Construction of Sox9 gene eukaryotic expression vector and its inductive effects on directed differentiation of bone marrow stromal cells into precartilaginous stem cells in rats

Sox9 gene was cloned from immortalized precartilaginous stem cells and its eukaryotic expression vector constructed in order to explore the possibility of bone marrow-derived stromal cells differentiation into precartilaginous stem cells induced by Sox9. A full-length fragment of Sox9 was obtained by RT-PCR, inserted into pGEM-T Easy clone vector, and ligated with pEGFP-IRES2 expression vector by double digestion after sequencing. The compound plasmid was transfected into born marrow-derived stromal cells by Lipofectamine 2000, and the transfection efficacy and the expression of Sox9 and FGFR-3 were observed. Flow cytometry was used to identify the cell phenotype, and MTT was employed to assay proliferative viability of cells. Sequencing, restrictive endonuclease identification and RT-PCR confirmed that the expansion of Sox9 and construction of Sox9 expression vector were successful. After transfection of the recombinant vector into bone marrow-derived stromal cells, the expression of Sox9 and FGFR-3 was detected, and proliferative viability was not different from that of precartilaginous stem cells. It was concluded that Sox9 gene eukaryotic expression vector was successfully constructed, and the transfected bone marrow-derived stromal cells differentiated into the precartilaginous stem cells.     

骨内输液技术在海水浸泡战伤早期救治中应用的实验研究

目的观察骨内输液技术在海水浸泡犬肢体火器伤合并烧伤时早期容量复苏中的应用效果.方法将肢体软组织炸伤合并15%深II度烧伤的实验犬浸泡于东南沿海海水(水温21℃)3-4h,出水后将骨内输液针插入股骨下端,加压输入格林氏液,监测致伤犬血液动力学、血气以及肝脏氧分压的变化,对照组由股静脉输入格林氏液.结果由股骨下端加压输液可达20mL/min,骨内输液后致伤犬动脉血压、心排量以及动脉和组织氧分压的改善与静脉输液无明显差异.结论骨内输液可应用于海水浸泡战伤的早期救治.     

奥运水上比赛场馆有害生物防治的方法与效果

奥林匹克水上比赛场馆有别于其他运动项目的场馆，除具备运动员、裁判员、新闻媒体人员等休息和工作的场所外，比赛必须在具有国际标准的水域中进行。在水资源十分丰富的场所，极易为媒介生物的吸血类昆虫如：蚊、蠓和其他虫害提供良好的孳生环境。为此，奥林匹克承办国为了有效地防止有害生物对运动员的侵害和骚扰都展开过积极的防治，2004年雅典奥林匹克运动会，雅典“奥组委”和希腊政府针对国际恐怖主义和蚊媒传染病的可能发生，提出了“既要防劫机，又要防蚊虫”的对应措施，     

大鼠骨骺干细胞免疫纯化和Sox9基因真核表达载体的克隆构建*★

目的：Sox9基因是一种重要的早期胚胎发育相关基因，是前软骨细胞浓聚所必需的因子，其促进成骨但同时可以抑制骨骺细胞的终末分化，以延长软骨发育成熟过程，延迟软骨发育，抑制软骨细胞凋亡，有利于骨骼在生长发育阶段形成复杂的形状和结构。从骨骺干骨细胞中克隆得Sox9基因，并构建其真核表达载体。 方法: 实验于2007-03/07在同济医学院矫形外科实验室完成。①实验材料：出生< 24 h纯系清洁级新生SD大白鼠，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：参考游洪波等方法，采用免疫磁珠技术分离纯化具有FGFR-3特异性表面标志的大鼠骨骺干细胞，以FGFR-3抗体对骨骺干细胞的细胞爬片进行免疫细胞化学鉴定。提取骨骺干细胞总RNA，以RT-PCR方法获得Sox9基因的全长，插入pGEM○R-T Easy Vector System克隆载体中进行序列测定，测序正确后将其亚克隆至表达载体pEGFP-IRE2构建重组复合质粒。 结果:免疫组织化学证实，显微取材分离并纯化的细胞为骨骺干细胞。从骨骺干细胞中提取的总RNA经电泳可得28 s、18 s和5 s共3条带，测吸光度值为0.263 5，A 260 / A 280为1.874 1，说明提取的总RNA完整性较好，纯度高，符合RT-PCR的要求。PCR产物经电泳可得到约2 000 bp的特异性条带，与预期大小一致。经限制性内切酶酶切图谱分析DNA序列测定证实的目的基因已经插入重组质粒，成功地构建了Sox9质粒。 结论：成功地分离纯化了骨骺干细胞，克隆出Sox9基因并构建了Sox9基因的真核表达载体，为进一步研究Sox9的生物学功能及其在成软骨和成骨分化过程中的作用奠定了基础。     

