硼替佐米诱导ABCG2 High耐药鼻咽癌细胞高 表达N KG2D 配体的实验研究

 目的　探讨硼替佐米诱导高表达ABCG2 耐药鼻咽癌细胞对Allo2N K细胞杀伤敏感性的机制。 方法　利用免疫磁珠技术分离ABCG2 High CNE2/ DDP 细胞及Allo2N K细胞,流式细胞技术检测分离后 细胞纯度及经硼替佐米处理前后靶细胞N KG2D 配体表达率,LDH 释放测定法检测经硼替佐米处理前 后ABCG2 HighCNE2/ DDP 细胞对Allo2N K细胞的杀伤敏感性。结果　ABCG2 High CNE2/ DDP 细胞分离 后ABCG2 表达率为(91. 40 ±2. 32) % ,分选后N K 细胞CD3 - CD16 + CD56 + 细胞的纯度达90 %以上。 经硼替佐米处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1 、ULBP2 、ULBP3 表达率,由药物处理之前的(2. 92 ± 0. 33) %、(4. 27 ±0. 33) %、(5. 80 ±0. 62) %、(11. 10 ±3. 15) %、(7. 75 ±1. 14) %分别上升到(17. 52 ± 2. 04) %、(12. 53 ±3. 68) %、(15. 24 ±2. 91) %、(62. 02 ±6. 85) %、(35. 69 ±3. 23) %。在效靶比为10∶1 、 20∶1 、Allo2N K 细胞对硼替佐米处理前后ABCG2 High CNE2/ DDP 细胞的杀伤率分别为( 15. 32 ± 13. 86) %、(27. 26 ±6. 81) %及(35. 06 ±5. 10 ) %、( 52. 34 ±4. 78 ) %。处理 前后杀伤率差异有统计学意义( F = 26. 03 , P = 0. 000) 。结论　硼替佐米 通过诱导肿瘤细胞高表达N KG2D 配 体(MICA/ B、ULBP123) ,使肿瘤细胞 对Allo2N K细胞的杀伤敏感性增强。     

多靶点酪氨酸激酶抑制剂联合NK细胞的抗肝癌作用及其分子机制

目前,针对晚期肝癌无标准和令人满意的治疗方法。多靶点酪氨酸激酶抑制剂（multi-target tyrosine kinase inhibitor,MTKI）联合NK细胞对肝癌细胞具有协同杀伤作用：一方面,MTKI能阻断肿瘤细胞增殖和血管生成信号通路促进细胞凋亡;另一方面,MTKI诱导肿瘤细胞表达NK细胞活化性配体（natural killer group 2 member D ligand,NKG2DL）,促进肿瘤细胞对NK细胞杀伤的敏感性。MTKI诱导肿瘤细胞表达NKG2DL,主要通过DNA损伤修复反应分子和细胞凋亡通路与转录因子NF-κB（nuclear factor-κB)之间相互作用,活化由NF-κB2和RelB组成的旁路途径调节NKG2DL的转录和表达。MTKI通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤表达NKG2DL的分子机制为MTKI联合NK细胞治疗肝细胞癌提供了理论依据。     

自体造血干细胞移植联合异体细胞因子诱导的杀伤细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病2例

背景：自体造血干细胞移植治疗高危急性髓系白血病的复发率极高,如何降低移植后复发率至今仍是难点。目的：观察自体造血干细胞移植联合异体细胞因子活化杀伤（CIK）细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病的临床效果。方法：2例高危急性髓系白血病患者,经诱导化疗及巩固强化治疗后,在第1次缓解期行自体造血干细胞移植,移植后1个月给予三四疗程异体CIK细胞输注,每隔半年1个疗程,每疗程分5次输注异体CIK细胞,每隔1日输注1次。每次输注CIK细胞前半小时内给予皮下注射白细胞介素2,第1次输注后隔日皮下注射白细胞介素2,半年后减为隔2日1次,1年后减为隔3日1次,1年半后减为1次/周,维持半年后结束,预防白血病复发。结果与结论：2例患者自体造血干细胞移植后输注异体CIK细胞及皮下注射白细胞介素2无发热、寒战、皮疹等不良反应,无骨髓抑制及移植物抗宿主反应,治疗安全。2例患者持续缓解时间分别为20个月及2年,目前仍无复发。首次得出对于无合适供者的高危急性髓系白血病患者,在缓解后可行自体造血干细胞移植联合异体CIK细胞及白细胞介素2治疗,有机会获得长期无病生存。     

