老年患者呼吸道嗜血杆菌的分离及耐药性分析

目的 了解老年呼吸道嗜血杆菌的分离、鉴定及其β-内酰胺酶的产生率和耐药性.方法 采用自配的专用嗜血杆菌培养基分离细菌,在血琼脂平板和M-H平板上做卫星试验对分离出的细菌进行鉴定,阳性者部分用NHI卡进行确认.用头孢硝噻吩法测试β-内酰胺酶的产酶率,并用琼脂扩散法进行药敏试验.结果 1 138份标本共检出119株嗜血杆菌,检出率10.5%,其中流感嗜血杆菌25株（21.0%）,副流感嗜血杆菌94（79. 0% ）株,嗜血杆菌β-内酰胺酶的产生率为23.5%;左氧氟沙星、氨苄西林、复方新诺明对嗜血杆菌的耐药率较高,为15.0%～54.6% （流感嗜血杆菌）、19.2%～56.5%（副流感嗜血杆菌）;而阿莫西林/克拉维酸、氨曲南和二代三代头孢对嗜血杆菌的耐药率则较低（均＜10 %）.结论分离出的嗜血杆菌主要以副流感嗜血杆菌为主,对阿莫西林 /克拉维酸、氨曲南和二代三代头孢菌素的敏感性高于其他抗生素,可作为首选治疗用药.     

慢性丙型肝炎患者外周血树突细胞含量与病毒载量的相关性分析

目的 分析慢性丙型肝炎患者外周血树突细胞含量与HCV-RNA病毒载量的相关性,探讨HCV感染慢性化的免疫学机制.方法 流式细胞仪检测40例慢性丙型肝炎患者（CHC）外周血中髓样树突细胞（mDC）及浆样树突细胞（pDC）的含量,22例健康人作对照比较.实时荧光定量PCR法检测外周血HCV-RNA载量.结果 HCV-RNA1＋ E003 IU/ml患者及HCV-RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血mDC表达（0.25％±0.09％,0.14％±0.07％）均低于健康对照组（0.38％±0.10％）,差异有统计学意义（t=4.340 9,9.222,P值均＜0.05）;HCV-RNA1＋ E003 IU/ml患者及HCV-RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血pDC（0.23％±0.10％,0.13％±0.08％）均低于健康对照组（0.33％±0.09％）,差异有统计学意义（t=6.552 4,11.04,P值均＜0.05）;HCV RNA≥1＋E003 IU/ml患者外周血mDC,pDC的表达量明显低于HCVRNA1＋E003 IU/ml患者的表达,差异有统计学意义（t=4.349 6,2.671 8,P值均＜0.05）.结论 CHC患者外周血DC含量与HCV-RNA病毒载量呈负相关,CHC患者免疫功能低下.     

pcDNA3-MAGE-1真核表达载体的构建及其在Hepal-6细胞中的稳定表达

目的:构建真核表达载体,并在小鼠肝癌Hepa1-6细胞中稳定表达,观察转染细胞的增殖能力和致瘤能力。方法:用PCR方法扩增SMMC-7721人肝癌细胞株MAGE-1全长序列,连接到真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达pcDNA3-MAGE-1,脂质体法转染小鼠Hepa1-6细胞。G418筛选阳性克隆(Hepa1-6- MAGE-1),用RT-PCR和Western blotting检测阳性克隆中mRNA和蛋白质的表达;MTT 法检测Hepa1-6细胞和Hepa1-6- MAGE-1细胞生长和增殖的变化;分别以Hepa1-6细胞和Hepa1-6- MAGE-1细胞接种于C57BL /6j小鼠右侧背部皮下,观察Hepa1-6- MAGE-1细胞的致瘤能力。结果:构建MAGE-1的真核表达载体转染Hepa1-6细胞,PT-PCR与Western boltting检测分别在Hepa1-6- MAGE-1细胞中检测到人MAGE-1基因的mNRA和蛋白质的表达,两组细胞增殖无统计学差异;两组各10只小鼠均皮下成瘤,且肿瘤大小没有明显差异。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3-MAGE-1,获得了稳定表达人MAGE-1基因的小鼠肝癌Hepa1-6细胞株,并具有很好的增殖和致瘤能力。     

胃癌中幽门螺杆菌与凋亡相关蛋白p53、BcL-2、Fas表达相关性研究

目的：探讨幽门螺杆菌（Hp）感染在胃癌发生、发展中与p53基因、BcL-2基因、Fas基因表达的关系。方法：用Warthin-Starry染色法和快速尿素酶试验观察在不同胃病黏膜组织中Hp的感染情况,用免疫组化S-P法检测p53、BcL-2、Fas基因蛋白的表达。结果：胃癌及癌前病变（IM、Dys）组中Hp感染率明显高于慢性胃炎（CG）组,差异有统计学意义（P〈0.05）。p53、Bcl-2的阳性表达率在GC、Dys和IM组中明显高于CG组,差异有统计学意义（P〈0.05）;Fas在GC及Dys组中表达明显低于CG组,差异有统计学意义（P〈0.05）。在GC、Dys及IM中,Hp感染（＋）组中p53、Bcl-2基因蛋白表达阳性率高于Hp感染（-）组,Fas基因蛋白的表达低于Hp感染（-）组,差异有统计学（P〈0.05）。结论：Hp与胃癌的发生关系密切,在胃癌的发生发展过程中,Hp感染与细胞凋亡调控蛋白p53、Bc1-2及Fas之间存在相互协同的关系。     

