人骨骼肌TnI-fast基因克隆和体外表达

目的：构建人骨骼肌TnI-fast基因分泌型真核表达载体，为利用TnI-fast基因进行抗肿瘤血管生成基因治疗奠定基础。方法：采用PCR和RT－PCR制备TnI-fast cDNA，构建TnI-fast基因克隆质粒，测序证实后将TnI-fast cDNA插入到pSecTag2B构建分泌型重组真核表达质粒。然后用TnI-fast基因重组表达质粒转染COS－1细胞，检测TnI-fast基因体外表达。结果：DNA测序证实，我们从人骨骼肌总RNA和cDNA文库中扩增的TnI-fas cDNA序列与NCBIGenebank TnI-fast cDNA序列完全一致。ELISA检测证实，TnI-fast/pSec Tag2 B转染后目的基因可在真核细胞中分泌表达。结论：本研究成功地构建了TnI-fast基因重组表达质粒，可进一步用于抗肿瘤血管生成基因治疗动物实验。     

舒林酸对结肠腺癌HT-29细胞增殖调控的实验研究

目的 观察舒林酸对结肠腺癌ＨＴ－２９细胞增殖的影响,探讨其作用机制。方法 采用ＭＴＴ比色法观察舒林酸对ＨＴ－２９细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测舒林酸对ＨＴ－２９细胞周期的影响,同时结合ＤＮＡ电泳和透射电镜观察舒林酸对ＨＴ－２９细胞有无促凋亡作用。结果 舒林酸可抑制ＨＴ－２９细胞增殖,使Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增高,Ｓ期比例降低,７２ｈ后,ＨＴ－２９细胞凋亡分别上升至１２．５＾、１５．４＾和２４．２     

P27蛋白在牙源性肿瘤的表达

采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法检测４０例牙源性肿瘤中Ｐ２７蛋白表达情况。结果显示：不同类型牙源性肿瘤中有不同表达,良性肿瘤组表达率为３０．０％（６／２０）,恶性肿瘤组为８５．０％（１７／２０）,良恶性肿瘤组之间差异显著（Ｐ＜０．００５）。提示Ｐ２７蛋白可能成为牙源性肿瘤有一定辅助诊断价值的标记物     

豆蔻酰佛波醇乙酯与γ-干扰素协同诱导肿瘤细胞B7-1表达的临床研究

目的探讨豆蔻酰佛波醇乙酯（ＰＭＡ）和γ干扰素（γＩＦＮ）在卵巢癌及其他肿瘤治疗中的意义。方法用ＰＭＡ＋γＩＦＮ处理的卵巢癌细胞及其他肿瘤细胞用流式细胞仪检测免疫球蛋白超家族糖蛋白的共刺激分子Ｂ７－１、主要组织相容抗原（ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ）的表达情况。并采用５１铬（５１Ｃｒ）４小时释放试验及［３Ｈ］胸腺嘧啶渗入法了解Ｂ７－１的表达对细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）杀伤活性和对Ｔ淋巴细胞增殖的诱导情况。结果预先用ＰＭＡ处理,后用γＩＦＮ处理的肿瘤细胞,能诱导Ｂ７－１表达阳性的伯基特淋巴瘤细胞株或转染Ｂ７－１基因的卵巢粘液性囊腺癌细胞的Ｂ７－１表达增强,能诱导无Ｂ７－１、ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ表达的卵巢癌细胞株及其他肿瘤细胞株表达Ｂ７－１及ＭＨＣⅠ、ＭＨＣⅡ,而单独用γＩＦＮ则不能诱导Ｂ７－１表达。ＰＭＡ和γＩＦＮ的这种协同效应能被蛋白激酶抑制剂１（５磺酰基）异喹啉２甲基哌嗪盐酸盐（Ｈ７）阻断。被诱导表达的Ｂ７－１能激活ＣＴＬ的杀伤活性,并能增强Ｔ淋巴细胞的增殖能力。结论γＩＦＮ诱导的Ｂ７－１的表达可能依赖于ＰＭＡ预先激活蛋白激酶Ｃ。诱导Ｂ７－１等的表达对治疗肿瘤有一定的价值。     

p27Kip1蛋白在子宫内膜癌中的表达及其意义

目的：探讨子宫内膜癌中ｐ２７＾Ｋｉｐ１蛋白的表达情况及临床病理意义。方法：采用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测１０５例子宫内膜癌ｐ２７＾Ｋｉｐ１蛋白的表达,并运用流式细胞术检测４６例子宫内膜癌组织的ＤＮＡ含量。结果：子宫内膜癌ｐ２７＾Ｋｉｐ１蛋白阳性表达率为６９％（７２／１０５例）,明显低于正常增生期子宫内膜及单纯增生、复合增生子宫内膜总的阳性率（９１％,Ｐ〈０．０１）,而与不典型增生子宫内膜的ｐ２７＾Ｋｉｐ     