刮吸法治疗腋臭

腋臭是常见病 ,治疗方法较多 ,各有优缺点。 1 995年以来我科采用刮碎吸除法 (简称刮吸法 )治疗腋臭1 5 7例 ,并设置了专用吸头 ,取得了良好的临床效果 ,其中 6 4例获得随访半年以上无复发。复习文献并报告如下。1　临床资料将腋臭分成三级 :重度 :患者穿着衬衣 0 .5米以外能闻到气味 ;中度 :患者裸露腋部 0 .5米以外能闻到气味 ;轻度 :患者裸露腋部 ,距离 0 .5米以内 ,或用棉球擦拭后才能闻到气味。本组 1 5 7例 ,男 6 6例 ,女 91例 ,年龄 1 3～ 4 6岁 ,其中重度 5 3例 ,中度 72例 ,轻度 32例 ,1 2例接受过药物注射治疗 ,2 7例接受过高频电…     

羧基肽酶-H抗体阳性成人隐匿性自身免疫糖尿病患者的TNF-α、IL-12，IL-18、IFN-γ水平观察

目的观察羧基肽酶-H抗体（CPH—Ab）阳性成人隐匿性自身免疫糖尿病（LADA）患者的肿瘤坏死因子α（TNF—α）、白介素-12（IL-12）、白介素-18（IL-18）、干扰素-γ（IFN-γ）的水平。方法时13例LADA患者、20例2型糖尿病（T2DM）患者及加例健康对照者，采用双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF—α、IL—12、IL—18、IFN-γ的含量。结果LADA组各项指标水平与T2DM组和对照组相比均有升高（均P〈0．05）；T2DM组TNF—α、IFN-γ水平较对照组升高（P〈0．05）；T2DM组IL—12、IL—18水平与对照组比较无明显差异（P〉0.05）。结论LADA患者体内活跃着细胞介导的细胞免疫反应，LADA诊断采取直接检测针对胰岛细胞自身抗原的细胞免疫反应要优于检测针对同一抗原的自身抗体水平。     

从体质理论防治支气管哮喘探微

从体质学说相关理论出发,对体质因素在哮喘发生发展过程中的相关性进行研究,认为中医体质与哮喘发病病因有密切关系,体质是哮喘证候形成的基础及哮喘存在有哮喘特异基因等。提出辨体论治哮喘时治病求本与中医"治未病"思想理论相结合,并以中医体质为手段增强哮喘防治的效果,在临床上应用日趋广泛。     

排钾-保钾结合排酸-保酸利尿方案对肺心病的探讨

目的　评价排钾 -保钾结合排酸 -保酸利尿方案对肺源性心脏病的优越性。方法　 191例肺源性心脏病例随机分为 A组 (42例 )、B组 (6 3例 )、C组 (86例 )。A组予呋塞米 2 0 mg(或氢氯噻嗪 5 0 mg) ,每日一次 ;B组予呋塞米 2 0 mg(或氢氯噻嗪 5 0 mg)、螺内酯 4 0 mg,每日各一次 ;C组予呋塞米 2 0 mg(或氢氯噻 5 0 mg)、螺内酯 4 0mg、乙酰唑胺 2 5 0 mg,每日各一次。对比三组治疗前后 K 、Na 、Cl- 、p H值、HCO3- 、SBE、Pa CO2 等指标的变化及肺性脑病的发生情况。结果　治疗 7日后 ,A组 K 、Na 、Cl 均显著降低 (P<0 .0 1) ,p H、HCO- 3、SBE和 Pa CO2 均显著升高 (P<0 .0 1) ;B组 Na 、Cl- 均显著降低 (P<0 .0 1) ,p H、HCO3- 、SBE和 Pa CO2 均显著升高 (P<0 .0 1) ,而K 变化不显著 (P>0 .0 5 ) ;C组虽 Na 仍有显著降低 (P<0 .0 5 ) ,但 K 、Cl- 、p H、HCO3- 、SBE、Pa CO2 变化均不显著 (P>0 .0 5 )。C组肺性脑病的发生率 (0 % )比 A组 (9.5 % )、B组 (12 .7% )显著减少 (P<0 .0 5～ 0 .0 1)。结论　排钾-保钾结合排酸 -保酸利尿方案对维持肺心病的电解质和酸碱平衡及预防肺性脑病的发生有明显优越性。     

老年阳萎与火针治疗

笔者自1975年后两次出国医疗,于阿拉伯也门共和国医院和科威特国家首都医院,以及在本院门诊,采用火针治疗老年性阳萎,疗效满意。本组114例老年阳萎均系非器质性病因所致。年龄均在50～70岁,病程20天～15年。阳事不举者60例,举而不坚者38例,坚而不久者16例。治法以肾俞、肝俞、