痰热清注射剂对流感病毒FM1感染小鼠肺损伤治疗作用的研究

痰热清注射剂是由黄芩、熊胆粉、山羊角粉、金银花、连翘等五味药物组成的中药制剂，五药相配具有清热解毒、化痰解痉的功效。在临床治疗中，痰热清注射液主要用于治疗呼吸道感染性疾病，本实验采用流感病毒FM1感染小鼠作为模型，研究痰热清注射液对其肺损伤及免疫功能的影响并阐明其作用机制，为痰热清注射液的临床应用提供理论依据。痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠的死亡保护作用、血凝滴度、肺指数的影响：结果发现，痰热清注射液大、中、小治疗组小鼠对流感病毒FM1感染后的死亡保护率分别为（45．45、63．63、54．54％），模型对照组为（33．33％），与对照模型组比较，具有明显的保护作用，P值分别〈0．05；痰热清注射液对小鼠肺组织匀浆病毒血凝滴度明显降低，与流感病毒FM1感染模型组比较，差异显著，P〈0．05；痰热清注射液治疗组小鼠肺组织形态结构较为完整，偶可见少量淋巴细胞的浸润；痰热清注射液治疗组小鼠肺指数与模型组小鼠比较，显著降低，P〈0．05。     

白首乌甙对DEN诱发实验性肝癌大鼠肝细胞DNA含量和生长周期变化的影响

用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠发生实验性肝癌,用流式细胞仪分析自首乌甙对该模型大鼠肝细胞DNA含量和细胞生长周期的影响。实验结果表明治疗组大鼠与模型组比较,肝细胞内2倍体细胞明显增多,多倍体细胞明显减少;大鼠肝细胞处于G_0/G_1期的细胞显著增多,处于S期的细胞显著减少,说明白首乌甙可抑制肿瘤细胞DNA的合成,阻止肿瘤细胞分裂。     

大鼠溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型的研究

大鼠每天经一定时间限制活动和束绑后肢３周后,用５％醋酸灌注大鼠结肠造成溃疡性结肠炎肝郁脾虚证模型。大鼠分别在３、６、１２ｄ后处死检测实验指标。结果表明：模型组大鼠体重下降、粪便溏泄、肾上腺重量增加、胸腺重量下降;结肠粘膜在光镜下可见到大量炎细胞浸润、出血、水肿、粘膜溃疡等;大鼠脾Ｔ、Ｂ淋巴细胞增殖反应能力明显下降;全血粘度在４５、１８、１１２５ｓ－１切变率时比明显升高;造模１２ｄ后,模型组大鼠下丘脑单胺类激素如去甲肾上腺素、多巴胺、５－羟色胺显著升高;以上各项均比单纯醋酸诱导组改变明显。用疏肝健脾方药治疗后上述指标改善明显     

疏风宣肺方、解表清里方药对流感病毒小鼠TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达的影响

目的 观察疏风宣肺和解表清里方药对流感病毒亚甲型肺适应株（FM1）感染小鼠肺组织细胞Toll样受体7（Toll-like receptor 7, TLR7）、髓样分化因子88（myeloid differentiation factor 88, MyD88）、激活核因子Kappa B（nuclear factor-kappaB,NF-κB） mRNA及蛋白表达的影响。方法 选择108只小鼠,随机分为9组：正常组,模型组,磷酸奥司他韦胶囊组［西药组,2.5 g/（mL?d）］,疏风宣肺方（中药1）高、中、低剂量组［3.762、1.881、0.941 g/（kg?d）］,解表清里方（中药2）高、中、低剂量组［4.368、2.184、1.092 g/（kg?d）］,每组12只。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉,正常组以0.05 mL生理盐水滴鼻,其余各组以0.05 mL 4LD50流感病毒FM1稀释液滴鼻感染小鼠。造模成功率100%。感染后2 h灌胃给药。正常组、模型组灌胃蒸馏水, 0.2 mL/次,1次/d,连续干预4天。采用RT-PCR反应测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达,采用Western blot法测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达升高（P<0.01）;与模型组比较,西药组,中药1高、中、低剂量组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,中药2高、中剂量组TLR7、NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,中药2高、中剂量组MyD88 mRNA表达降低（P<0.05）,中药2中剂量组MyD88蛋白表达降低（P<0.05）,中药2低剂量组TLR7、NF-κB蛋白表达降低（P<0.05）。与西药组比较,中药1低剂量组MyD88蛋白表达降低（P<0.05）,中药1中、低剂量组NF-κB蛋白表达降低（P<0.01）;中药2高、中、低剂量组TLR7 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）,MyD88蛋白表达降低（P<0.01）,中药2低剂量组NF-κB mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。结论 疏风宣肺方各剂量和解表清里中剂量能通过调节MyD88依赖的TLR信号传导通路下调NF-κB活性,发挥抗流感病毒的作用。疏风宣肺方效果优于解表清里方。     

黄芩苷对流感病毒FM1肺炎小鼠肺损伤的保护研究

目的:研究黄芩苷对流感病毒FM1感染小鼠肺组织NO及氧化损伤的保护作用。方法:将96只ICR鼠随机分为正常对照组、模型组、利巴韦林组(100mg.kg-1.d-1),黄芩苷大剂量组(1 500mg.kg-1.d-1),黄芩苷中剂量组(750mg.kg-1.d-1)和黄芩苷小剂量组(375mg.kg-1.d-1),每组16只。用流感病毒亚甲型鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠,建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察小鼠肺指数、肺组织H-E染色切片病理形态变化,比色法检测肺组织匀浆总NO合成酶(NOS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量或活性。结果:黄芩苷中、小剂量组均能明显降低肺指数,减轻肺组织病变;显著下调肺匀浆总NO合成酶、丙二醛及上调谷胱甘肽过氧化物酶含量或活性(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩苷可通过抑制流感病毒性肺炎小鼠肺组织NO及过氧化物水平而发挥保护作用。     

