锌转运体8自身抗体的放射配体检测法

目的建立锌转运体8自身抗体（ZnT8A）的放射配体检测法（RLA）。方法采用重组人ZnT8质粒,经试管内转录与翻译,获得“S-ZnT8抗原,35S-ZnT8与血清在自制旋转孵育器上旋转温育后,用蛋白A-琼脂糖沉淀免疫复合物。免疫复合物经TBST缓冲液洗涤后,用多功能闪烁发光分析仪检测沉淀物放射性计数值。参加国际糖尿病免疫学会（IDS）和美国疾病预防控制中心联合举办的第六次糖尿病自身抗体国际标准化评估（DAsP2009）,评价该方法的敏感性和特异性。检测429例1型、855例2型糖尿病患者以及405例正常人ZnT8A水平,初步评价其临床应用价值。结果该方法批内CV3．9N～9．8N,批间CV4．3％～13．8％;DASP2009显示,该方法敏感性66％,特异性100％。受试者操作特性曲线（ROC）分析显示,曲线下面积为0．879±0．034;该方法阳性阈值ZnT8A指数为0．011（405名正常人的99％百分位点）,检测1型糖尿病患者阳性率24．0％,高于初诊2型糖尿病患者1．3％和健康人0．99％（P均do．01）。结论建立的RLA法检测ZnT8A敏感性高、特异性强、重复性好,可应用于自身免疫糖尿病的诊断与分型。     

胰岛素自身抗体对成人隐匿性自身免疫糖尿病的诊断价值

目的 探讨胰岛素自身抗体(IAA)对成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)的诊断价值.方法 选取2003年10月至2007年3月连续在中南大学湘雅二医院就诊的1003例初诊2型糖尿病、110例1型糖尿病患者,并选取同期米院体格检杏的317名健康对照者,采用微量平板放射免疫法和放射配体法检测IAA及谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和蛋门酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)水平,了解IAA阳性率及与其他抗体重叠情况.对4例IAA单独阳性的LADA患者进行了4年随访,观察其临床特征变化.采用卡方榆验比较初诊2型糖尿病组、健康对照组和初诊1型糖尿病组IAA阳性率,采用t检验比较IAA阳性组和阴性匹配组空腹胰岛素(FINS)水平下降速率.结果 (1)初诊2型糖尿病患者IAA阳性率3.39%(34/1003)高于健康埘照组0.95%(3/317)(X2=5.3,P<0.05),但低于1型糖尿病组21.82%(24/110)(x2=68.2,P<0.01).(2)初诊2型糖尿病患者三种抗体联合检测阳性率为10.47%(105/1003),高于GADA 6.58%(66/1003)、IA-2A 2.79%(28/1003)、IAA3.39%(34/1003)单个抗体检测(x2值分别为9.2、37.8和46.2,P值均<0.05).IAA联合检测可提高LADA阳性检出率2.39%.(3)在4年随访期间,IAA阳性者逐年转阴,4例中的2例患者合并GADA阳性;IAA阳性组FINS水平下降速率较阴性匹配组呈增高趋势(分别为15.37%和5.29%;t=1.7,P=0.059).结论 IAA对初诊2型糖尿病患者筛查LADA有一定价值;联合检测IAA、GADA、IA-2A能提高LADA诊断效率.     

抗酒石酸酸性磷酸酶与骨吸收

抗酒石酸酸性磷酸酶（ＴＲＡＣＰ）是酸性磷酸酶的第５型同工酶，由破骨细胞分泌，受甲状旁腺激素和降钙素调节。它能水解各种磷酸酯，可被钼酸盐抑制和巯基化合物激活。用化学比色法和免疫分析法测定血清ＴＲＡＣＰ可了解骨骼正在发生的骨吸收状况。     