舒尼替尼诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞表达NKG2DLs的机制

目的：初步探讨舒尼替尼诱导高、低表达ABCG2(ATPbinding cassette superfamily G member 2)分子的耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞（简称ABCG2highCNE2/DDP细胞、ABCG2lowCNE2/DDP细胞）中NKG2D配体（natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs）表达的分子机制。方法：Caspase8活化试剂盒和线粒体膜电位法分别检测NK细胞处理后ABCG2highCNE2/DDP细胞和ABCG2lowCNE2/DDP细胞caspase8活化水平和线粒体膜电位。RTPCR检测舒尼替尼处理前后两种CNE2/DDP细胞DNA损伤修复系统相关信号分子mRNA的表达。结果：CNE2/DDP细胞+NK细胞组中两种CNE2/DDP细胞caspase8活性均明显增强;舒尼替尼处理后的ABCG2low CNE2/DDP细胞+NK细胞组和ABCG2highCNE2/DDP细胞＋NK细胞组中caspase8的活性是处理前的2～2.5倍（P<0.01）。舒尼替尼预处理后,CNE2/DDP细胞和NK细胞共培养体系中两种CNE2/DDP细胞的线粒体膜电位分别为(76.58±2.32)%和(73.11±1.93)%,较舒尼替尼处理前明显降低（P<0.05）。舒尼替尼可上调两种CNE2/DDP细胞中ATR、CHK1和CHK2 mRNA的表达,并诱导P53和NFκB mRNA的表达。结论：舒尼替尼可能通过激活DNA损伤修复系统相关信号分子和NFκB的表达,诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达,同时经由死亡受体信号通路和线粒体信号通路增强NK细胞诱导的肿瘤细胞凋亡。     

类肝素酶在胃癌组织中的表达及其临床价值

目的：研究胃癌组织中类肝素酶（Ｈｅｐａｒａｎａｓｅ,ＨＰＳＥ）的表达与临床病理特征及生存期的关系,探讨其作为胃癌预后指标的可行性。方法：应用免疫组化方法检测具有随访资料的１０３例胃腺癌标本中ＨＰＳＥ的表达,并将检测结果与临床病理特征进行综合分析。结果：（１）１０３例胃癌组织中ＨＰＳＥ的阳性表达率为５７.３％（５９／１０３）,在胃正常组织中均无表达;（２）ＨＰＳＥ的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小、部位和分化程度均无相关性（Ｐ＞０.０５）,而与肿瘤的浸润深度、临床分期、淋巴结转移和远处转移相关（Ｐ＜０.０５）;（３）ＨＰＳＥ阳性表达患者中位生存时间为１１.０个月,阴性表达患者中位生存时间为７０.０个月（Ｐ＜００５）。结论：测定胃癌组织中ＨＰＳＥ的表达,有助于临床胃癌患者的诊断以及预后判断。     

IL-2体外诱导健康人外周血T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的研究

目的 研究IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移的影响.方法 分离健康志愿者外周血T细胞,加入IL-2,常规体外培养,乳酸脱氢酶释放法检测其非特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术,分析其CDR3长度以判断T细胞的克隆性.结果 3例健康志愿者外周血T细胞对鼻咽癌细胞系CNE2没有杀伤作用;PBMC的TCR Vβ CDR3谱型均呈高斯分布,经IL-2体外培养后部分家族出现不同的优势表达.结论 IL-2对体外培养的T细胞TCRβ链CDR3谱系漂移有一定影响,对其非特异性杀伤无影响.     

