水通道蛋白1在宫颈病变中的表达及意义

目的:检测宫颈病变组织中水通道蛋白1的表达,探讨该蛋白在宫颈癌形成和演进进程中的意义。方法:用免疫组织化学SP法检测83例石蜡包埋宫颈组织中水通道蛋白1的表达,结合临床病理分型分析其表达的意义。结果:水通道蛋白1在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌组织中的阳性率分别为4.0%,33.3%和74.2%,3组样本中水通道蛋白1阳性率的差异有统计学意义(P<0.05),宫颈癌病理学分级1+2级和3级相比,差异有统计学意义(P<0.01)。水通道蛋白1表达阳性率与CIN的分级,与宫颈癌临床分期、组织学分型和淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:水通道蛋白1在宫颈癌前病变和宫颈癌组织中表达升高,可能在宫颈癌的发生发展过程中起重要作用。     

短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

目的：构建AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体,观察RNA干扰（RNAi）技术,对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用,并探讨其促进细胞凋亡的机制。方法：运用基因工程技术,设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA,构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体（Lipofectamine^TM 2000）包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞,荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达,计算转染效率,半定量RT—PCR（Semi-quantitative RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）检测AKT2的表达及干扰效率,流式细胞学检测法（FACS）检测细胞凋亡率,比较抑制AKT2基因前后卵巢癌细胞抵抗凋亡能力。结果：成功构建了PAKT2-ShRNA载体。A2780和SKOV3细胞转染pAKT2-shRNA后,荧光显微镜下观察转染效率约40％;Semi-quantitative RT-PCR和Western blot检测结果示,转染后AKT2 mRNA和蛋白表达均显著降低。FACS检测结果显示,转染pAKT2-shRNA后,紫杉醇25nmol／L处理细胞12h,与空白对照组和阴性对照组相比,细胞凋亡率显著增加,P〈0．05。结论：构建的pAKT2-shRNA真核表达载体能有效抑制AKT2基因表达;运用RNAi技术,降低卵巢癌细胞中AKT2基因表达水平,能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,促进肿瘤细胞凋亡。     

骨桥蛋白、CD44v6在宫颈癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨宫颈癌组织中骨桥蛋白（OPN）和CD44v6的表达与临床分期、淋巴结转移的关系。方法 采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶（S-P）方法,检测骨桥蛋白和CD44v6蛋白在40例宫颈癌、38例宫颈上皮内瘤变（CIN）、10例正常宫颈组织中的表达情况。结果 宫颈癌组织中骨桥蛋白（OPN）和CD44v6的阳性表达率分别为70%和60%,高于宫颈上皮内瘤变（CIN）和正常宫颈组织,差异有统计学意义（P〈0.05）;且两者的表达呈正相关。在不同临床分期和组织学类型及组织学分级中骨桥蛋白和CD44v6表达差异无统计学意义;二者在有淋巴结转移的宫颈癌组织中阳性表达率分别为84%和76%,高于无淋巴结转移组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 骨桥蛋白和CD44v6的表达与宫颈癌的发生发展及侵袭转移相关,且二者有协同作用（rs=0.74）,在高表达骨桥蛋白的宫颈癌组织中CD44v6的表达也较高,其联合检测可作为判断宫颈癌恶性程度、评价预后及指导治疗的一项评估指标。     

Inhibitory Effects of Anti-sense PTTG on Malignant Phenotype of Human Ovarian Carcinoma Cell Line SK-OV-3

