神经生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞在糖尿病大鼠膀胱中的生长及表达

目的 将转入神经生长因子(NGF)的大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)移植于糖尿病大鼠膀胱平滑肌组织内,观察MSC在膀胱组织内的存活和NGF基因的表达情况.方法 糖尿病组(30只)大鼠按链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg行单次腹腔注射,对照组(15只)腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液.实验分组:对照组(正常大鼠膀胱)、发病组(糖尿病大鼠膀胱)、治疗组(糖尿病大鼠膀胱内移植转染NGF基因的MSC).溴苷法示踪NGF基因修饰的MSC在大鼠膀胱内的存活情况;RTPCR、ELISA法检测NGF基因在糖尿病大鼠膀胱内的表达情况.结果 单次腹腔注射STZ造模成功,8周后血糖仍处高位.NGF基因修饰的大鼠MSC移植入糖尿病大鼠膀胱内4周仍存活.ELISA检测结果显示对照组、发病组、治疗组大鼠膀胱NGF蛋白含量分别为(114±3)、(70±2)、(110±2)pg/ml,RT-PCR检测mRNA表达量分别为0.183±0.004、0.032±0.139、0.130±0.165.发病组与对照组相比NGF表达下降(P＜0.05),治疗组与发病组相比NGF表达上升(P＜0.05).结论转入NGF基因的大鼠MSC能在糖尿病大鼠膀胱中存活并稳定表达.

Abstract：

Objective To confirm that rat bone marrow mesenchymal stem cells (MSC) transfected with nerve growth factor (NGF) gene in the bladder tissue of diabetic rats bladder tissues can survive and stably express NGF. Methods A diabetic rat model was constructed. The BrdU-labelled MSC transfected with NGF gene were transplanted into the diabetic rats bladder tissues. BrdUlabelled immunohistochemistry was used to observe the growth of MSC transfected with NGF gene in the diabetic rats bladder tissues. The expression of NGF mRNA and protein were checked by RT-PCR and ELISA. Results A diabetic rat model was successfully built by a single intraperitoneal injectionof STZ. The blood glucose was still high after 8 weeks. NGF gene modified MSC could be detected in the bladder of diabetic rats by BrdU-labelled immunohistochemistry. The concentration of NGF in the control group, disease group and treatment group were ( 114 ± 3), ( 70 ± 2), ( 110 ± 2) pg/ml by ELISA and mRNA quantity by RT-PCR were 0. 183±0. 004, 0. 032±0. 139, 0. 130±0. 165, respectively. Compared with the control group, the expression of NGF gene was decreased (P＜0. 05) in the incidence group. The expression of NGF gene was increased (P＜0. 05) in the treatment group compared with the disease group. Conclusions The NGF gene-modified MSC could survive in diabetic rats bladder tissues. The NGF gene in MSC could stably express in diabetic rats bladder tissues.     

肾透明细胞癌组织中B7-H1的表达及其与预后的关系

目的探讨B7-H1在肾透明细胞癌组织中的表达及其与预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测132例肾透明细胞癌患者术后肿瘤标本中B7-H1的表达,单因素及多因素分析B7-H1的表达与预后的关系。结果 132例患者中,B7-H1阳性46例（34.85%）,其中无瘤生存26例,复发6例,死亡14例,至最后随访期限,疾病无进展生存期（PFS）为（32.29±12.56）个月,总生存期（OS）为（27.08±15.43）个月;阴性86例（65.15%）,其中无瘤生存79例,复发3例,死亡4例,PFS为（38.77±20.00）个月,OS为（37.02±20.00）个月,两者比较差异有统计学意义（P〈0.05）。单因素分析表明,B7-H1阳性表达与肿瘤大小、原发肿瘤分期、区域淋巴结转移、远处转移、临床分期、组织学分级呈显著正相关（均P〈0.05）,而与患者年龄、性别无相关性。多因素分析表明,在控制肿瘤大小、TNM分期、临床分期、组织学分级的影响后,B7-H1阳性表达具有更高的肿瘤特异性死亡率[危险因素（RR）3.918,95%可信区间（95%CI）1.305～11.765,P〈0.05]和复发率[RR4.486,95%CI1.404～14.333,P〈0.05]。结论 B7-H1阳性表达与肾透明细胞癌患者术后死亡率及复发率呈正相关,B7-H1是肾透明细胞癌的一个独立预后因素。     

