和厚朴酚联合吉西他滨协同抑制 Burkitt 淋巴瘤细胞增殖和促凋亡作用简

本研究旨在探讨和厚朴酚（Honokiol,HNK）与吉西他滨（Gemcitabine,GEM）联合应用对Burkitt淋巴瘤细胞株Raji细胞增殖和凋亡的影响.应用CCK-8法检测HNK和GEM单用及联合应用对Raji细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术检测两种药物诱导Raji细胞凋亡情况及细胞周期的变化;以Western blot法检测BCL-2抗凋亡蛋白水平的变化.结果表明,HNK与GEM联合后,细胞生长抑制明显高于HNK和GEM单药组（P＜0.01）,具有时间和浓度依赖性;细胞凋亡比例均较各单药组增多,差异具有统计学意义（P＜0.01）,两药联合后大部分细胞被阻滞在G0/G1期,S期细胞减少;细胞内抗凋亡蛋白BCL-2水平在联合组比在各单药组表达量下降,差异具有统计学意义（P＜0.01）.结论：HNK联合GEM具有协同抑制Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖并诱导其凋亡的作用,协同机制可能与两药联合后更多细胞发生G0/G1期阻滞,并抑制抗凋亡蛋白BCL-2的活化有关.     

供者来源CAR-T细胞治疗异基因造血干细胞移植后复发急性B淋巴细胞白血病的疗效及安全性

目的探索供者来源靶向CD19或联合靶向CD22嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)治疗异基因造血干细胞移植后复发急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的有效性及安全性。方法回顾性分析2015年9月至2022年12月在南方医科大学珠江医院及解放军联勤保障部队第九二〇医院血液科22例接受供者来源CAR-T细胞治疗的异基因造血干细胞移植后复发的B-ALL患者的有效性和安全性。主要研究终点是总生存(OS), 次要研究终点是无事件生存(EFS)、完全缓解(CR)率、3～4级不良事件。结果 CAR-T细胞输注后, 18例(81.82%)患者获得CR且微小残留病(MRD)均为阴性。中位随访1037(95%CI 546～1509)d, 中位OS期为287(95%CI 132～441)d, 中位EFS期为212(95%CI 120～303)d, 6个月OS率为67.90%(95%CI 48.30%～84.50%), 6个月EFS率为58.70%(95%CI 37.92%～79.48%), 1年OS率为41.10%(95%CI 19.15%～63.05%), 1年EFS率为34.30%(95%CI 13.92...     

硼替佐米诱导ABCG_2~(High)耐药鼻咽癌细胞高表达NKG2D配体的实验研究

目的 探讨硼替佐米诱导高表达ABCG2耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制.方法 利用免疫磁珠技术分离ABCG2High CNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经硼替佐米处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经硼替佐米处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性.结果 ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上.经硼替佐米处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(17.52±2.04)%、(12.53±3.68)%、(15.24±2.91)%、(62.02±6.85)%、(35.69±3.23)%.在效靶比为10:1、20:1、Allo-NK细胞对硼替佐米处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±13.86)%、(27.26±6.81)%及(35.06±5.10)%、(52.34±4.78)%.处理前后杀伤率差异有统计学意义(F=26.03,P=0.000).结论 硼替佐米通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强.     

用Streamline SP从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HBsAg Fab最适吸附条件的选择及验证

目的 选择阳离子交换介质Streamline SP分离纯化anti-HBsAgFab的最适吸附条件。方法试管法分别测定平衡缓冲液在不同DH和不同离子强度下,阳离子交换介质Streamline SP对预分离纯化蛋白的吸附效果。用l mlSP预装柱及自装28 ml Streamline SP柱进行离子交换层析以验证吸附效果。结果NaAc-HAc作为平衡缓冲液在pH4．4、离子强度100-600mmlo/L可以使阳离子交换介质Streamline SP与蛋白吸附达到最佳效果。在该条件下用l ml SP预装柱及自装28ml SP柱进行离子交换层析,均验证了这一吸附效果。结论试管法选择的离子交换层析的最适吸附条件用于从大肠杆菌中初步分离纯化anti-HbsAg Fab切实可行。     

含克拉屈滨的强化预处理方案在异基因造血干细胞移植治疗高危急性髓系白血病患者中的疗效和安全性分析

目的:探讨含克拉屈滨的强化预处理方案在治疗高危急性髓系白血病(AML)患者中的疗效、安全性及影响预后的危险因素。方法:回顾性分析2016年10月至2020年6月于南方医科大学珠江医院行异基因造血干细胞移植前接受克拉屈滨联合白消安及环磷酰胺(BuCy)强化预处理方案的28例高危AML患者临床资料,分析移植后累积总生存率(OS)、累积无进展生存率(PFS)、复发率、非复发死亡率(NRM)、预处理相关毒性反应(RRT)以及影响预后的危险因素。结果:移植后1年的预期累积OS和PFS分别为(78.8±8.6)%和(79.8±8.1)%,1年累积复发率和NRM分别为9.3%和22.0%。移植前MRD^-的高危患者移植后1年预期累积OS为100%,移植前复发组1年的预期累积OS和PFS分别为(46.9±18.7)%和(50.0±17.7)%。Ⅰ/Ⅱ级RRT发生率为39.3%,28例患者均未发生Ⅲ/IV级RRT。多因素分析显示,移植前复发是影响患者OS和PFS的独立不良预后因素。结论:克拉屈滨联合BuCy的强化预处理方案降低了高危AML移植后复发率,且其预处理相关毒性轻、安全性良好...     