2型糖尿病患者血清与尿铜蓝蛋白水平的变化

目的：检测2型糖尿病患者血清与尿铜蓝蛋白（Cp）浓度的变化及探讨临床意义。方法：采用放射免疫法与速率散射免疫浊度法检测57份血清Cp,并采用速率散射免疫浊度法检测110例健康对照组,104例2型糖尿病患者血清Cp,尿Cp与肌酐（Cr）比值及尿白蛋白（Alb）与Cr比值。将2型糖尿病患者分为血糖控制良好组与血糖控制不良组,糖尿病肾病组与无糖尿病肾病组进行分析与比较。结果：放射免疫法与速率散射免疫浊度法检测血清Cp相关性与可比性良好;血清Cp的正常参考上限为542 mg/L（110例健康人的97.5%可信区间）,尿Cp/Cr的正常参考上限为0.892 ng/mmol（110例健康人的97.5%百分位点）;2型糖尿病患者血清Cp值显著高于健康对照组（P＜0.001）,其中血糖控制不良组血清Cp值显著高于血糖控制良好组（P＜0.01）,有糖尿病肾病组尿Cp/Cr显著高于无糖尿病肾病组（P＜0.001）;尿Cp/Cr对糖尿病肾病的诊断敏感性为91.4%,特异性为61.4%,符合率为75.0%。结论：检测血清Cp水平对于了解糖尿病的病情有一定参考价值,联合检测尿Cp/Cr与Alb/Cr对于糖尿病肾病的早期诊断有重要的临床意义。     

SOX13抗体与2型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度的关系

目的 探讨SOX13抗体(SOX13-Ab)与2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉内中膜厚度(IMT)的关系. 方法 选取248例谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)阴性的T2DM患者,检测SOX13-Ab指数等,彩色B超测量受试者颈动脉IMT及可视斑块范围.探讨SOX13-Ab指数与IMT增厚、斑块发生的相互关系. 结果 (1)IMT与发病年龄呈显著正相关,与SOX13-Ab指数呈显著负相关(P均<0.05).(2)随SOX13-Ab指数升高,IMT、内膜增厚(IMT>0.9mm)风险性及斑块阳性率渐降;SOX13-Ab最低五分位组IMT显著高于其他各分位;内膜增厚风险性显著高于4th1/5、5th1/5分位组,斑块阳性率显著高于4th1/5分位组(P均<0.05).(3)随斑块严重程度的增加,SOX13-Ab指数递减;0级组患者SOX13-Ab指数显著高于2级组(P<0.05). 结论 SOX13-Ab指数与T2DM患者IMT具有良好负相关性,可望成为判断T2DM患者发生IMT增厚及动脉粥样硬化危险性的新指标.     

SOX13抗体对酮症倾向糖尿病患者胰岛功能的影响

目的 探讨SOX13抗体(sry related HMG box 13-antibody,SOX13-Ab)对酮症倾向糖尿病(KPD)患者胰岛功能的影响,进一步确定SOX13-Ab在KPD患者中的自身免疫反应特征.方法 2005年1月至2009年11月对南京鼓楼医院内分泌科就诊的245例KPD患者[男138例,女107例,年龄33(1～80)岁]均检测SOX13-Ab、谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A),以SOX13-Ab单一阳性患者为病例组,以GAD-Ab、IA-2A单一阳性及抗体均阴性组患者为对照组,比较4组患者的胰岛功能.各组平均C肽水平采用中位数(四分位数间距)表示,经自然对数转化后进一步采用方差分析比较组间差异.结果 (1)女性患者中SOX13-Ab单一阳性、GAD-Ab单一阳性组空腹C肽(FCP)和餐后2 h C肽(PCP)水平分别为166.0(300.0)和166.5(159.3)、285.0(527.0)和231.0(502.5)pmol/L,均显著低于抗体阴性组[FCP为287.5(302.7)pmol/L、PCP为528.0(774.0)pmol/L;均P＜0.05];(2)发病年龄≤40岁或病程≤5年的KPD患者中,其FCP水平SOX13-Ab组[166.0(56.0)vs 228.0(250.0)pmol/L]、GAD-Ab单一阳性组[191.0(137.5)vs 324.0(340.0)pmol/L]均显著低于抗体阴性组[167.1(223.1)vs 324.0(340.0)pmol/L];而在病程＞5年的KPD患者中,GAD-Ab单一阳性组FCP水平为130.0(458.8)pmol/L、SOX13-Ab单一阳性组为189.5(357.7)pmol/L,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);(3)协方差分析显示SOX13-Ab单一阳性与抗体阴性组之间FCP、PCP比较差异无统计学意义(P＞0.05);而GAD-Ab/SOX13-Ab双阳性组FCP与抗体阴性组比较差异有统计学意义(P＜0.05);(4)GAD-Ab、IA-2A单一阳性组内FCP与病程均呈显著负相关(r值分别为-0.500、-0.821,P值分别为0.007、0.023),而SOX13-Ab单一阳性组内FCP与病程之间无显著负相关性(r=-0.104,P=0.606).结论 SOX13-Ab对KPD患者胰岛功能的影响弱于GAD-Ab.     

