糖肾方对 2 型糖尿病大鼠肝脏氧化应激水平及病理改变的影响

目的 观察糖肾方对 2 型糖尿病大鼠肝脏氧化应激水平及病理改变的影响, 并探讨其可能的机制。方法 采用高脂饲料喂养和小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射方法, 建立 2 型糖尿病合并非酒精性脂肪肝动物模型。将造模成功的大鼠随机分为正常组、 模型组、 糖肾方组和二甲双胍组, 比较各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、 天冬氨酸转氨酶(AST)、 三酰甘油 （TG）、 总胆固醇 （CHO） 和低密度脂蛋白胆固醇 （LDL-C） 水平, 肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、 过氧化氢酶(CAT)、 维生素 E （VE）、 一氧化氮 （NO） 和一氧化氮合酶 （NOS） 水平, 并在光镜下观察各组大鼠肝组织病理形态学改变。结果 与模型组相比, 二甲双胍组和糖肾方组大鼠表现状态较好, 毛色较光泽, 粪便成形; 二甲双胍组和糖肾方组大鼠的肝脏质量和肝脏质量指数较模型组明显下降, 2 组大鼠血清 ALT、 AST、 TG、 CHO、 LDL-C 水平显著降低。与模型组相比, 糖肾方组大鼠肝组织匀浆中 SOD、 CAT、 VE 水平明显升高, NO、 NOS 水平减低; 二甲双胍组大鼠肝组织匀浆中 SOD、 CAT 水平明显升高, NO、 NOS 水平减低。HE 染色显示二甲双胍组和糖肾方组较模型组大鼠肝细胞脂肪变性明显减少, 肝细胞排列基本规则。结论糖肾方可改善 2 型糖尿病大鼠肝功能, 降低血脂水平, 减轻肝脏脂质沉积, 其作用机制可能与其清除脂质过氧化物, 改善肝组织氧化应激水平有关。     

羟基红花黄色素A对肿瘤上清诱导的人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究羟基红花黄色素A(HSYA)对人肝癌细胞株(HepG2)培养上清液诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖的抑制作用。方法:原代培养HUVEC,传至第3-6代进行实验。以MTT比色法检测不同浓度HSYA在不同作用时间,对HepG2培养上清液刺激后异常增殖的内皮细胞生长的抑制作用。结果:HSYA在0.0073g/L-0.00045g/L浓度范围内作用24h后,对于肿瘤上清液刺激后异常增殖的HUVEC有显著抑制作用(F=13.015,P<0.01);同样浓度范围作用24h后,对正常HUVEC生长无明显促进或抑制作用。结论:一定浓度的HSYA在一定时间范围内可以显著抑制肿瘤上清液刺激后异常增殖的人脐静脉内皮细胞。提示HSYA有可能成为一种新的肿瘤血管生成阻断剂。     

人参皂苷Rg1对H_2O_2诱导的293T细胞NF-κB转录活性影响

目的:观察人参皂苷Rg1对H_2O_2诱导HEK293T细胞损伤过程中NF-κB转录活性的影响,探讨人参皂苷Rg1的抗氧化机制.方法:H_2O_2模拟氧化应激条件,MTT法和台盼蓝染色法检测人参皂苷Rg1对细胞生长的影响;以DCFH-DA为探针流式细胞仪检测细胞内ROS水平;利用双荧光素酶顺式报告系统,检测人参皂苷Rg1对荧光素酶报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶值的影响,以检测人参皂苷Rg1是否具有下调H_2O_2诱导的NF-κB转录激活的作用.结果:H_2O_2诱导损伤的293T细胞存活率随H_2O_2浓度的增高而下降,相同H_2O_2浓度下,人参皂苷Rg1预保护组细胞存活率较损伤组显著提高(P＜0.05);H_2O_2处理后细胞内自由基明显增加,其荧光强度增加了40%～50%,而给予有效浓度的人参皂苷Rg1后,荧光强度降低35%～40%;与正常对照组比较,H_2O_2模拟氧化应激条件下,HEK293T细胞中NF-κB荧光素酶报告活性明显升高(P＜0.05),而在人参皂苷Rg1预保护组则明显受到抑制(P＜0.05).结论:人参皂苷Rg1对H_2O_2所致的细胞氧化应激损伤具有明显的保护作用,其可能机制是有效地清除了细胞内过多的自由基,下调了转录因子NF-κB的转录活性,继而抑制了NF-κB通路的激活.     

