三大特点及不同的临床表型,是遗传性大血小板症的一个类型[1]。有研究[2,3]认为MYH9-RD是由于非肌性肌动蛋白重链ⅡA     

益脾活血方调控B7-H1/PD-1通路对大鼠肝癌切除术后防止复发的机制研究

目的:研究益脾活血方调控细胞程序性死亡-配体1(B7-H1)与细胞程序性死亡受体～1(PD-1)结合通路对大鼠肝癌切除术后防止复发的机制。方法:选用健康SPF级雄性SD大鼠36只,将其随机分为对照组、西药组、中药组,每组12只,三组接种人肝癌细胞,7天后取肝脏已成瘤裸鼠进行肝癌手术切除建立肝癌术后裸鼠模型,分别给予益脾活血方和5-氟尿嘧啶进行干预,连续4周。观察并记录裸鼠一般情况、采用PET/CT影像学检查术后复发情况、苏木精-伊红染色法(HE法)检验术后复发组织病理变化、蛋白质印迹法(WB法)检测B7-H1/PD-1表达量、流式细胞术检测CD_4~+、CD_8~+T淋巴细胞水平。结果:对照组、西药组、中药组三组均可在裸鼠左中上腹发现高摄取区域,西药组和中药组复发率远远低于对照组(P0.05),西药组和中药组复发率无显著差异(P0.05),与对照组相比,西药组和中药组B7-H1相对表达量显著降低(P0.05),西药组B7-H1相对表达量低于中药组(P0.05),与对照组相比,中药组和西药组术后复发裸鼠CD_4~+、CD_4+~/CD_8~+在外周血、脾脏中显著上升(P0.05),CD_8~+细胞水平明显降低(P0.05);西药组在外周血和脾脏中CD_4~+水平显著高于中药组(P0.05),外周血中中药组和西医组CD_8~+水平比较无明显差异(P0.05)。结论:益脾活血方可通过介导B7-H1/PD-1改善T淋巴细胞亚群失衡防止肝癌术后复发。     

非肌球蛋白重链9相关疾病大家系患者中性粒细胞包含体特点分析

目的分析一非肌球蛋白重链9相关疾病（MYH9-RD）大家系患者中性粒细胞包涵体的形态和结构特点,阐明MYH9-RD中性粒细胞包涵体形成的特点,以探讨MYH9-RD中性粒细胞包涵体的致病机制。方法应用光学显微镜（瑞姬染色）和电子显微镜观察中性粒细胞包涵体形态和超微结构特点;应用间接免疫荧光复染技术观察MYH9-RD患者与正常对照者之间非肌性肌球蛋白IIA（NMMHC—IIA）在胞浆中的分布情况。结果光学显微镜和电子显微镜下可见中性粒细胞中明显的包涵体,形态多样,大多位于细胞边缘;间接免疫荧光复染技术显示患者和正常人之间NMMHC—IIA在中性粒细胞中的分布有差异,中性粒细胞胞浆中存在明显绿色荧光的包涵体,其形态和轮廓与瑞一姬氏染色显示的包涵体形状、大小基本一致,但更为清晰;正常对照的粒细胞胞浆中未见包涵体。结论光学显微镜和电子显微镜进一步确认了家系患者包涵体的存在。免疫荧光技术显示患者和正常人之间NMMHC—IIA在中性粒细胞中的分布有差异;MYH9-RD患者中性粒细胞包涵体的主要构成成份是NMMHC—IIA;包涵体的形态结构复杂多样可能与本家系临床表型复杂多样有关,该家系对进一步揭示MYH9-RD的致病机制具有重要的意义。     

MYH9-RD孕妇患者的诊断和临床特点分析

目的:对1例MYH9-RD孕妇患者进行诊断及临床特点分析以探讨其致病机制。方法:对此患者进行详细的临床体征筛查,包括白内障、神经性耳聋、异常出血、肾损害等检查及其他并发症调查等和实验室检查;分别采用自动血细胞计数仪法和手工法计数血小板数量,应用染色体核型分析技术进行细胞学诊断,应用光学显微镜和电子显微镜观察中性粒细胞包涵体和血小板的形态特点和超微结构特点,同时临床体征和实验室评估等。结果:患者具有典型的血小板减少、巨大血小板和粒细胞包涵体三联症,外周血染色体核型分析正常,患者机数血小板数明显低于镜数血小板数(P<0.01),电镜下可见清晰的巨大血小板和包涵体的超微结构。此外,正常对照者血小板数量、形态和结构均正常,而且中性粒细胞中未见包涵体。临床表型高度复杂,伴有青光眼、转氨酶升高、血脂升高、哮喘、鼻炎等多种疾病。结论:通过临床表现和实验室特点分析,该患者MYH9-RD诊断成立,且临床表型复杂多样。此外,为了正确反映巨大血小板患者的血小板数量,应使用人工计数法而不是细胞自动计数仪法来计数血小板的数量。