清热解毒中药对流感病毒感染细胞NF-κB转录活性及TNF-α mRNA水平的影响

目的 观察清热解毒中药毒热平、痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FMI)感染人胚肾上皮细胞株HEK-293T细胞中报告基因NF-κB相对转录活性以及靶基因肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响,探讨清热解毒中药抗流感病毒FM1的作用机制.方法 采用四唑盐(MTT)比色法体外检测毒热平、痰热清及利巴韦林注射液对HEK-293T细胞增殖的影响.FM1感染HEK-293T细胞后,利用双荧光素酶顺式报告系统,以利巴韦林对照,检测不同药物组中报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶活性;RT-PCR方法检测各组细胞中TNF-αmRNA水平.结果 MTT结果显示,毒热平、痰热清、利巴韦林各药物组不影响细胞正常增殖(P＞0.05).报告基因结果显示,与细胞对照组相比,流感病毒FMl组细胞NF-κB转录活性显著增高(P＜0.01),与FM1病毒组相比,毒热平1、10、100 mg/L,痰热清1/300、1/200、1/100倍稀释药液,利巴韦林50 mg/L均可不同程度下调NF-κB的转录活性(P＜0.01).RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,FM1病毒组的TNF-αmRNA表达明显增高(P＜0.05),各药物组与FM1病毒组相比,TNF-αmRNA表达量明显降低(P＜0.01).结论 毒热平、痰热清治疗流感病毒的作用机制之一,可能是通过下调转录因子NF-κB的转录活性,从而影响下游靶基因TNF-α的表达,减少肺损伤和相应炎症反应.     

黄芩苷在流感病毒致肺纤维化早期进展中的作用机制

目的 探索黄芩苷在流感病毒感染致肺纤维化早期进展中的分子机制.方法 制备甲型流感病毒性肺炎小鼠模型,用不同剂量黄芩苷溶液灌胃治疗后,观察肺指数、肺组织切片Masson染色观察纤维化程度;采用RT-PCR测定肺组织p38MARK mRNA表达,采用Western-blot测定肺组织磷酸化p38MAPK,磷酸化NF-κB-p65及TGF-β1 蛋白表达.结果 黄芩苷187.5、375 mg·kg-1剂量均能明显抑制肺指数及肺组织纤维蛋白的分泌;明显降低肺组织p38MAPK mRNA和蛋白表达(P<0.01);明显抑制磷酸化NF-κB-p65及TGF-β1 蛋白表达(P<0.05).结论 黄芩苷抗流感病毒感染作用可能与其在肺炎致肺纤维化早期抑制纤维蛋白形成相关.     

利用生物芯片技术检测人参皂苷Rg1对小鼠树突状细胞功能调控相关基因表达的影响

目的:利用基因芯片技术检测人参皂苷Rg1对小鼠骨髓来源DC细胞功能调控相关基因表达的影响.方法:分离C57小鼠骨髓细胞,经GM-CSF、IL-4体外诱导培养6天的未成熟DC细胞(iDC)经不同因素处理并分为:对照组(Ⅰ)、人参皂苷Rg1组(Ⅱ)、内毒素(LPS)组(Ⅲ)、Rg1+LPS组(Ⅳ),24小时后收集各组细胞,抽提总RNA,利用树突状和抗原呈递细胞基因芯片对细胞功能相关基因进行检测.结果:(Ⅱ/Ⅰ)上调≥2倍基因23个,下调≥2倍基因45个;(Ⅲ/Ⅰ)上调≥2倍基因15个,下调≥2倍基因47个;(Ⅳ/Ⅱ)上调≥2倍基因35个,下调≥2倍基因15个;(Ⅳ/Ⅲ)上调≥2倍基因37个,下调≥2基因10个.这些基因功能主要涉及细胞因子分泌及其受体表达、抗原摄取、抗原提呈、细胞表面受体、信号传导.结论:人参皂苷Rg1对DC作用涉及多个基因的表达调控,这些基因控制并影响着DC功能、分化和成熟,为进一步寻找药物靶点提供了线索.     

白何首乌对小鼠免疫功能调整作用的研究(摘要)

白何首乌原植物为萝藦科耳叶牛皮消(Cynanc-hum auriculatum Royle ex Wight)之块根。中医学认为它具有补肝肾、益精血、壮筋骨、止心痛等功效。据文献报道,它具有治疗高胆固醇血症和抗菌、抗寒、抗衰老的作用。本文报告白何首乌水可溶清膏和白何首乌提取的粗 C_(21)甾体酯甙对正常小鼠空斑形成细胞(PFC),血球     

清肺注射液不同配伍体外对流感病毒增殖的影响

[目的]观察复方清肺注射液经正交设计确定的16组不同配伍制剂对流感病毒亚甲型鼠肺适应株[A/FM/1/47(H1N1)]增殖的影响。[方法]采用结晶紫染色法观察清肺注射液16组不同配伍制剂对流感病毒FM1株的体外抑制作用,同时以利巴韦林和双黄连粉针为阳性对照药。[结果]清肺注射液的16种不同制剂中第9、13、14、15和16组制剂对流感病毒FM1株具有综合抑制作用,能阻止病毒吸附于狗肾细胞株(MDCK),具有直接杀病毒作用,且具有抑制细胞内病毒复制的作用。制剂1无抗病毒作用,制剂2～制剂4不能直接杀病毒,其余各组制剂仅在高浓度(2-1～2-2)时抑制病毒。[结论]清肺注射液的第9、13、14、15和16组制剂具有明确的抗流感病毒作用。