小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体外对树突状细胞的作用

 目的 构建小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒表达载体，并在体外观察其对小鼠骨髓源性树突状细胞（dendritic cell，DC）的作用。方法 针对已经筛选确定的CD80基因RNA干扰有效靶序列，合成靶序列的双链DNA，接入pGCL-GFP载体，再与pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞，包装产生慢病毒，以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度；同法构建出CD86基因RNA干扰慢病毒载体。慢病毒感染体外培养的DC，通过荧光显微镜检测感染效率，Annexin V/PI双染色法检测感染细胞凋亡和坏死情况，流式细胞仪检测CD80和CD86的表达情况。结果 PCR和测序证实，pGCL-CD80shRNA和pGCL-CD86shRNA慢病毒载体构建正确，病毒滴度均达2×107TU/mL，适合感染DC的MOI值为20，此时慢病毒对DC具有低毒性，感染效率为85.42%。CD80和CD86表达的抑制率分别为82.05% 和77.78%。结论 成功构建出小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒载体，其有明显抑制DC表面CD80和CD86的表达，这为移植物排斥提供了新的治疗手段。     

胃肠道间质瘤预后因素分析

目的 探讨影响胃肠道间质肿瘤(GIST)预后的因素.方法 收集1999年11月至2006年12月于复旦大学附属华山医院住院手术治疗并经病理确诊为GIST的病例85例,回顾性分析性别、年龄、肿瘤部位、手术方式、首诊转移、淋巴结清扫及Flecther分级等因素对患者预后的影响.结果 本组患者的1年、3年、5年生存率分别为94%、60%、57%.单因素分析显示,GIST患者的预后与肿瘤原发部位、手术方式、Fletcher分级(肿瘤大小和核分裂数)以及有无首诊转移有关(P＜0.05),而与性别、年龄及是否行淋巴结清扫无关.多因素分析显示,有无首诊转移是影响预后的独立因素(P=0.020,β=4.226).结论 根治性手术仍然是目前原发GIST的首选治疗,首诊转移是影响预后的独立危险因素,故早期发现、早期诊断、早期手术治疗对GIST的预后显得尤为重要.同时,Fletcher分级也是评估GIST的有效而简便的方法之一.     

外科手术的风险预测与临床评价

外科手术的风险与手术的时机、患者的生理病理状态以及施术者的素质有密切的关系。传统观点认为,严重的临床合并症、急性生理紊乱及手术创伤大小是决定手术风险的重要因素。目前已建立不少评分系统,常用的达18种之多[1],以评估外科患者的并发症、死亡率和影响预后的危机因素,但各有其优点和不足之处,就应用范围而论APACHEⅡ和POSSUM评分法较为普遍所接受。现介绍几种习用的外科手术风险预测评分系统,并将其应用价值作简要评价。1.美国麻醉学家协会分级标准(ASA):自1963年以来ASA分级已广泛应用于临床,根据患者的病史和体检分成5级:…     

胆囊癌中骨桥蛋白和CD44v6的表达及其意义

目的 了解胆囊癌组织中骨桥蛋白和CD44v6的表达及其意义.方法 用免疫组化法检测10例正常胆囊组织,10例胆囊腺瘤和38例胆囊癌组织中骨桥蛋白和CD44v6的表达水平,并分析骨桥蛋白和CD44v6表达的相关性.结果 在胆囊癌组织中,骨桥蛋白和CD44v6的表达水平显著高于正常胆囊组织和胆囊腺瘤组织的表达水平（P＜0.05）,在有转移的胆囊癌中骨桥蛋白的表达水平显著高于无转移的胆囊癌组织（P＜0.01）.胆囊癌组织中骨桥蛋白的表达与CD44v6的表达具有一致性（P＜0.05）.结论 骨桥蛋白-CD44v6轴在胆囊癌的转移中可能有重要作用.     

腹腔多房棘球蚴病一例

病例:女,54岁,江苏省丹阳珥陵镇农民.因右下腹肿块4年入院.肿块呈逐渐增大,1个月前于劳累后开始出现右下腹阵发性隐痛,无发热、腹泻等症状.病人长期从事农业生产,无疫区接触史,无啮齿类动物及狗的接触史.     

胆固醇结石病人与正常人胆囊胆汁的蛋白质表达谱比较分析

目的 比较分析胆日同醇结石病人与正常人胆囊胆汁蛋白表达谱的差异,为阐明胆石成因提供实验依据.方法 提取胆固醇结石病人和正常人胆囊胆汁总蛋白,构建相应的双向电泳蛋白质表达谱,应用lmageMaster图像分析软件获得差异蛋白点信息.结果 胆固醇结石病人与正常人胆囊胆汁总蛋白浓度分别为(6.4824±0.3403)mg/ml和(2.3156±0.3064)mg/ml(P<0.01).两组组内蛋白质平均匹配点数分别为465±71和407±85,平均匹配率为71.70%和68.38%,组间269个蛋白质点相互匹配,匹配率为61.70%.胆固醇结石组蛋白表达谱显著差异点34个,16个表达上调,18个表达下调.结论 初步建立了胆固醇结石病人和正常人胆囊胆汁蛋白表达谱.发现两者存在差异蛋白质点,为筛选胆石形成关键调控子提供基础.     