双氢克尿噻联合坦索罗新治疗老年BPH/LUTS患者夜尿增多

目的探讨双氢克尿噻联合坦索罗新治疗前列腺增生/下尿路症状(BPH/LUTS)患者夜尿增多的疗效。方法将82例BPH/LUTS夜尿增多患者分为两组,一组患者给予坦索罗新(0.2mg/d),另一组患者给予双氢克尿噻(睡前8h25mg)联合坦索罗新,两组患者分别治疗6周后,记录患者尿量、QOL评分、IPSS评分。结果双氢克尿噻联合坦索罗新组与单用坦索罗新组比较,夜尿次数、夜间尿量明显减少(P0.001),白天尿量增加(P0.001),IPSS、QOL评分改善更明显(P0.001),而总尿量两组差异无统计学意义(P0.05)。结论双氢克尿噻联合坦索罗新治疗BPH/LUTS患者夜尿增多有明显疗效。     

中心静脉置管在儿童重症监护室中的应用

目的 总结儿童重症监护室危重患儿抢救治疗时中心静脉置管的临床应用情况.方法 对儿童重症监护室2013年4月至9月共69例行中心静脉置管术的危重症患儿的临床资料进行回顾性分析,总结危重症患儿颈内静脉置管、股静脉置管、经锁骨下静脉置管的临床应用情况,并对不同置管途径相关并发症进行比较.结果 股静脉置管构成比最高,占总穿刺例数的60.9％;颈内静脉置管构成比其次,占总穿刺例数的34.7％;经锁骨下静脉置管应用较少,仅占总穿刺例数的4.3％.中心静脉置管并发症发生率为13％,其中经颈内静脉置管占总发生率的33.3％,股静脉置管占总发生率66.7％,两者差异比较无统计学意义(x2=0.41,P＞0.05).三种不同置管方式均无严重并发症发生.结论 中心静脉置管术在儿童重症监护室及危重患儿抢救中可安全、广泛的应用.     

骶神经电刺激与辣椒辣素类似物联合治疗特发性女性膀胱过度活动症

目的分析骶神经电刺激与辣椒辣素类似物（RTX）联合治疗女性特发性膀胱过度活动症（IOAB）的疗效。方法将32例女性IOAB患者采用经皮穿刺电刺激骶3神经及100nmol／LRTX溶液100ml膀胱灌注治疗3个月，观察治疗前后排尿日记及尿动力学参数，并通过治疗前后抑郁与焦虑的心理评分来分析患者的生活质量有无改善。结果治疗前后排尿日记及尿动力学参数比较，差异有统计学意义（P〈O．01）。比较治疗前后抑郁与焦虑的心理评分差异有统计学意义（P〈0．01）。结论骶神经电刺激与辣椒辣素类似物（RTX）联合治疗可改善女性IOAB患者的排尿功能障碍，可明显改善生活质量。     

两种方法治疗特发性膀胱过度活动症的比较

目的比较电刺激骶神经与托特罗定治疗女性特发性膀胱过度活动症(IOAB)的疗效。方法将40例女性IOAB患者随机分为A,B两组,A组采用经皮穿刺电刺激骶3神经治疗,B组口服托特罗定2mg,1次/d。治疗3个月,比较两组治疗前后排尿日记及尿动力学参数、抑郁与焦虑的心理评分。结果治疗前后排尿日记及尿动力学参数比较,两组差异具有统计学意义(P<0.01)。治疗前后两组抑郁与焦虑的心理评分A组差异具有统计学意义(P<0.01),B组差异无统计学意义(P>0.05)。结论骶神经电刺激与托特罗定均可改善女性IOAB患者的排尿功能障碍,但骶神经电刺激无副作用,改善生活质量较明显。     

