von Hippel-Lindau 基因两种异构体在真核细胞中高效表达和对细胞凋亡信号Bax/Bcl-2的影响

目的构建uon Hippel—Lindau（VHL）基因的两种异构体的重组表达载体并研究异构体与细胞凋亡信号之间的关系。方法将VHL基因的两种异构体VHL19、VHL30分别克隆入真核表达载体pcDNA3．1中，测序鉴定。转染293细胞，通过蛋白印记分析细胞内两种异构体高效表达与凋亡信号Bax、Bcl-2之间的关系。结果重组质粒经酶切获得与目的基因大小相当的条带（pVHL30约660bp，pVHL19约500bp），测序结果显示与目的基因完全相同。蛋白印记分析结果显示VHL19和VHL30在293细胞中获得表达，Bax和Bcl-2在空白对照、载体对照和pcDNA3．1-VHL19、pcDNA3．1-VHL30各组细胞之间的表达均没有观察到明显的差异。结论成功构建VHL两种异构体VHL19、VHL30的高效表达质粒，并获得高效表达。当细胞内VHL19、VHL30高效表达时凋亡信号Bax、Bcl-2表达并没有明显变化。     

德庆县2009～2011年疑似预防接种异常反应监测数据分析

目的了解德庆县疑似预防接种异常反应报告情况,分析预防接种的安全性及工作质量。方法采用描述性流行病学方法对德庆县2009～2011年报告的疑似预防接种异常反应资料进行分析。结果2009－2011年德庆县报告疑似预防接种异常反应病例170例,AEFI报告发生率为20．99／10万剂次。反应分类构成为一般反应占72．94％（15．31／10万剂次）、异常反应占24．12％（5．06／10万剂次）、偶合反应占2．94％（0．62／10万剂次）。全县接种单位报告覆盖率为61．54％（8／13）,病例报告男女比例为1．13：1,年龄分布以1岁以下年龄组较多（47．06％）,主要报告月份为3～8月份,报告反应时间较多发生在1d内（67．06％）;AEFI涉及25种疫苗,第一类疫苗AEFI报告发生率以全细胞百白破疫苗（212．12／10万剂次）、无细胞百白破疫苗（43．11／10万剂次）、麻风疫苗（29．07／10万剂次）居前3位;第二类疫苗AEFI报告发生率以甲乙肝联合疫苗（225．56／10万剂次）、23价肺炎疫苗（164．38／10万剂次）、甲肝灭活疫苗（115．42／10万剂次）居前3位。一类疫苗的报告发生率17．57／10万剂次,二类疫苗为37．58／10万剂次,两者比较差异无统计学意义（χ^2=2．75,P=0．10）。一般反应中以发热（53．23％）、局部红肿硬结（30．65％）为主;异常反应中以过敏性皮疹（56．10％）为主;偶合反应以上呼吸道感染较多。结论德庆县预防接种的安全性和工作质量较好,规范实施预防接种,减少预防接种异常反应的发生及其负面影响。促进提高预防接种工作质量。     

小儿急性原发性腹膜炎误诊为急性阑尾炎12例分析

目的:探讨小儿急性原发性腹膜炎误诊为急性阑尾炎的原因,进行讨论、分析和鉴别,提高诊疗水平。方法:回顾性分析2006年12月～2009年12月期间我院确诊的小儿急性原发性腹膜炎误诊为急性阑尾炎12例,分析其误诊原因。结果:12例急性原发性腹膜炎误诊为急性阑尾炎病例行急诊剖腹探查术,均痊愈出院。结论:积极采取诊断性治疗、密切观察,反复体检,是提高小儿急性原发性腹膜炎确诊率的必要手段;误诊的主要原因为主诉不清、询问病史不详细、体检不全面、没有认真鉴别诊断、未将腹腔穿刺液进一步检查。     

WN-γ基因修饰的骨髓基质细胞体外抗白血病作用的实验研究

目的研究重组人IFNγ腺病毒(Ad/hIFNγ)在CML病人骨髓基质细胞(BMSCs)中的转染效率、IFNγ表达,并进一步观察转染Ad/hIFNγ的骨髓基质细胞体外抗白血病细胞株K562增殖和诱导K562细胞凋亡的作用。方法以Ad/hIFNγ重组腺病毒按感染复数(MOI)为50转染CML病人骨髓基质细胞,RTPCR、ELISA及Westernblot分别检测转染Ad/hIFNγ的人骨髓基质细胞(BMSCs)中IFNγmRNA和IFNγ的表达;转染Ad/hIFNγ的骨髓基质细胞与K562细胞共培养,通过绘制K562细胞生长曲线分析其对K562细胞增殖的影响;并进一步通过流式细胞学分析其对K562细胞周期的影响和诱导凋亡的作用。结果RTPCR、Westernblot及ELISA方法都分别检测到转染Ad/hIFNγ的人骨髓基质细胞(BMSCs)中IFNγmRNA和IFNγ的表达;与对照组相比,转染Ad/hIFNγ的人骨髓基质细胞的实验组具有明显的抑制K562细胞增殖的作用(P=0.000),在细胞周期G1期的K562细胞比例明显增加,而S期K562细胞比例显著下降(P<0.01),并显著诱导K562细胞的凋亡(P<0.01)。结论Ad/hIFNγ转染人骨髓基质细胞后可获得IFNγ有效的表达,并在体外能有效地发挥抗白血病细胞作用。     

