人延伸体复合物Elp3亚基表达及功能研究

目的将人延伸体复合物(elongator)的中心亚基elp3(elongtor complexprotein3)基因导入293T细胞,观察它对293T细胞生长特性以及基因转录活性的影响。方法用脂质体将pFlAGCMV4-Elp3真核表达载体导入293T细胞,通过G418持续筛选阳性克隆,建立elp3的稳定表达细胞株。通过RT-PCR、免疫荧光法检测外源性elp3基因的表达。MTT法测定细胞生长曲线、流式细胞仪法测定细胞周期及凋亡情况。瞬时转染不同组合的质粒后,收集细胞用荧光素酶报告基因法检测转染前后荧光素酶活性的变化。结果Elp3可以抑制293T细胞生长,并使细胞出现G1期阻滞,未引起293T细胞凋亡。elp3能激活转录,但作用较弱。elp4也可激活转录,过量表达elp3基因与elp4基因时,可明显激活转录,说明两者有协同激活转录作用。Elp3与转录因子TFⅡF亚基RAP30基因过量表达时,两者也可协同激活转录。结论Elp3对293T细胞的生长有明显抑制作用,可诱导G1期细胞阻滞,具有转录激活功能,并可分别与Elp4亚基、RAP30亚基协同激活转录。     

RMP与肝细胞癌的发生发展

<正>肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界第六大常见癌症,也是第三大致死的癌症疾病[1],发病率高,发病机制不明确,复发转移早,疗效差,危害大。但是目前世界上相关的治疗手段匮乏,而且治疗效果并不显著。RPB5结合蛋白(RPB5melliating protein,RMP),又名URI,作为一种细胞 更多还原     

RPB5介导蛋白与HBx蛋白共表达对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的通过乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)与RPB5介导蛋白(RMP)在肝癌Hep G2细胞中的共表达,探索RMP与HBx对肝癌细胞凋亡的影响。方法脂质体介导瞬时转染细胞;实时荧光定量RT-PCR和western blot分别检测RMP与HBx在肝癌Hep G2细胞中的表达量;流式细胞仪检测细胞凋亡率;逆转录PCR检测细胞凋亡相关基因Bax、Caspase3、P53、Bcl-2 mRNA相对表达水平,western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与未经任何处理的Hep G2细胞比较,转染RMP质粒的稳定表达HBx的Hep G2细胞中RMP、HBx在基因及蛋白质水平表达均显著升高(P0.01);细胞凋亡率显著降低;促凋亡基因Bax、Caspase3和P53 mRNA相对表达水平均显著下调(P0.01),凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA相对表达水平显著上调(P0.01);促凋亡蛋白Bax表达量明显降低,抗凋亡蛋白Bcl-2表达量明显升高。结论 RMP与HBx共表达可降低肝癌Hep G2细胞凋亡率,提示RMP和HBx可能在肝癌发生和发展过程中起着重要的作用。     

DNA连接酶Ⅰ、Bloom氏综合征与癌症

染色体不稳定综合征是易感白血病和癌症的单基因病,这类综合征包括着色性干皮病,范可尼氏贫血、毛细血管扩张症和Bloom氏综合征等。这类疾病均为染色体隐性遗传,其基因的杂合携带者较为常见,如能检测出任何一种这类疾病的主要生化异常,就相当于发现了一个癌基因。导致染色体不稳定综合征的这种基因易感恶性肿瘤。 1987年1月22日,Nature刊登了两篇有关Bloom氏综合征生化基础的文章。这两篇文章提供了一个重要信息:Bloom氏综合征患者的DNA连接酶Ⅰ失活。DNA连接酶Ⅰ是DNA半保留复制过程中唯一能催化DNA片段以钝性未端连接的酶。     

子宫平滑肌瘤和平滑肌肉瘤的10q22重排

过去长期存在一种观点,即良性肿瘤具有正常染色体组成。现在这观念已得到纠正。良性肿瘤的细胞遗传学研究表明染色体异常并不是恶性表型,与恶性转化的潜能增高也不相关。很多报道揭示一些良性肿瘤具有恒定的异常核型和特殊改变,如脑膜瘤,多形性腺瘤,脂肪瘤及近来发现的平滑肌瘤。然而一些脂肪瘤和平滑肌瘤的染色体畸     

血清α-L一岩藻糖苷酶在诊断原发性肝癌中的临床应用

目的研究血清α－L一岩藻糖着酶（AFU）对原发性肝癌的诊断意义。方法分别测定76例原发性肝癌、57例肝硬化、112例非肝脏恶性肿瘤及80例正常对照者的血清AFU;对76例原发性肝癌还同时测定血清甲脂蛋白（AFP）;对18例手术后患者随访测定AFU。结果原发性肝癌血清AFU活性显著高于其它各组。血清AFU和AFP对原发性肝癌的诊断敏感性分别为80．3％和76．3％,联合检测AFU和AFP的诊断敏感性提高到92．1％。原发性肝癌手术切除癌肿后血清AFU活性明显下降,复发时可再度升高。结论血清AFU对原发性肝癌的诊断和复发监测有重要价值。     

RMP在γ射线诱导的肝癌细胞凋亡中的表达

目的研究RPB5调节蛋白RMP在γ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达,探讨RMP在细胞凋亡及维系细胞DNA稳定性中的作用。方法不同剂量60Coγ射线照射SMMC-7721肝癌细胞和HL-7702正常肝细胞,观察细胞形态变化;PI染色观察细胞凋亡;流式细胞技术检测肝癌细胞周期变化及细胞凋亡;半定量RT-PCR法检测RMP基因在肝癌细胞及正常肝细胞中的表达以及凋亡相关基因bax、bcl-2在肝癌细胞中的表达。结果随着照射剂量增加,肝癌细胞形态发生明显改变;PI染色观察细胞凋亡增多;流式细胞仪检测结果显示随着照射剂量增加,细胞凋亡明显增多,差异有统计学意义（P〈0.05）,细胞周期G1期增高,而S期降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;RMP基因相对表达量增加,bax/bcl-2增加,与未照射组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论γ射线照射可诱导人肝癌细胞凋亡,RMP基因可能在提高细胞DNA稳定性中起重要作用。     

医学研究生分子生物学教学体会

分子生物学是在分子水平上研究生物的分子结构、分子间相互作用,分子和细胞、组织、器官及机体功能的科学,是生命科学在发展的过程中产生的一门新兴学科[1]。自2O世纪5O年代随着生物技术、重组DNA技术的建立,分子生物学已渗透到生命科学的各个领域,完全改变了生命科学的面貌,并