分子靶向药物诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达

目的：探讨不同分子靶向药物对高表达与低表达ATP结合转运蛋白G超家族成员2（ATPbinding cassette superfamily G member 2,ABCG2）的人耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞（分别简写为ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP）表面NKG2D配体（natural killer group 2 member D ligands, NKG2DLs）表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的影响。方法：免疫磁珠法分选ABCG2 highCNE2/DDP、ABCG2lowCNE2/DDP细胞及NK细胞。流式细胞术检测分选细胞的纯度和不同分子靶向药物（硼替佐米、索拉非尼、舒尼替尼）处理前后ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达率。LDH释放法检测不同药物处理前后ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性。结果：ABCG2 highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞表面ABCG2的表达率分别为（91.40±2.32）%和（1.70±0.24）%。分选后NK细胞中CD3-CD16+CD56+细胞的比例达90%以上。药物处理前,ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2和ULBP3呈弱表达;经不同分子靶向药物处理后,5种NKG2DLs的表达率均明显上升(P<001),以舒尼替尼处理后NKG2DLs的表达率升高最明显。随着NKG2DLs表达的上调,ABCG2highCNE2/DDP和ABCG2lowCNE2/DDP细胞对NK细胞杀伤的敏感性也随之升高。结论：不同分子靶向药物可诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达,以舒尼替尼的诱导作用最强,且肿瘤细胞NKG2DLs的表达与其对NK细胞杀伤敏感性之间存在线性关系。     

索拉非尼联合表阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响及机制

目的探讨索拉非尼联合表阿霉素对乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响及可能机制。方法MTT法测MCF-7细胞培养1—14d的吸光度,绘制生长曲线并在第14天检测其体外克隆形成率。于24、48、72h分别测索拉非尼及表阿霉素半数抑制浓度（IC50）值。实验分为空白对照组、索拉非尼单药组、表阿霉素单药组、联合组。根据索拉非尼及表阿霉素的IC50值设定联合给药浓度及时间,用MTT法测定72h时索拉非尼及表阿霉素单用组与联合组MCF-7细胞的增殖抑制率。结果生长曲线示MCF-7细胞在1—4d生长速度较快,之后减慢,10d后生长趋于停滞。MCF-7细胞在14d的克隆形成率为37．2％。索拉非尼24、48、72h的Ic50值分别为（7．85＋0．86）、（3．45＋0．16）、（2．10＋0．64）μmol／L,表阿霉素24、48、72h的IC50值分别为（6．52＋0．62）、（1．61＋0．82）、（1．13＋0．51）μmol／L。72h时索拉非尼组MCF-7抑制率明显低于表阿霉素组,MCF-7抑制率高于其他两组（P〈0．05）,细胞抑制率随药物浓度增加而增加（P〈0．05）。结论索拉非尼联合表阿霉素对乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖有抑制作用;其机制可能是两药联用抑制或阻断了细胞增殖和生存相关因素的作用。     

自然杀伤细胞对高与低表达ABCG2的人耐药鼻咽癌细胞杀伤作用

目的:探讨自然杀伤(NK)细胞对高与低表达三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)人多药耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞(ABCG2High细胞、ABCG2Low细胞)的杀伤活性差异.方法:利用免疫磁珠技术分离ABCG2High及ABCG2LowCNE2/DDP细胞、NK细胞,LDH释放测定法检测NK细胞对K562细胞、ABCG2High<及ABCG2LowCNE2/DDP细胞的杀伤活性,流式细胞技术(FCM)检测两种靶细胞NKG2D配体表达率及杀伤后靶细胞凋亡率.结果:ABCG2High、AB-CG2Low CNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率分别为(91.40±2.32)%、(1.70 ±0.24)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,LDH释放测定法检测结果显示,在效靶比为10 vs 1、20 vs 1时,NK细胞对ABCG2Low细胞、ABCG2High细胞及K562细胞的杀伤率以ABCG2High曲细胞最高,凋亡率检测结果显示ABCG2HighCNE2/DDP细胞的凋亡率为(12.90±1.51)%,ABCG2LowCNE2/DDP细胞的凋亡相率为(6.13±0.85)%,NKG2D配体表达率检测结果显示AB.CG2High CNE2/DDP细胞5种NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达率高于ABCG2LowCNE2/DDP细胞.结论:ABCG2HighCNE2/DDP细胞比ABCG2LowCNE2/DDP细胞更容易被NK细胞杀伤,其初步的机制是ABCG2HighCNE2/DDP细胞NKG2D配体表达率高于ABCG2LowCNE2/DDP细胞,导致了ABCG2HighCNE2/DDP细胞对NK的杀伤敏感性增强.     