To construct eukaryotic expression vector expressing full length anti-sense pituitary tumor transforming gene (PTTG) mRNA and observe its blocking effect on the potential invasion of human ovarian carcinoma cell line SK-OV-3. PCR primers containing designed enzyme cut sites were used for cloning full-length PTTG gene fragment, and the resulting PCR product was inserted into the eukaryotic vector pcDNA3. 1 in the antisense direction. The recombinant vector was then transfected into SK-OV-3 by Lipofectamine. The positive cell clone was screened by G418, PTTG and bFGF at protein level expression were detected by Western blot. The biological behavior change of transfection positive cells was observed by colony formation in soft agar assay. Our results showed that SK-OV-3 clones stably expressing full-length recombinant pcDNA3. 1-PTTGas were obtained. The expressions of PTTG and bFGF protein in transfected cells were decreased by 61.5% and 52.3%, respectively as compared with non-transfected ones. The number of colony formation was reduced significantly in transfected cells as compared with empty vector transfected and non-transfected cells. It is concluded that the recombinant vector pcDNA3. 1-PTTGas is a novel tool and provides an alternative anti-sense gene therapy targeted at PTTG in human carcinoma.     

浅谈对进行保守治疗的颈椎病患者实施综合护理干预的临床效果

目的 :探讨对进行保守治疗的颈椎病患者实施综合护理干预的临床效果。方法 :对2013年1月~2014年5月期间我院收治的40例颈椎病患者的临床资料进行回顾性研究。我们将这40例患者分为研究组与对照组,每组各有20例患者。我院对这两组患者均进行保守治疗。在此基础上,对研究组的患者进行综合护理干预。治疗结束后,比较两组患者的临床效果。结果 :研究组患者身体功能、社会功能、心理功能及物质功能的分值均明显高于对照组的患者,二者相比差异有显著性(P<0.05)。结论 :对进行保守治疗的颈椎病患者进行颈部热敷及中药热奄包外敷等综合护理干预可有效地改善其生活质量,降低其病情的复发率。该护理方法值得在临床上推广使用。     

人Bub1基因shRNA真核表达质粒的构建及其对人卵巢癌细胞SKOV3紫杉醇敏感性的影响

目的 构建人Bub1 shRNA真核表达质粒,鉴定该质粒对人卵巢癌SKOV3细胞中Bub1基因的抑制作用,并探讨其对SKOV3细胞紫杉醇敏感性的影响.方法 构建pEGFP-Bub1-shRNA质粒,将其经脂质体Lipo 2000TM转染SKOV3细胞后,通过RT-PCR及Western blot检测干扰效率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法比较转染前后SKOV3细胞的紫杉醇敏感性.结果 成功构建了pEGFP-Bub1-shRNA质粒;RT-PCR 和Western blot检测结果提示,转染后Bub1的mRNA和蛋白表达均显著降低;MTT和FACS提示,与对照组细胞相比,转染后SKOV3细胞生长抑制率及凋亡率明显降低(P<0.05).结论 pEGFP-Bub1-shRNA质粒能有效抑制Bub1 mRNA及蛋白的表达,并降低SKOV3细胞紫杉醇敏感性,该质粒的成功构建为进一步研究Bub1基因的生物学功能提供了工具.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidine对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及机制研究

目的:探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Apicidine对宫颈癌细胞的杀伤作用和机制。方法:用不同浓度的Apicidine作用于体外培养的宫颈癌细胞株HeLa和正常呼吸道上皮细胞REC;用MTT法检测细胞生长存活率;用流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化;用RT-PCR法和Western blot法分析Apicidine作用后宫颈癌细胞中p21WAF1和p53表达的变化。结果:Apicidine纳摩尔级浓度即能有效地抑制宫颈癌细胞增殖,对正常细胞无明显抑制效应。FCM结果表明,Apicidine能显著诱导宫颈癌细胞发生凋亡,对正常细胞无明显促凋亡作用;加入2μmol/L Apicidine作用24h和48h后宫颈癌细胞HeLa凋亡率分别为(10.11±0.63)%和(23.28±0.34)%,差异有显著性(P<0.05),正常呼吸道上皮细胞REC凋亡率分别为(5.81±0.92)%和(6.8±0.55)%,差异无显著性(P>0.05);FCM结果亦表明,Apicidine主要引起G0/G1期细胞周期阻滞,1μmol/L Apicidine处理24h后HeLa细胞G0/G1期细胞显著增多,由(46.8±3.2)%增至(69.5±6.1)%,差异有统计学意义(P<0.05);RT-PCR和Western blot结果显示,Apici-dine能显著诱导p21WAF1RNA和蛋白水平表达,对p53表达无明显影响。上述结果都呈现明显的量-效与时-效关系。结论:Apicidine在体外能有效地抑制人宫颈癌细胞生长,对人正常细胞无明显影响,其抗肿瘤生长机制之一可能是通过上调p21WAF1蛋白水平和引起G0/G1期细胞周期阻滞实现的。     