乳腺癌保乳手术切缘安全范围的分子病理学研究

目的通过检测肿瘤周边浸润及周围组织的癌变规律,找出病理检查难以发现的隐性癌灶范围,为临床医生决策保乳手术切除边缘得出依据。方法各手术部位切除标本分别行HE染色、分子生物学检测和免疫组化。结果癌旁1cm及2cm处阳性因素比例高于3cm处(P0.05),lcm与2cm处之间差异无统计学意义(P0.05)。结论原发性乳腺癌C-erbB-2扩增和P53突变患者行保乳手术应扩大切除范围2cm,以减少局部复发的危险。     

如何处理分析不同类型的查新课题

通过对本单位近三年查新工作的回顾以及对查新课题数量的统计分析,提出对不同查新目的不同学科专业的查新课题的处理方法,并指出为保证和提高查新质量应采取的措施。     

连翘酯苷对顺铂耳毒性防护作用的实验研究

目的观察连翘酯苷对顺铂耳毒性的防护作用并探讨其机制。方法将42只听力正常豚鼠随机分为空白组(10只):腹腔注射生理盐水8.0 ml·kg-1·d-1,连续8天;顺铂组(16只):腹腔注射顺铂2.0 mg·kg-1·d-1,连续8天;拮抗组(16只):前2天腹腔注射连翘酯苷25.0 mg·kg-1·d-1,第3天起腹腔注射连翘酯苷后30 min,再腹腔注射顺铂2.0 mg·kg-1·d-1,连续8天。每组豚鼠首次用药前及末次用药后第二天均行ABR检测,末次检测完毕后,心脏穿刺采血检测血清总超氧化物歧化酶(total superoxide disumutase,T-SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,最后断头处死并取耳蜗,行硝酸银染色全耳蜗铺片、耳蜗组织切片和扫描电镜观察。结果空白组、顺铂组、拮抗组用药后ABR阈值分别为7.57±4.59、41.65±6.56、30.63±5.02 dB nHL;血清T-SOD活性分别为186.18±23.46、82.61±36.12、123.53±30.76 U/ml;MDA含量分别为4.14±0.79、10.69±1.21、7.85±0.97 nmol/ml。拮抗组ABR阈值低于顺铂组(P<0.05),顺铂组血清中T-SOD活性最低,而MDA含量最高,差异有统计学意义(P<0.5)。顺铂组耳蜗外毛细胞缺失明显,平均缺失率为53.42%,毛细胞结构紊乱,血管纹紊乱、螺旋神经节细胞数减少,而拮抗组这些损害明显减轻。结论连翘酯苷在一定程度上可以防护顺铂所致的耳蜗损伤,机制可能与其清除耳蜗组织氧自由基、减少氧化应激反应有关。     

全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及其诱导分化

背景:骨髓中的间充质干细胞含量极少,每1×104～1×105个单核细胞中约有1个骨髓间充质干细胞,需要在体外分离、纯化、扩增后才能满足体内移植要求.目的:观察体外分离培养的骨髓间充质干细胞生物学特性及多向分化潜能.设计、时间及地点;细胞学体外观察,于2007-10/2008-12在福建医科大学附属协和医院泌尿外科研究室完成.材料:清洁级雄性近交系SD大鼠30只,由上海斯莱克实验动物有限公司提供.方法:通过全骨髓贴壁法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,待细胞融合至80%～90%胰蛋白酶消化传代.取传至第3代细胞,分别向成骨、成脂方向诱导分化.主要观察指标:倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测其表面标记,茜素红染色检测其成骨能力,油红O染色检测其成脂能力.结果:原代及传代的骨髓间充质干细胞均呈长梭形成纤维细胞样,连续传代10代以上,细胞始终保持旺盛的生长及扩增能力.第3代骨髓间充质干细胞CD90,CD44,CDl06均呈阳性表达,而CD34,CD45,CD11b呈阴性.成骨诱导21 d后,可见大量橘红色矿化结节形成.成脂诱导2周后,可见细胞的胞浆内出现大量红染脂滴. 结论:全骨髓贴壁培养法可大量分离纯化、扩增骨髓间充质干细胞,所获细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能.