锌转运体8自身抗体对急性起病糖尿病患者分型诊断的价值

目的 探讨锌转运体8自身抗体(ZnT8A)对急性起病糖尿病患者分型诊断的价值.方法 453例急性起病糖尿病患者根据谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和酪氨酸磷酸酶抗体(IA2-A)阳性分为A+组276例(任一抗体阳性)和A-组177例(抗体皆为阴性);将555例2型糖尿病患者和405名健康者作为对照.分析ZnT8A在急性起病糖尿病患者和亚组中的分布规律、相关因素和ZnT8A阳性者的临床特征.抗体检测采用放射配体法.结果 (1)ZnT8A在急性起病糖尿病组的阳性率为24.3%,显著高于2型糖尿病组(1.8%)和健康对照组(1.0%)(均P＜0.01);而且ZnT8A在A+组中的检出率为29.7%,显著高于A-组患者15.8%(x2=11.318,P＜0.01).(2)ZnT8A阳性率在＜30岁各亚组高于≥30岁亚组(0～9岁,34.9%;10～19岁,26.7%;20～29岁,26.3%比≥30岁,18.3%;均P＜0.05);在体质指数(BMI)＜21.0 kg/m2和21.0～25.0 kg/m2亚组高于BMI＞25.0 kg/m2亚组(25.5%和25.9%比8.7%,均P＜0.05).(3)ZnT8A水平与IA2-A滴度间呈正相关(r=0.165,P=0.01).(4)3种抗体联合测定使自身免疫检出率从60.9%提高到67.1%.(5)与抗体阴性者相比,ZnT8A单独阳性者日胰岛素需要量较多[(35.5±9.3)U/d比(29.8±14.7)U/d,P＜0.05],而收缩压和舒张压均较低[(107±15)mm Hg比(113±16)mm Hg,(69±12)mm Hg比(73±12)mm Hg,均P＜0.05].结论 ZnT8A对急性起病糖尿病患者的免疫分型诊断有一定价值,在常见抗体(GADA和IA2-A)阴性者中可识别出一类更接近于经典1型糖尿病的临床表型.     

短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法的建立及其应用

目的建立短片段扩增杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分型法。方法选取330例湖南汉族健康志愿者血液标本,提取基因组DNA;合成短片段扩增KIR基因的序列特异性引物,采用PCR-SSP分型法扩增已知的16个KIR基因,分析湖南汉族人群KIR基因的频率分布特征。从330例DNA标本中随机选取100例,比较长、短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法检测基因的阳性率差异。结果①短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法可检测出所有KIR基因,扩增产物条带清晰,结果准确;②湖南汉族健康人群KIR2DL4、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR3DP1基因阳性率均为100%,KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR2DS4、KIR2DP1基因阳性率分别为96.4%、96.1%、94.2%、94.2%和99.7%,而KIR2DS1、KIR2DL5、KIR3DS1、KIR2DL2、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS5基因阳性率均40%;③长、短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法(长、短片段方法)均可检测出16个KIR基因,且KIR2DL3、KIR2DL4、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR3DP1基因的阳性率一致,但长片段方法检测其余KIR基因的阳性率均低于短片段方法,其中短片段方法检测KIR3DL1、KIR2DS1、KIR2DS4、KIR3DS1基因阳性率均明显高于长片段方法(分别为94%vs.84%、40%vs.26%、94%vs.62%、38%vs.20%,均P0.05),同时漏检和误检降低。结论短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法简单、易行、准确,具有良好的应用价值。     

双侧髋部和前臂骨密度的比较及其与体重的关系

目的　探讨双侧髋部和前臂骨密度之间的差异及其与体重的关系。方法　采用双能X线骨密度仪测量 5 5例 16～ 73(5 2± 10 )岁健康志愿者双侧髋部和前臂的骨密度。结果　双侧髋部对应区域骨密度呈高度正相关 (r =0 947～ 0 981) ,右侧骨密度均值高于左侧 (P <0 0 1) ,不同区域骨密度的平均差异为 2 %～ 3% ;双侧前臂对应区域骨密度呈高度正相关 (r =0 948～ 0 977) ,除桡骨远端1/ 3段骨密度右侧高于左侧外 (P <0 0 1) ,其余区域骨密度左右侧无差别 ;髋部除Ward区骨密度与体重无相关外 (r =0 0 35 ,P >0 0 5 ) ,其余区域骨密度与体重呈正相关 (r =0 2 88～ 0 42 8,P <0 0 5 )。前臂所有区域骨密度与体重无相关性。结论　髋部和前臂骨密度双侧呈高度正相关 ;负重区骨骼的骨密度与体重呈正相关