胰岛素生长因子结合蛋白-2 siRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建针对胰岛素生长因子结合蛋白-2(IGFBP-2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,研究载体介导的RNAi技术对人U251脑胶质瘤细胞株中IGFBP-2表达的抑制作用。方法根据GenBank提供的IGFBP-2基因(NM-000597)核苷酸序列及siRNA的设计原则,设计合成4对带有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的发夹结构寡核苷酸序列,筛选得到576⁵94 nt、908594 nt、908⁹26 nt、938926 nt、938⁹56 nt 3个19 bp片段靶序列,同时随机组合出一条无关序列,应用限制性内切酶酶切和测序技术鉴定重组克隆。用脂质体介导转染人U251胶质瘤细胞株,采用RT-PCR和Western印迹方法检测细胞IGFBP-2 mRNA和蛋白表达。结果酶切筛选得到4个目的片段的阳性克隆,测序证实重组表达载体中插入序列与设计一致。RT-PCR和Western印迹检测显示构建的siRNA表达载体可显著降低U251细胞中IGFBP-2 mRNA和蛋白表达水平。结论成功构建载体介导的IGFBP-2靶向RNA干扰重组体,并能有效抑制U251细胞中IGFBP-2基因的表达。     

乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞亚群和Th1／Th2类细胞因子的表达及临床意义

目的 研究乙肝感染患者外周血T淋巴细胞亚群和Th1/Th2类细胞因子的表迭及临床意义.方法 通过流式细胞检测技术,对乙型肝炎患者和正常人外周血T淋巴细胞亚群(CD3+,CD4+,CD8+)及细胞因子Th1(IFN-γ),Th2(IL-4)进行检测,并进行比较.结果 与正常对照组比较.慢性乙型肝炎组CD4+细胞数下降,CD8+细胞数增加,但结果之间差异无统计学意义(P>0.05); 肝硬化组CD3+,CD3+CD4+细胞减少,CD3+CD8+细胞增加,CD3+CD4+/CD3+CD8+比值下降,结果之间的差异有统计学意义(P<0.05).慢性乙型肝炎组和肝硬化组IFN-γ表达百分率高于正常对照组(P<0.05),而IL-4表达百分率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 乙型肝炎患者免疫功能紊乱,在疾病的发生发展中Th1类细胞因子可能起了一定作用.     

联合应用MAGE-1与IL-18基因疫苗体外抗肝癌作用的实验研究

目的该研究构建重组基因疫苗pcDNA-MAGE-1和pcDNA-hIL-18;探讨联合应用基因疫苗体外抗肝癌免疫治疗的作用。方法基因疫苗分组免疫实验小鼠,在体外验证疫苗免疫后的小鼠脾细胞对MAGE-1阳性和阴性肝癌细胞株的杀伤作用;分别以不同剂量的pcDNA-hIL-18与pcDNA-MAGE-1组合测定免疫鼠脾细胞杀伤率,验证产生高杀伤效应的最佳的pcDNA-hIL-18浓度。结果重组基因疫苗免疫组小鼠脾细胞对两种MAGE-1阳性肿瘤细胞(SMMC-7721、BEL-7402)均有明显的杀伤作用,其杀伤效应与生理盐水组(空白对照),空质粒pcDNA3组(阴性对照)相比差异具有显著性(P<0.01);重组基因疫苗免疫后的小鼠脾细胞对MAGE-1阴性肿瘤细胞(QQY-7701)有一定的杀伤作用,与空白对照及阴性对照免疫组相比差异有显著性(P<0.05);pcDNA-hIL-18+pcDNA-MAGE-1组以(50+100)μg剂量免疫小鼠的脾细胞杀伤效应最高,与pcDNA-MAGE-1和pcDNA-hIL-18组相比差异有显著性(P<0.01)。结论联合应用MAGE-1与IL-18基因疫苗对MAGE-1阳性肿瘤...     

幼儿核磁检查中水合氯醛不同给药方法镇静的护理

目的 探讨水合氯醛不同用药方式的护理.方法 选取行核磁扫描需镇静的患儿180例,随机分为口服用药组(A组)、不同深度灌肠用药组(B组、C组、D组)、肌注安定组(E组),每组30例.A组口服10%的水合氯醛溶液;B组、C组、D组应用用稀释的10%的水合氯醛0.5 ml/kg灌肠,灌肠深度分别为6～10 cm、10～15 cm、15～20 cm;E组应用安定注射液,剂量100 μg/kg.对比观察各给药方式的镇静效果.结果 A组和D组镇静有效率均达93%;B组、C组、D组镇静有效率分别为90%、100%、100%.结论 婴幼儿水合氯醛深部灌肠镇静效果显著.     

弓形虫SAG1、GRA2单基因疫苗及SAG1-GRA2复合基因疫苗的免疫效果观察

目的 检测SAG1和GRA2基因编码的单基因及复合基因疫苗诱导小鼠的免疫应答,评价其抗弓形虫感染的保护性免疫效果.方法 大量制备pcDNA3.1-SAG1、pcDNA3.1-GRA2、pcDNA3.1-SAG1-GRA2真核表达重组质粒,肌内注射BALB/c小鼠,分别于2周、4周后加强免疫一次.另设立pcDNA3.1及PBS对照组.于3次免疫后4周作免疫指标测定(包括ELISA法测定小鼠血清IgG抗体及细胞因子IFN-γ、IL-4,MTT法测定小鼠淋巴细胞增殖能力及NK细胞杀伤活性),并观察弓形虫速殖子攻击感染后小鼠的生存时间.结果 SAG1-GRA2组小鼠血清IgG抗体、IFN-γ、淋巴细胞增殖能力及NK细胞杀伤活性均高于SAG1及GRA2组(P＜0.05);各组均未检测到IL-4;复合基因组小鼠生存时间较单基因疫苗组延长(P＜0.01).结论 弓形虫SAG1-GRA2复合基因疫苗较SAG1、GRA2单基因疫苗具有更好的免疫保护性.