人喉癌细胞系的建立及生物学特性研究

目的建立2种人喉癌细胞系,确定其生物学特性。方法取喉癌患者原发病灶和淋巴结转移灶组织,用组织块培养法进行原代培养。20代后观察细胞形态,绘制生长曲线图,用免疫组织化学染色方法鉴定细胞分子特征,测定细胞周期和软琼脂集落形成率。结果建立了2个人喉癌细胞系,分别命名为CCC-HLS和CCC-HLSLN,已传至第25代。CCC-HLS细胞形态以梭形为主;CCC-HLSLN细胞呈多形性,少数细胞有细长的突起,末端有分叉。2种细胞角蛋白(CK)免疫组织化学染色均为阳性。2种细胞传代后,2~4 d为对数生长期,第7天开始死亡,CCC-HLS细胞倍增时间为33.9 h,CCC-HLSLN细胞倍增时间为30 h。细胞周期分析表明CCC-HLS细胞G0/G1期为54.7%,G2/M期为5.2%,S期为40.1%。CCC-HLSLN细胞G0/G1期为50.6%,G2/M期为27.4%,S期为22.0%。CCC-HLS细胞软琼脂集落形成率为1.23%,CCC-HLSLN软琼脂集落形成率为2.58%。结论建立的2种人喉癌细胞系可用于喉癌的基础研究。     

上海市十年来产后出血死亡分析

上海市1976～1985年孕产妇死亡共435例,其中因产科出血而死亡的共110例,占死亡孕产妇的25.3％。而产科出血中因产后出血死亡者89例,占80.9％。89例中因胎盘问题、软产道损伤及宫缩乏力三大主要原因引起的占98.9％。1980年前五年,胎盘因素是造成产后出血死亡的主因。1981年及1982年软产道损伤转为产后出血死亡的主因。由于宫缩乏力致产后出血死亡者十年来持续在20％左右。我院对上海市每年产妇死亡的原因进行分析,找出倾向性问题,采取相应措施,提高防治质量,使产后出血死亡专率从1976年的14.4/10万下降到1985年的1.3/10万。     

308nm波长准分子激光致癌性的探讨

本实验旨在探讨波长３０８ｎｍ准分子激光的潜在致癌危险性。体外培养的成纤维细胞ＮＩＨ／３５３及肿瘤细胞ＬＡ７９５，ＦＣ和ＤＣＳ分别采用准分子激光辐照，剂量达４３２．７８ｍＪ／ｃｍ＾２。经对激光处理后细胞在琼脂中集落形成数的统计，与对照组相比未见显著差异。     

中药筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞NF-κB表达的影响

目的观察中药筋脉通含药血清对高糖培养雪旺细胞（SCs）中NF-κB蛋白及其mR-NA表达的影响。方法原代培养并纯化W istar乳鼠坐骨神经SCs,蛋白S-100免疫组织化学法进行鉴定。取第3代SCs,加入不同培养基,分为正常组、高糖组、筋脉通组和神经妥乐平组进行培养,48h后采用激光扫描共聚焦显微技术检测NF-κB蛋白的表达,实时荧光定量PCR技术检测NF-κBmRNA的表达。结果正常组NF-κB绿色荧光强度较弱,主要表达于胞浆区;高糖组荧光强度于胞浆区和胞核区表达都较正常组增强;筋脉通组和神经妥乐平组表达都较高糖组减弱,主要表达于胞浆区。高糖组SCs中NF-κB的蛋白及其mRNA表达较正常组明显增强（P〈0.01）;与高糖组比较,筋脉通组和神经妥乐平组NF-κB的蛋白及其mRNA的表达显著下降（P〈0.01）。结论筋脉通含药血清可抑制高糖培养SCs中NF-κB蛋白及其mRNA的表达。     

DCS细胞肿瘤相关膜蛋白大鼠单克隆抗体的制备及鉴定

ＤＣＳ细胞肿瘤相关膜蛋白大鼠单克隆抗体的制备及鉴定段德义赵雪梅高进刘玉琴顾蓓小鼠树突状细胞肉瘤（ＤＣＳ）细胞系（本室新近建立），有较强的运动能力，分泌水解酶活性，转移率高的特点，是研究肿瘤转移的良好细胞模型。本文用小鼠ＤＣＳ细胞为免疫原制备大鼠单抗。...     