趋化因子BLC表达载体构建及在肿瘤细胞中的表达

目的 建立真核表达重组体pcDNA-BLC的稳定转染细胞株,为研究趋化因子BLC的抗肿瘤免疫作用机制奠定基础。方法 以小鼠脾脏组织总RNA为模板,通过RT-PCR扩增BLC全长cDNA,并将扩增的cDNA片段插入pcDNA3．1( )真核表达质粒,构建重组质粒pcDNA-BLC,重组子经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染技术导入Colon26细胞,经G418筛选建立稳定转染细胞株。用免疫印迹法(Western Blot)鉴定转染细胞表达的蛋白质,证实BLC存在。用趋化实验证实转染细胞株表达的BLC有生物学活性。结果 真核表达重组体pcDNA-BLC构建成功,pcDNA-BLC稳定转染细胞株表达有生物学活性的BLC。结论 成功建立了BLC的稳定转染细胞株,为研究BLC的抗肿瘤免疫作用机制继而发展肿瘤疫苗奠定了基础。     

胰腺癌细胞株Pc-3、HS766T DPC4基因的表达检测及其对细胞增殖的影响初探

目的：了解Pc-3、HS766T两个胰腺癌细胞株DPC4基因的表达情况。方法：用Trizol试剂提取两个细胞株培养细胞的总RNA,用RT-PCR的方法合成DPC4的cDNA并经与标准cDNA电泳确认后,用Qiagen PCR纯外试剂盒纯化,将纯化的cDNA与克隆载体P1-Adv连接,并用连接产物转化大肠杆菌,扩增后提取质粒,经酶切鉴定后,送上海博亚公司测序,并上网与基因库中DPC4的cDNA比较,同时观察两个细胞株肿瘤细胞的生长情况。结果：HS766T细胞无DPC4基因表达(同源缺失),Pc-3细胞存在DPC4基因表达,但其cDNA片段与理论值相比．短约200bp,上网BLAST的结果表明,在中间连接区,有一236bp的片段缺失。两个细胞生长观察表明,Pc-3细胞生长明显慢于HS766T。结论：胰腺癌细胞株HS766T中DPC4基因同源缺失,细胞具有生长快速的特点。胰腺癌细胞株Pc-3中有正常功能的DPC4表达．但该DPC4转录产物显示,在其连接区有-236bp的片段缺失。该片段缺失对DPC4功能的具体影响尚不明确。     

钙通道活性与胃泌素促人结肠癌细胞增殖间关系的研究

目的 :探讨钙通道活性在胃泌素促人结肠癌细胞增殖中的作用。方法 :运用流式细胞仪检测细胞内游离钙离子水平 ,MTT比色法测定细胞增殖情况。结果 :2 5× 10 -6M的五肽胃泌素 (PG)可以引起HT2 9细胞内游离钙离子水平明显升高 (P <0 0 1) ,钙通道阻滞剂nifedipine (10 -5M)可以使PG引起的钙离子水平升高幅度明显下降 (P <0 0 1)。同时可以部分抑制PG促增殖作用 (P <0 0 5 )。钙通道激动剂Bayk86 44 (10 -6M)可以明显升高细胞内钙离子水平 (P <0 0 1)。并能促进HT2 9细胞增殖 (P <0 0 5 ) ,与PG的促增殖作用相比无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :钙通道作为调节细胞内钙离子变化的主要途径 ,在调控PG促HT2 9细胞增殖中具有重要作用     

果蝇成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体cDNA克隆及其载体的构建

目的克隆果蝇成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体(FGFR-1)全长基因序列,构建其真核表达载体pdFR1。方法采用PCR方法扩增果蝇FGFR-1基因全长序列,克隆人载体pT—Adv,转化大肠杆菌XL1-Blue,挑选白色菌落行酶切鉴定及测序。重组质粒pT—Adv／FGFR-1酶切,回收目的基因片段,将其克隆人真核表达载体pcDNA3．1( )中,命名为pdFR1,挑选白色菌落行酶切鉴定。结果pT-Adv／FGFR-1测序结果与GenBank完全一致,pdFR1行限制性内切酶酶切,酶切片段与预期值相符。结论克隆了果蝇成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体全长基因序列,构建了其真核表达载体pdFR1,为完善异种分子疫苗免疫理论莫定基础。