E1B缺陷腺病毒对鼻咽癌CNE-2细胞杀伤作用及其机理研究

目的：研究E1B缺陷腺病毒d11520对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤作用及其作用机理。方法：用MTT法和细胞病变试验（CPE）测量d11520在体外对CNE-2细胞的抑制和杀伤作用。并通过测定病毒在CNE-2细胞中的复制产量和DAPI染色试验探讨其杀伤机理；瘤内注射d11520，观察其对CNE-2裸鼠移植瘤的治疗效果。用免疫织化方法检测肿瘤组织中病毒的复制。结果：体外实验结果显示：d11520能在CNE-2细胞中复制，导致明显的细胞病变，显著抑制CNE-2细胞的生长，在病变细胞中可见明显的核膨胀，瘤内注射d11520能明显抑制裸鼠移植瘤的生长，在肿瘤组织中可检测到病毒复制。结论：d11520能在CNE-2细胞中复制并使之裂解，从而在体内外有效地抑制和杀伤CNE-2细胞。     

卵巢癌标志物CA125酶联免疫吸附分析法的建立

目的：建立一种血清ＣＡ１２５的临床检测方法。方法：一株ＣＡ１２５单抗用于固相包被，另一株与辣根过氧化物酶偶联制备ＣＡ１２５的酶标记物，以四甲基联苯胺为底物，采用一步法，建立了ＣＡ１２５的酶联免疫吸附分析法。结果；灵敏度为２．００Ｕ／ｍｌ。批内ＣＶ值低于５．３２％，批间ＣＶ值低于７．３９％。     

IFNγ修饰的DC对T细胞增值及杀伤肿瘤细胞作用影响的研究

目的:探讨结肠癌细胞抗原致敏的IFNγ修饰的树突状细胞（DC）对T淋巴细胞增殖和分化的影响，以及活化T细胞对结肠癌LoVo细胞的杀伤作用。方法:构建携带人IFNγ基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（Ad-IFNγ），用其感染人外周血单个核细胞来源的DC;以流式细胞仪检测DC表型的变化。用反复冻融裂解法提取的结肠癌LoVo细胞抗原致敏DC，将其与自身T淋巴细胞共同培养，观察T细胞增殖和分化的情况以及活化T细胞对LoVo细胞的杀伤作用。结果:Ad-IFNγ转染后24 h内几乎不影响DC的吞噬功能，DC自身表达的IFNγ在一定程度上能促进DC的成熟; IFNγ修饰的DC经LoVo细胞抗原致敏后能明显促进T淋巴细胞的增殖并使其向Th1细胞分化，Th1细胞对结肠癌LoVo有明显的特异性杀伤效应。结论:IFNγ修饰的DC能增强促进T淋巴细胞的增殖，诱导细胞免疫，增强T细胞的细胞毒作用，从而有效地杀伤肿瘤细胞。     

谈谈了解学生的几种方法

１资料法资料法包括学籍档案、德育考核、体育达标及各种奖惩记录等。这些资料能使老师了解到学生过去德智体美劳各方面的表现、实绩和评价，为老师管理、教育和培养学生提供了初步的依据。２家访法班主任老师通过与家长谈话或用书面联系方式对学生进一步全面了解。俗话说“知儿莫过于父母”，一般来说，家长对子女是最为了解的，绝大多数家长也都愿意配合老师，向老师客观地反映情况。家访法便于老师全面了解学生的成长环境和过程、身心健康和性格特点。３调查法老师可通过书面调查和深入学生中座谈的方式访问了解学生。其中书面调查包括问…     

腺病毒介导SARS病毒SN基因表达及其诱导的体液免疫

目的检测重组腺病毒Ad-SN在体内外的表达,初步探讨其在大鼠内诱导的体液免疫反应。方法Ad-SN感染Vero-E6细胞后用RT-PCR和WesternBlot法检测SN基因的表达;用WesternBlot法检测Ad-SN在大鼠皮下组织中的表达。Ad-SN皮下免疫大鼠,用ELISA法测定血清中抗SARS-CoVIgG水平。结果在Ad-SN感染的Vero-E6细胞中存在SN基因的转录,其mRNA量呈剂量依赖性;在Ad-SN感染的细胞、其培养上清及Ad-SN注射部位组织中均能检测到SN的表达。在Ad-SN免疫大鼠血清中可检测到高滴度SARS冠状病毒抗体(IgG)。结论Ad-SN能表达分泌型SN蛋白,并在大鼠体内诱导SARS-CoV特异的体液免疫反应。