输卵管恶性苗勒管混合瘤1例

原发性输卵管恶性肿瘤是极其罕见,而输卵管恶性苗勒管混合瘤更为罕见,仅占女性生殖道恶性肿瘤的0.1%～0.5%[1,2]。迄今世界报道仅50余例[3]。笔者报道1例诊治过程,并结合文献探讨其临床表现、病理、诊断及鉴别诊断、     

血液系统肿瘤细胞系中CD34+干细胞特性研究

目的探讨造血系统多种肿瘤细胞系中CD34^＋干细胞是否存在,并对其性质进行研究。方法利用流式细胞检测技术,检测了急性单核细胞白血病细胞THP-1、红白血病细胞MEL、慢性粒细胞白血病细胞K562,急性淋巴细胞白血病细胞MOLT-4,恶性淋巴瘤细胞RAJ1,多发性骨髓瘤细胞RPM18226、SP2／0和树突状细胞肉瘤DCS肿瘤细胞中CD34^＋的肿瘤细胞所占的比例。选取了MOLT-4和K562细胞系,分选出CD34^＋细胞,继续培养,观察CD34^＋细胞比例变化;比较CD34^＋与CD34^＋肿瘤细胞在功能状态、细胞周期、分化状态、耐药性的差异。结果8种不同类型造血系统肿瘤细胞中CD34阳性率依次为2．5％、5．2％、3．1％、2．1％、1．4％、0、0和6．2％。从K562细胞中分选出CD34^＋细胞,继续培养后恢复为原来比例。MOLT-4和K562细胞系中分离出的CD34^＋细胞RNA含量低、细胞处于Gn／G,期的比率较高（81．5％和77．9％）、分化抑制蛋白Id-1表达强阳性／阳性（分化程度低）、多耐药蛋白p-gP高表达（耐药性强）。结论血液系统肿瘤细胞系中有一小部分肿瘤细胞带正常造血干细胞的标记,并且带有这种标记的细胞表现出更为原始的细胞特性,其中包括血液肿瘤细胞干细胞。     

囊泡膜蛋白相关蛋白VAP33对小鼠树突状细胞肉瘤恶性行为的抑制作用

  目的  探讨囊泡膜蛋白相关蛋白（VAP33）过表达对小鼠树突状肉瘤细胞DG6增殖及侵袭转移的影响。  方法  反转录获得VAP33 cDNA，利用基因重组技术构建VAP33-GFP融合基因慢病毒表达载体（pWPXL-VAP33），在脂质体Lipofectamine 2000介导下与辅助质粒（PsPAX₂、MD₂G）共转染293T细胞包装生产重组慢病毒。取病毒上清感染内源性低表达VAP33的DG6细胞，通过荧光显微镜挑选、Western-blot鉴定获得VAP33稳定过表达的阳性单克隆细胞株（DG6-VAP33）。MTT法检测细胞增殖情况，Transwell和集落形成检测肿瘤细胞体外侵袭、成瘤能力。同时建立小鼠皮下移植瘤模型，连续6周观察VAP33过表达对活体内肿瘤细胞生长、成瘤、转移能力的影响。  结果  重组慢病毒表达载体pWPXL-VAP33构建成功，包装滴度达6×107IU/mL，感染DG6细胞后筛选到VAP33稳定过表达细胞株（DG6-VAP33）。与DG6细胞相比，DG6-VAP33细胞体外增殖减慢，每孔集落数分别为（52±8）个和（36±5）个（P < 0.05）；Transwell方法观察到，DG6-VAP33细胞体外侵袭能力显著下降，穿膜细胞数（14±11）个少于DG6（36±17）个（P < 0.01）。通过6周的连续观察，DG6-VAP33组肿瘤生长速度显著慢于DG6组，成瘤率50%（5/10）、肺转移率（0）也明显降低（DG6组成瘤率100%、肺转移率80%）。  结论  VAP33过表达可抑制肿瘤细胞的增殖、成瘤及侵袭转移能力。      

视神经星状胶质细胞的培养

目的：探索建立视神经星状胶质细胞培养的最佳方法,观察该细胞体外水解酶表达情况。方法：分别取不同年龄WISTAR大鼠（出生4d、7d、成年）的视神经,利用胰蛋白酶加EDTA、胶原酶、木瓜酶、胰蛋白酶加胶原酶等不同方法消化。分别接种在0．2％明胶、鼠尾胶、多聚赖氨酸包被的培养瓶中,进行原代培养,观察细胞生长状况。利用免疫组化鉴定分离培养的细胞。连续传代观察其衰老情况。利用水解空斑法观察其水解酶表达。结果：几种方法均可见细胞生长,年龄4、7d大鼠视神经要比成年大鼠视神经胶质细胞培养成功率高,利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化要比其他消化方法细胞损失小。速度快,细胞成活率高。培养细胞呈典型星状胶质细胞形态,GAFP呈阳性。常规3d传代一次,可传代40次。胶质细胞在蛋白膜上可形成明显的水解空斑。结论：利用胰蛋白酶与胶原酶混合消化法,从新生鼠取材,可成功培养视神经星状胶质细胞,体外可传代40代。该细胞在体外可分泌蛋白水解酶。