流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性细胞因子表达及疏风宣肺方和解表清里方的调控作用

目的研究流感病毒性肺炎小鼠肺组织炎性细胞因子表达及疏风宣肺方和解表清里方的调控作用。方法制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,随机分为空白组、肺炎模型组、奥司他韦对照组、疏风宣肺方大、中、小剂量组(SL、SM和SS),解表清里方大、中、小剂量组(JL、JM和JS)。提取总RNA,采用基因芯片Pathway分析,挑选参与调控炎症相关通路中的靶基因。同时,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对IL-1β、IL-8、IL-10、CCL5(RANTES)、ICAM-1的mRNA表达水平进行验证。采用Western blot法对肺组织IL-1β的表达进行验证。结果模型组差异表达基因IL-1β、CXCR2、CCL5、IL-10、IL-6、IL-18、TGF-β1、CCL2明显上调,较正常组差异显著。各剂量治疗组对IL-1β、CXCR2、IL-10、IL-6表达有显著的下调作用,SM及SS组下调IL-18、TGF-β1、CCL2、CCL5基因的表达,JM及JL组下调差异表达基因IL-18、CCL5。qRT-PCR和Western blot法结果显示,两种方药各剂量组均可降低IL-1β的mRNA与蛋白表达(P0.05或P0.01)。SM组和JM组对IL-8、IL-10、RANTES、ICAM-1的mRNA有显著抑制(P0.05或P0.01)。qRT-PCR结果与基因芯片结果基本一致。结论疏风宣肺方和解表清里方均可抑制流感病毒感染后肺组织的免疫炎症损伤。     

毒热平注射液对甲型流感病毒H3N2体外感染细胞中TLR7信号通路的影响

目的:观察甲型流感病毒H3N2感染人胚肾上皮细胞(HEK-293T)细胞及人肺腺癌上皮细胞(A549)细胞后,对NF-κB转录活性以及TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA的影响,探讨H3N2对体外感染细胞中TLR7信号通路的影响及清热解毒中药毒热平注射液的干预作用。方法:采用MTT法体外检测各组药物对293T、A549细胞增殖的影响;H3N2感染293T细胞后,利用双荧光素酶报告系统,以利巴韦林、清开灵注射液为药物对照,检测毒热平注射液各浓度组细胞中NF-κB相对荧光素酶活性;H3N2感染A549细胞后,RT-PCR方法检测各组细胞中TLR7、TNF-α、IL-8、IFN-βmRNA水平。结果:MTT结果显示,毒热平、利巴韦林、清开灵注射液各浓度不影响细胞正常增殖(P>0.05)。报告基因结果显示,与细胞对照组相比,H3N2感染组细胞NF-κB转录活性显著增高(P<0.01);与H3N2感染组相比,利巴韦林0.5μg/mL,清开灵1/128稀释组,毒热平1μg/mL,10μg/mL,100μg/mL组均可不同程度下调NF-κB的转录活性(P<0.01)。RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H...     

毒热平注射液对流感病毒FM1感染小鼠免疫功能的影响

目的研究毒热平注射液对流感病毒FM1感染性肺炎小鼠肺指数、白细胞介素4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）基因转录水平、CD40L蛋白表达水平的影响,探讨其抗病毒的作用机制。方法以ICR小鼠（SPF级）作为研究对象。实验分为7组：毒热平注射液大、中、小剂量组及双黄连组、利巴韦林组、FM1感染模型组、正常组。流感病毒FM1感染小鼠造模连续7d后摘取肺组织,计算肺指数,采用RT—PCR法测定肺组织中INF—γmRNA、IL-4mRNA基因转录水平,采用Western blot法检测肺组织中CD40L蛋白表达水平。结果FM1感染模型组的肺指教明显高于正常组（P〈0．001）,利巴韦林组、双黄连组及毒热平注射液大、中、小剂量组与FM1感染模型组比较,肺指数均明显降低（P〈0．001或P〈0．01）,其中以毒热平中剂量组最好。毒热平注射液能降低FM1感染小鼠肺组织中IL-4mRNA基因转录（P〈0．001）,且与浓度成反向关系,但毒热平注射液组的IL-4mRNA基因转录水平明显高于利巴韦林组（P〈0．001）;毒热平注射液能增强FM1感染小鼠肺组织中IFN-γmRNA基因转录（P〈0．001）,且与浓度呈正向相关性,毒热平注射液大、中剂量组与利巴韦林组比较无统计学意义（P〉0．05）。毒热平注射液能抑制FM1感染小鼠肺组织中CD40L蛋白表达（P〈0．001）,抑制效果与浓度呈正相关性,但毒热平注射液中、小剂量组CD40L蛋白表达水平显著高于正常组与利巴韦林组（P〈0．05）。结论毒热平注射液体内能降低流感病毒FM1感染小鼠的肺指数,增强肺组织IFN-γmRNA基因转录,抑制IL-4mRNA基因转录,抑制流感病毒FM1感染小鼠肺组织CD40L蛋白的表达。     