钙网蛋白在胆固醇结石患者胆囊中的表达及意义

目的 探讨钙网蛋白(calreticulin,CRT)在胆固醇结石患者胆囊组织和胆汁中表达及临床意义.方法 利用生物质谱技术鉴定胆固醇结石患者与正常对照组胆囊胆汁的差异表达的蛋白质,通过免疫组织化学和Western blotting验证CRT在胆固醇结石患者胆囊组织和胆汁中表达结果.结果 比较蛋白质组学结果显示胆固醇结石患者组CRT表达上调,免疫组织化学和免疫印迹法进一步证实了CRT在胆囊组织及胆汁中高表达.结论 CRT在胆固醇结石患者组的高表达,可能与胆固醇结石的发生、发展及预后有关.     

RNA干扰阻断受者树突状细胞表面CD80/CD86通过诱导T细胞凋亡调控T细胞低反应

Background Despite extensive research, the mechanisms of immature dendritic cells (DCs) induced immune hyporesponsiveness remain incomplete. Methods Recipient DCs from C3H mouse bone marrow cells were incubated with donor antigen from splenic lymphocyte of C57BL/6 mouse, these DCs were transfected with CD80/86 specific siRNA using lentiviral vectors. Flow cytometry was used to evaluate expression of CD80/86 on the antigen-pulsed recipient DCs. Immune regulatory activity was examined by mixed lymphocyte reaction, in which irradiated DCs were cultured with C3H spleen T cells. After the reaction, IL-2, IL-4, IL-10 and INF-γ levels of mixed lymphocyte reaction culture supernatant were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. The apoptotic T lymphocytes were identified by Annexin V and CD3 staining. Results There was a significant inhibition of CD80/86 expression in DCs transfected with CD80/86 lentiviral vectors compared with the control groups (P <0.05), indicating the specificity of RNA interference. Enzyme-linked immunosorbent assay results showed a significant reduction of INF-γ, IL-2 and IL-10 in the CD80/86 lentivirus transfected group compared to the control groups (P <0.05). There was no significant difference in IL-4 levels between the groups (P >0.05). We also showed that CD80/86 low DCs loaded with alloantigen 1) stimulated low T cell proliferative responses via the indirect recognition pathway and 2) enhanced apoptotic activity (P <0.05) in co-cultured T cells. Conclusions Lentiviral vector transfection can effectively and specifically knock down target genes in DCs. The CD80/86 low DCs may show tolerogenic activity via induction of T-cell apoptosis, thereby modulating activity of recipient-derived DCs. The use of this approach may potentially be clinically applicable.     

老年患者腹腔镜结直肠癌手术的研究

目的探讨老年结直肠癌患者行腹腔镜手术治疗的安全性、根治性、对免疫功能的影响、费用及远期效果。方法分析总结30例腹腔镜组及33例开腹组结直肠癌老年患者的围手术期特点、费用及近期远期疗效。结果腹腔镜组与开腹组肿瘤大小、清扫淋巴结数、病理标本分期无统计学差异(P>0.05),两组病例所有切缘均为阴性。腹腔镜组在平均手术用时、术中出血量、胃肠道功能恢复时间、CD4+/CD8+比值等方面均优于开腹组(P<0.05),并且腹腔镜组住院时间短;而开腹组住院费用低。5年内随访病例61例,腹腔镜手术组发生肿瘤细胞转移的人数与开腹手术组相似。结论对年龄大于70岁的合适的老年结直肠癌患者采用腹腔镜手术是一个优选的外科治疗方法。     

大肠癌脑转移的临床特征及其手术治疗

目的 分析大肠癌脑转移的临床特征及其手术治疗转归. 方法回顾性分析手术治疗的大肠癌伴脑转移28例患者的临床资料,统计数据采用单因素Log-Rank分析和多因素Cox回归分析法.结果 大肠癌继发脑转移的中位年龄为57(41～75)岁,原发肿瘤与转移瘤间隔的中位时间为13.5个月,其中合并颅外(肺、肝、骨)转移占61%(17/28),仅有脑转移的占39%(11/28).脑转移瘤主要表现为头痛、呕吐等颅内压升高征候群和偏瘫、下肢乏力、失语等定位症状以及癫痫等,颅内转移瘤以单发病灶为多见,占82%(23/28),位于幕上(枕叶、顶叶、额叶)者占57%(16/28),位于幕下(小脑)者占43%(12/28);转移性脑瘤手术切除后中位生存时间为9.4个月,1年生存率为28.9%,5年生存率为7.1%.多因素分析提示颅内单发病灶转移(χ2=7.35,P<0.05)和无颅外其他部位转移(χ2=6.47,P<0.05)是大肠癌脑转移预后的独立影响因素.28例均接受手术切除和多学科协作治疗,无手术死亡和出血及再手术病例.结论 大肠癌脑转移总体预后欠佳,手术切除脑转移病灶可延长部分患者的存活时间.