紫杉醇联合Herceptin或表阿霉素治疗Her-2/neu阳性乳腺癌患者的临床疗效

目的 比较Herceptin联合紫杉醇(TAX)的生物化疗组和表阿霉素(EPI)联合TAX单纯化疗组治疗Her-2/neu阳性表达的乳腺癌患者的疗效评估以及前者血清肿瘤标志物的变化及意义。方法 选择免疫组化法检查Her-2/neu为阳性的乳腺癌患者为入选对象,以32例接受Herceptin联合TAX方案治疗者为研究组,41例接受EPI联合TAX方案治疗者为对照组,分别观察上述两组病人的疗效、研究组病人Her-2/neu表达强度与疗效之间的关系及该组患者血清肿瘤标志物的变化。结果 Herceptin联合TAX治疗乳腺癌的客观有效率(RR%)、临床受益率(RR+SD%)均明显高于EPI联合TAX组;生物化疗组中,免疫组化检测结果为Her-2/neu(+)、Her-2/neu(++)、Her-2/neu(+++)的患者的临床有效率分别为0%、44.4%和63.6%;单纯化疗组分别为8.3%、36.4%和38.9%;Herceptin联合TAX方案化疗后,血清肿瘤标志物水平与化疗前比较有不同程度降低,CA153、TPS及CEA与治疗前相比有显著性差异(P<0.05),而CA125则无显著性差异(P>0.05)。结论 对于Her-2/neu阳性的晚期乳腺癌患者,Herceptin联合TAX方案组的疗效明显优于TAX联合EPI方案组,对Her-2/neu(+++)的乳腺癌患者,Herceptin联合TAX治疗的有效率高于Her-2/neu(++)的患者。肿瘤标志物CEA、TPS、CA153在判定疗效上也有一定的临床价值。     

不同遗传背景NK细胞对转化细胞的杀伤效应

目的:细胞免疫治疗的着眼点不仅是杀伤局部异常生长的肿瘤细胞,还要应对潜在转化细胞的影响,为此观察3种不同遗传背景NK细胞对转化细胞杀伤效应的差异.方法:实验于2007-03/09在南方医科大学珠江医院血液科完成.①材料:SPF级8～10周龄的C57BL/6(H-2b)小鼠10只、Balb/C(H-2d)d,鼠10只、Balb/C(H-2d)×C57BL/6(H-2b)杂交F1代(H-2d/b)小鼠10只,均购于南方医科大学实验动物中心,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.YAC-1细胞株由本室冻存;C57BL/6鼠源性红白血病细胞株FBL-3由周健博士惠赠.②实验方法:脱臼处死3种不同遗传背景小鼠,无菌取脾,密度梯度离心法常规分离脾单个核细胞,免疫磁珠细胞阳性分选得到3种不同遗传背景小鼠的NK细胞,即全相合C57BL/6组、不相合Balb/C组、半相合F1代组,以其作为效应细胞.将培养至对数生长期的YAC-1、FBL-3细胞株以及ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞作为靶细胞.相对于靶细胞,不相合Balb/C组与半相合F1代组为同种异体反应性NK细胞,全相合C57BL/6组为自体NK细胞.③实验评估:通过流式细胞术检测CD49b 的表达鉴定NK细胞纯度.调整靶细胞YAC-1密度为2×108 L-1,按效靶比5:1,10:1,20:1,40:1以乳酸脱氧酶释放法测定NK细胞的杀伤活性.调整靶细胞FBL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞密度均为2×108 L-1,按效靶比20:1,40:1同法测定NK细胞的杀伤活性.结果:①NK细胞的纯度鉴定:CIM9b 细胞率全相合C57BL/6组为(90.93±2.46)%,不相合Balb/C组为(89.50 1.04)%,半相合F1代组为(91.93±2.01)%,分选所得NK细胞的纯度满足实验要求.②NK细胞对YAC-1细胞的杀伤活性:3组NK细胞的杀伤活性均随效靶比5:1,10:1,20:1.40:1的升高而增强:同一效靶比时3组NK细胞对YAC-1的杀伤活性差异无显著性意义(F=0.557.P=0.600.F=0.550,P=0.604:F=0.503,P=0.628.F=0.946,P=0.439)③NK细胞对FBL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞的杀伤效应:效靶比为20:1,40:1时,半相合F1代组与不相合Balb/C组对FBIL-3和ConA刺激的C57BL/6小鼠脾细胞的杀伤效应均明显高于全相合C57BL/6组(P均=0.000).结论:NK细胞的遗传背景能够影响其对靶细胞的杀伤活性,同种异体反应性NK细胞的杀伤效应强于自体NK细胞,为NK细胞介导的细胞免疫治疗提供实验依据.