应用聚合酶链式反应鉴定实验细胞的来源种属

目的 应用聚合酶链式反应(PCR)鉴定常见细胞的种属来源,以判断培养细胞是否存在种间的交叉污染.方法 根据文献报道和NCBI数据库我们得到了32对种属特异性引物,并分别针对10种常见的细胞种属,对这些引物进行特异性和敏感性的筛选;以待检测细胞的基因组DNA为模板进行PCR及后续的琼脂糖凝胶电泳;以不同种属来源细胞的DNA混合物作为阳性对照模板,以水作为阴性对照模板.结果 针对上述10种常见细胞来源的种属分别得到了1对特异性和敏感性均较好的引物,经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳后可以准确鉴定待检测细胞的种属来源,并判断该细胞是否存在种间污染.结论 应用聚合酶链式反应可以简便、快速地鉴定实验细胞的种属,并判断该细胞是否存在种间的交叉污染.     

培养瘤细胞及瘤株不同冻存方法与细胞存活之间的影响因素初步探讨

在生物学和医学研究中 ,细胞培养技术是最重要的手段之一 ,肿瘤研究中移植性肿瘤又称瘤株传代也是最基本的常用技术。关于瘤细胞培养后和瘤株建成后如何将细胞系和瘤株保存好是很值得研究的内容。人所共知冷冻保存瘤细胞和瘤株要比体内、体外传代保存更为优越 ,瘤细胞冻存后几乎没有机械性损伤 ,可以使培养瘤细胞和瘤株免遭污染和受宿主不同因素影响而改变生物学特性 ,特别对于那些不常用的但又很重要的细胞系或刚建株后不能立即用于实验的细胞系及瘤株 ,低温保存更为重要。我组采用冷冻保存培养瘤细胞和瘤株已有近 2 0年的经验。在本实验中…     

肝纤维化中医认识

目的对近5年中医治疗肝纤维化文献进行分析,探讨肝纤维化的中医认识。方法检索近5年有关肝纤维化的文献,对肝纤维化病名、病因病机认识、治疗方法及近代相关研究几方面进行论述。结果中医多采用益气活血、软坚散结、清热利湿、解毒通络等方法治疗,多采用膈下逐瘀汤、龙柴方等方药治疗,取得了较好的疗效。结论经过大量实验研究发现,中医治疗肝纤维化主要是从体外抑制肝星状细胞活化或促进其凋亡;体内通过调节TGF-β/Smad信号通路抑制肝纤维化进程来实现的。     

靶向HER2嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及其特异性杀伤肿瘤的作用北大核心CSCD

目的以靶向HER2的人源化单克隆抗体H1．2scFv为基础构建第三代嵌合抗原受体（CAR）,并探讨CAR修饰的T淋巴细胞（CAR—T）对HER2高表达肿瘤的杀伤作用。方法运用分子克隆方法将CAR的表达框和H1．2scFv装人慢病毒表达载体,利用慢病毒载体将H1—2CAR基因转导至T淋巴细胞构建CAR．T细胞,通过酶联免疫吸附测定检测细胞因子白细胞介素2的表达,通过LDH释放实验检测CAR—T细胞杀伤肿瘤细胞的效率。最后用NOD／SCID小鼠移植瘤模型来检测CAR．T细胞在体内杀伤肿瘤细胞的能力。结果成功构建了靶向HER2的第三代嵌合抗原受体H1—2CAR表达载体,该载体转染的H1—2CAR—T细胞能与HER2’的肿瘤细胞结合并提高了细胞因子白细胞介素2的释放。在本研究中Hi一2CAR—T细胞与HER2高表达的肿瘤细胞相互作用时白细胞介素2分泌量可达到1000¨g／L以上,而外周血单个核细胞与肿瘤细胞相互作用时基本上不分泌白细胞介素2。在体外肿瘤细胞培养体系中,H1—2CAR—T细胞对HER2高表达肿瘤细胞的杀伤率明显高于HER2低／不表达的细胞。当效靶比为20：1时,H1—2CAR—T细胞对HER2高表达的乳腺癌细胞SK—BR-3的杀伤率可以达到（90．1±2．8）％．而H1．2CAR—T对HER2阴性的乳腺癌细胞MDA—MB-231的杀伤率只有（13．5±4．7）％。在NOD／SCID小鼠体内,CAR．T细胞治疗组乳腺癌移植瘤的生长速度减慢,实验结束时H1-2CAR—T细胞治疗组肿瘤质量平均为（0．74-0．1）g,未转染T细胞治疗组为（1．2±0．2）g,PBS组为（1．2±0．2）g。H1—2CAR—T治疗组与未转染T细胞治疗组相比较有明显差异（P〈0．05）,而未转染T细胞治疗组与PBS治疗组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论靶向HER2的H1．2CAR．T细胞能特异性杀伤HER2高表达的肿瘤细胞,为CAR—T靶向治疗HER2’的肿瘤提供了研究基础。     