去甲斑蝥素联合IL-12、IL-15处理增强PBMC对Raja细胞的杀伤效应【创新点评：中药抗癌药物去甲斑蝥素增强PBMC对淋巴瘤的杀伤－郑胡镛】

目的:探讨细胞因子IL-2、IL-15激活的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)对去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)处理后的人Burkitt淋巴瘤Raji细胞的杀伤效应及其可能机制.方法:锥虫蓝拒染法检测NCTD对Raji细胞和PBMC细胞增殖的影响;LDH释放法检测IL-2、IL-15激活后的PBMC对K562细胞和Raji细胞的杀伤;流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测IL-2、IL-15诱导后PBMC表面NKG2D的表达,以及NCTD作用前后Raji细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)的表达.结果:NCTD抑制Raji细胞的增殖,具有剂量、时间依赖性(P＜0.05),但对PBMC增殖无影响(P＞0.05).在效靶比为10∶1、20∶1时,IL-2、IL-15激活的PBMC对K562细胞的杀伤率较未激活的PBMC明显增高[(52.42±3.89)％vs (15.82±5.12)％,(79.55±9.22)％vs(27.67±3.66)％,P＜0.05];PBMC对NCTD处理后Raji细胞杀伤率较未经NCTD处理的Raji细胞明显增高[(23.63±6.20)％vs (5.04±1.25)％,(41.80±4.09)％ vs (8.59±2.19)％;P＜0.05],且IL-2、IL-15激活的PBMC对NCTD处理后Raji细胞的杀伤率较NCTD处理前明显提高[(38.97±2.76)％ vs(13.19±3.67)％,(63.09 ±7.30)％ vs(19.89 ±4.15)％;P＜0.05].激活后PBMC表面NKG2D表达率升高[(44.91±5.85)％vs (25.28±7.69)％,P＜0.05].NCTD作用后Raji细胞表面NKG2D的配体ULBP2表达显著升高[(12.69±3.99)％vs(1.03 ±0.42)％,P＜0.05],而其他配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP3的表达无明显变化(P＞0.05).结论:NCTD联合细胞因子IL-2、IL-15处理能增强PBMC对Raji细胞的杀伤效应,其机制与NCTD上调Raji细胞表面ULBP2表达和细胞因子上调PBMC表面NKG2D表达有关.     

siRNA干扰NF-кB家族成员表达抑制人肝癌HepG2细胞表达NKG2DLs

目的：探讨舒尼替尼诱导人肝癌HepG2细胞表达的自然杀伤细胞2族成员D配体（natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs）与核因子kappa B（nuclear factor B kappa, NF-κB）信号通路之间的相互作用。方法：常规体外培养HepG2细胞,利用实时荧光定量PCR检测1 μmol/L舒尼替尼处理HepG2细胞24 h前后NF-κB基因家族成员 mRNA的表达情况,利用计算机辅助设计并合成NF-κB1、NF-κB2和RelB siRNA引物,通过脂质体法将目的基因siRNA转染于HepG2细胞,荧光显微镜观察转染情况,实时荧光定量PCR检测干扰效率,Western blotting检测siRNA转染前后HeG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达,流式细胞术检测siRNA前后HepG2细胞NKG2DLs表达率。结果： 实时荧光定量PCR结果显示,舒尼替尼处理HepG2细胞后,NF-κB1、NF-κB2和RelB mRNA表达水平升高,主要以NF-κB2 mRNA和RelB mRNA升高为主。荧光显微镜观测siRNA转染后HepG2细胞红色荧光表达率约为60%,干扰效率达95%以上。siRNA转染后HepG2细胞内NF-κB1、NF-κB2和RelB蛋白表达水平明显下降,siRNA转染+药物组NKG2DLs表达率明显低于药物处理组（P<0.05）。结论： 首次揭示了舒尼替尼通过NF-κB旁路途径诱导肿瘤细胞表达NKG2DLs。     

自体造血干细胞移植联合异体细胞因子诱导的杀伤细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病2例*

背景：自体造血干细胞移植治疗高危急性髓系白血病的复发率极高,如何降低移植后复发率至今仍是难点。 目的：观察自体造血干细胞移植联合异体细胞因子活化杀伤(CIK)细胞及白细胞介素2治疗高危急性髓系白血病的临床效果。 方法：2例高危急性髓系白血病患者,经诱导化疗及巩固强化治疗后,在第1次缓解期行自体造血干细胞移植, 移植后1个月给予三四疗程异体CIK细胞输注,每隔半年1个疗程,每疗程分5次输注异体CIK细胞,每隔1日输注1次。每次输注CIK细胞前半小时内给予皮下注射白细胞介素2,第1次输注后隔日皮下注射白细胞介素2,半年后减为隔2日1次,1年后减为隔3日1次,1年半后减为1次/周,维持半年后结束,预防白血病复发。 结果与结论：2例患者自体造血干细胞移植后输注异体CIK细胞及皮下注射白细胞介素2无发热、寒战、皮疹等不良反应,无骨髓抑制及移植物抗宿主反应,治疗安全。2例患者持续缓解时间分别为20个月及2年,目前仍无复发。首次得出对于无合适供者的高危急性髓系白血病患者,在缓解后可行自体造血干细胞移植联合异体CIK细胞及白细胞介素2治疗,有机会获得长期无病生存。