苍耳子对大鼠肝脏毒性作用的代谢组学研究

目的:观察苍耳子对大鼠尿液代谢轮廓、整体表征和血液生化指标等的影响,探讨代谢组学方法在中药毒性评价中的作用.方法:用随机数字表法将30只雄性Wistar大鼠分为苍耳子低剂量组、高剂量组和对照组,每组10只.苍耳子低剂量和高剂量组大鼠分别经灌胃给予一定容量的含苍耳子水提取液(相当于生药1.05和21.0 g/kg),1次/d,共28 d;对照组给予同体积0.9％氯化钠溶液.给药期间观察大鼠体重、被毛、运动及精神状态的改变;给药前和给药7、14、21、28d检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平,收集24h尿液,用超高效液相色谱/飞行时间质谱方法测定大鼠尿液代谢轮廓和整体表征.结果:苍耳子高剂量组大鼠在给药期间陆续出现被毛光泽度下降、脱毛、活动量和摄食量减少、反应迟钝等现象.苍耳子低剂量组仅2只大鼠在给药28d后表现为少动喜卧,被毛光泽度下降.苍耳子高剂量组大鼠给药21和28 d时体重均明显低于苍耳子低剂量组(P＜0.05)和对照组(P＜0.01),苍耳子低剂量组与对照组大鼠体重在各时间段的差异均无统计学意义(均P＞0.05).苍耳子高剂量组大鼠给药21 d时的ALT、AST水平[(42.9±3.9)U/L、(107.9±12.7) U/L]明显高于低剂量组[ (33.8 ±4.4) U/L、(95.8±16.6)U/L]和对照组[(31.8±4.4) U/L、(93.5±15.8) U/L],差异均有统计学意义(均P＜0.05),给药28 d时苍耳子高剂量组血清ALT、AST水平达峰值.苍耳子低剂量组不同给药时间血清ALT、AST水平与对照组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).苍耳子高剂量组给药第7、14、21、28天24h尿液代谢物表型的聚类分布均偏离对照组,且随给药时间的延长而增大.苍耳子低剂量组给药第7、14、21天24h尿液代谢物表型的聚类分布位于对照组附近且与对照组有部分重叠,给药28 d时出现单独聚类.结论:用代谢组学方法检测苍耳子肝毒性灵敏度较高,可用于评价中药的毒性反应.     

PP2药物抑制乳腺癌细胞侵袭与增殖的机制

目的以PP2E4-Amino-5-（4-Chloro-Phenyl）-7-（t-Butyl）PyrazoloE3,4-d]Pyrimidine]药物（src激酶抑制剂）处理乳腺癌细胞,检测src激酶及E-cadherin蛋白表达水平的变化,观察PP2对乳腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响,并探讨其可能的机制。方法PP2处理乳腺癌细胞MDA-MB231,Westernblot检测src及其相关蛋白的表达;Boyden小室实验检测细胞侵袭能力;MTT检测细胞的增殖能力。结果PP2处理MDA-MD231细胞后,src表达水平明显降低,Ecadherin表达水平升高;细胞的增殖和侵袭能力均受到明显抑制,剂量越高抑制作用越明显（P〈0．05）。结论PP2通过提高细胞粘附分子E-cadherin的表达,从而抑制乳腺癌细胞MDAMB-231的增殖和侵袭能力。