替勃龙对去势大鼠骨强度的影响研究

目的探讨替勃龙对切除卵巢大鼠骨强度的影响。方法选用6月龄未交配健康雌性Sprague-Dawley大鼠共40只,随机分为4组(每组10只)①正常对照组或假手术组(Sham),②空白对照组即骨质疏松组(OVX),③OVX加戊酸雌二醇(ValerateEstriolVE)组(0.8mg/kg),④OVX加替勃龙(Tibolone)组(0.25mg/kg);行去势手术3周后开始按分组设计喂药(灌胃),共治疗3个月后处死。取大鼠右股骨及第3腰椎进行骨密度测定;之后对右股骨标本进行中段三点弯曲试验,测定股骨干强度指标;取大鼠第4、5腰椎制作不脱钙病理切片后进行图像分析计量。统计学处理P<0.05为具有统计学意义。结果①骨密度椎骨及股骨干骺端骨密度OVX组明显下降,使用戊酸雌二醇能够提升骨密度;但股骨干骨密度各组间差异无显著性。②骨强度三点弯曲实验结果显示OVX组股骨干强度较假手术组明显下降,替勃龙组骨干强度较OVX组提升30%(P<0.05)。③椎骨形态计量结果OVX组与假手术组、戊酸雌二醇组及替勃龙组间差异均有显著性。结论短期小剂量替勃龙治疗能阻止卵巢切除导致的成熟雌性大鼠股骨干强度受损。     

围绝经期女性肌肉功能评估工具构建及信效度研究

目的:构建围绝经期女性肌肉功能评估工具并检验其效能,为围绝经期女性肌肉功能评估提供参考依据。方法:以国际机能、残疾和健康分类(ICF)为理论指导,采用文献回顾、专家咨询法构建围绝经期女性肌肉功能评估指标,形成围绝经期女性肌肉功能评估工具初稿;选择首都医科大学附属北京世纪坛医院78例围绝经期女性进行调查,形成正式评价工具。结果:围绝经期女性肌肉功能评估工具包括2个维度5个条目,具有良好的信效度,总分值在0～100分,ROC曲线下面积(AUC)0.868(95%CI 0.771～0.964),诊断界值为64分,灵敏度为96.0%,特异度为72.4%,阳性预测值为74.4%,阴性预测值为85.7%,准确度为79.5%。结论:本研究构建的工具有助于评估围绝经期女性肌肉功能水平,为早期预防围绝经期女性肌肉相关疾病提供依据。     

宫颈绒毛管状腺癌一例及文献复习

正一、病例摘要患者40岁,因体检发现宫颈病变2个月入院。患者平素月经不规律(6~7)天/(1~4)个月,2个月前无症状体检发现宫颈赘生物,TCT:非典型腺细胞,HPV18阳性,阴道镜所见如图1,活检提示分化好的绒毛管状腺癌。近3年患者有燥郁症,无口服避孕药和吸烟史,孕2产0。体格检查:一般情况好,生命体征平稳,浅表淋巴结未及肿大,双肺呼吸音清,心律齐,腹软无压痛,未触及包块,脊柱四肢无异常。妇科检查:外阴已婚未产型;阴道通畅,黏膜光滑;宫颈轻度糜烂样改变,宫颈口可见直径约     

乳管镜下置入定位针在乳管内病变切除中的应用

乳管镜检查可直接观察乳腺导管系统内病变,是诊断病理性乳头溢液的理想方法之一。对于有占位性病变的导管需手术切除病变导管及所属区段乳腺组织,传统的手术定位采用体表定位结合溢液乳管内注射亚甲蓝的方法,但是定位往往不准确,导致手术切除范围过大。近年来,有报道经乳管镜在病变乳管内置定位针的方法,有助于术中准确地找到病灶。笔者通过两种定位方式的对照,评估乳管镜下置入定位针在乳管内肿瘤手术中的临床应用价值,现将结果报告如下。     

中药肝康冲剂提取诱导人肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的实验研究

本研究提取了肝康冲剂的主要成分并对抑瘤作用与诱导人肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡的关系进行了初步探讨.结果表明:1.肝康冲剂提取物对体外培养的肝癌细胞的生长具有抑制作用(MIT法):且抑制作用随药物浓度的加大而升高.其中肝康冲剂提取物>80mg/ml、阿霉素>5μg/ml作用显著,抑制率均大于50%.2.肝康冲剂提取物对人肝癌细胞BEL-7402细胞凋亡的诱导(1)对于肝癌冲剂和阿霉素作用的肝癌细胞BEL-74O2细胞周期DNA含量的检测表明,肝康冲剂、阿霉素均可阻滞人肝癌GO/G1期细胞进入S期,诱导细胞发生凋亡.(2)细胞核形态观察表明;AO染色,激光共聚焦扫描显微镜细胞扫描断层分析发现:对照组细胞完整无缺,DNA荧光强度分布地形图显示整个结构形似“蛋糕”.肝康冲剂组作用6小时后部分细胞核开始固缩,染色