毒热平注射液体外对小鼠T细胞功能及杀伤FM1感染靶细胞功能的影响

目的观察毒热平注射液体外对小鼠T细胞功能及杀伤流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)感染靶细胞的影响。方法用MTT法及双抗体夹心ELISA法检测毒热平注射液低、中、高(2.1、8.5、17.0μg/mL)剂量对正常小鼠、感染流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FM1)的脾细胞数目、产生干扰素-γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)、及T细胞杀伤FM1感染巨噬细胞Ana-1功能的影响。结果毒热平注射液体外能抑制刀豆蛋白A(Con A)诱导的正常小鼠脾细胞的增殖,抑制Th2型细胞因子IL-10的产生,促进Th1型细胞因子IFN-γ的产生;能保护FM1感染的小鼠脾细胞,并抑制其产生Th2型细胞因子IL-10,而使Th1型细胞因子IFN-γ水平保持在一定的范围内;还能直接增强T细胞对FM1感染的靶细胞(Ana-1)的杀伤能力(P0.05,P0.01)。结论毒热平注射液体外作用于小鼠T细胞,可增强有利于抗FM1感染的免疫应答。     

桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠IFN-γ及IL-4水平的影响

目的研究桂枝芍药知母汤对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法采用牛Ⅱ型胶原诱导的关节炎模型(Collagen-induced arthritis,CIA),灌胃给药21 d后观察大鼠体重变化、足肿胀度;采用ELISA法测定大鼠滑膜和血清中的白细胞介素4(IL-4)水平,小鼠巨噬细胞NO2-释放法测定大鼠滑膜和血清中干扰素γ(IFN-γ)活性。结果桂枝芍药知母汤能改善CIA大鼠体重变化,降低原发性和继发性足肿胀度,下调CIA大鼠滑膜和血清IFN-γ、IL-4水平。结论CIA大鼠滑膜中IFN-γ、IL-4水平均升高,血清中以IFN-γ升高为主。桂枝芍药知母汤抗风湿作用,可能通过下调CIA大鼠滑膜和血清IFN-γ、IL-4水平,从而调节Th1/Th2平衡。     

长期“束缚”对二乙基亚硝胺诱发肝癌大鼠免疫功能的影响

为观察束缚应激对二乙基亚硝胺诱发的化学性肝癌大鼠细胞免疫功能的影响,将大鼠随机分为4组:①正常对照组;②化学性肝癌组:以二乙基亚硝胺70 mg/kg灌胃,每周1次,连续8周;③束缚应激组:用绷带束缚大鼠四肢,并将其每只单独装入特制鼠笼限制活动8 h/d,连续18周;④肝癌加应激组:在给二乙基亚硝胺灌胃的同时进行束缚,方法同前。选取第9周、第14周和第19周三个时间点分批处死大鼠,测定各组大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和脾T细胞产生IFN-γ的能力。结果显示与单纯化学性肝癌组比较,叠加束缚应激的大鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和脾T细胞产生IFN-γ的能力在各时间点均显著降低(P值分别<0.01和<0.05),并且随着束缚时间延长和癌症进展其免疫功能逐渐下降。束缚应激组和化学性肝癌组与正常对照组比较,上述两项指标在各时间点也均有显著降低(P<0.01),并且以早期阶段(0-9周)下降最为显著。说明束缚应激能加重抑制二乙基亚硝胺诱发的化学性肝癌大鼠的细胞免疫功能,这可能是其促进肿瘤发生发展的重要机制。     

仲景合法方对BCG／LPS所致小鼠免疫性肝损伤免疫功能的影响

目的：探讨仲景合法方抗卡介苗（BCG）／脂多糖（LPS）免疫性肝损伤小鼠的免疫保护机制。方法：实验第1天小鼠尾静脉注射BCG 1mg，12天后再尾静脉注射LPS 10μg以制造免疫性肝损伤模型。造模同时，用药组给以仲景合法方不同剂量连续灌胃，连续12天。通过测定转氨酶、摘取胸腺称重，计算胸腺指数；MTT比色法检测T、B淋巴细胞增殖能力、绵羊红细胞吞噬法测定腹腔巨噬细胞吞噬能力、亚硝酸盐测定法测定NO诱生能力。生物活性法检测脾细胞产生Th1型细胞因子IFN-γ的能力，同时分离血清，用ELISA法检测Th2型细胞因子IL-4的含量。结果：仲景合法方有不同程度对抗BCB／LPS对胸腺的抑制作用，其中剂量效果最佳，而阳性对照药物联苯双酯则无效果。仲景合法方中剂量组则能对抗BCB／LPS的T、B淋巴细胞增殖作用，能够不同程度抑制T、B淋巴细胞转化、成熟。从巨噬细胞吞噬能力指标的检测中也发现，仲景合法方既能对抗BCB／LPS抑制巨噬细胞吞噬的作用，又能提高正常组的巨噬细胞吞噬能力，并促进NO的表达。仲景合法方降低损伤肝脏IFN-γ（Th1细胞因子）含量，也降低IL-4（Th2细胞因子）含量，使Th1／Th2平衡向Th1漂移回至正常。结论：仲景合法方对免疫性肝损伤小鼠具有保护作用，并能调节免疫功能。