基于胆汁泡相糖蛋白特征而研制诊断胆结石ELISA药盒的可行性分析

目的:分析胆汁泡相糖蛋白的特征并评估其ELISA药盒临床应用的可行性。方法:应用凝集素探针介导的点印迹法分析泡蛋白糖链的组成与结构,利用酶解方法测定泡蛋白各组分的构成,并分析其氨基酸组成。利用Westernblot法分析胆汁与血清泡蛋白的同源性,根据ELISAkit测定泡蛋白的含量分布,并以ROC曲线判别ELISAkit的临床应用价值。结果:化学分析泡蛋白由多肽和寡糖组成,其中多肽分子量约为21u,糖链约占总蛋白含量的37.3%,为核心岩藻糖丰富的多天线复杂型聚糖。泡蛋白具胆汁与血清分布两相性,胆固醇性结石组胆囊胆汁和血清33.5u泡蛋白含量分别为(213.4±70.1)μg/ml、(179.8±97.9)μg/ml,明显高于胆色素性结石症组和正常对照组(P<0.05),而后两者间差异无显著性(P>0.05)。ELISAkit判断胆固醇性结石的胆汁相敏感度和特异度分别为85%和90%,而血清相为61.7%和93.3%。结论:胆汁泡蛋白是一种新认识的胆结石促成核因子,其在不同人群中具有表达谱的异质性,ELISAkit辅助诊断胆石症具有一定的临床应用价值,但尚需更多病例的积累和验证。     

快速康复理念在外科围手术期中的应用

快速康复外科(enhanced recovery after surgery,ERAS)可减轻患者心理和生理的创伤应激反应,减少并发症,缩短患者住院时间,降低再入院、死亡风险和医疗费用,是临床治疗模式的重大突破.ERAS主要由术前准备、麻醉与镇痛、外科干预及术后康复四部分组成.20年来,ERAS在国内外已经逐渐拓展至普外科、泌尿外科、心胸外科、妇产科等各个领域,并取得了卓越成效.目前,ERAS在国内尚无统一的治疗规范,实际应用中也有许多因素限制其发展,其中传统习惯亦是导致其推广障碍的重要原因.通过进一步摸索进行转化应用,有望形成具有中国特色的ERAS途径.     

胆汁泡相与微胶粒相的蛋白质表达谱对比观察

目的 采用比较蛋白质组学技术研究胆固醇结石患者胆囊汁汁的胆汁泡相与微胶粒相的蛋白质表达谱的差异,为探索胆石成因提供实验依据.方法 密度梯度超速离心法制备胆汁泡相和微胶粒相,提取蛋白,构建相应的蛋白质表达谱,ImageMaster图像分析软件获得差异蛋白点信息,质谱鉴定差异表达蛋白.结果 胆汁泡相与微胶粒相总蛋门浓度分别为(1.5358 4±0.0682)mg/ml、(7.1222 4±0.2022)mg/ml(P<0.01).两组组内蛋白质平均匹配点数分别为120 4±24和198 4±37,组间72 4±16个蛋白质点相互匹配,匹配率为45.30%.胆汁泡相与微胶粒相成功鉴定出差异蛋白质点8个,泡相中6个点表达上调,2个点表达下调.视黄醇结合蛋白(RBP)和白蛋白(HSA)丰度差异为免疫印迹法证实.结论 初步建立了胆同醇结石患者胆囊胆汁的胆汁泡相和微胶粒相蛋白表达谱,分析、鉴定了差异蛋白点,为筛选胆固醇结石形成关键调控子提供依据.     

促成核泡相糖蛋白的分离、纯化及理化性质研究

目的提纯胆汁泡相糖蛋白并研究其理化性质。方法应用超速离心法结合高效液相层析(HPLC)分离纯化胆汁泡相糖蛋白,体外观察成核活性,并检测泡相糖蛋白的相对分子质量和化学组成。结果胆汁泡相糖蛋白Mr约为33500,具有较强的促成核功能,成核活性达0．31。泡相糖蛋白由多肽和寡糖组成,糖-肽键为N-连接方式,其中多肽Mr约为21000,含153个氨基酸,包括97个极性氨基酸和56个非极性氨基酸。糖链约占总蛋白含量的37．3％,为核心岩藻糖丰富的多天线复杂型聚糖。肽链N-末端氨基酸序列为H2N-天冬-天冬酰胺-丝-谷氨酰胺-组-精-酪-缬-苯丙-异亮氨酸。结论胆汁泡相糖蛋白是一种新的促成核活性因子,在胆固醇性结石的早期发生阶段可能起重要作用。     

大肠癌脑转移的临床特征及其手术治疗

目的 分析大肠癌脑转移的临床特征及其手术治疗转归. 方法回顾性分析手术治疗的大肠癌伴脑转移28例患者的临床资料,统计数据采用单因素Log-Rank分析和多因素Cox回归分析法.结果 大肠癌继发脑转移的中位年龄为57(41～75)岁,原发肿瘤与转移瘤间隔的中位时间为13.5个月,其中合并颅外(肺、肝、骨)转移占61%(17/28),仅有脑转移的占39%(11/28).脑转移瘤主要表现为头痛、呕吐等颅内压升高征候群和偏瘫、下肢乏力、失语等定位症状以及癫痫等,颅内转移瘤以单发病灶为多见,占82%(23/28),位于幕上(枕叶、顶叶、额叶)者占57%(16/28),位于幕下(小脑)者占43%(12/28);转移性脑瘤手术切除后中位生存时间为9.4个月,1年生存率为28.9%,5年生存率为7.1%.多因素分析提示颅内单发病灶转移(χ2=7.35,P<0.05)和无颅外其他部位转移(χ2=6.47,P<0.05)是大肠癌脑转移预后的独立影响因素.28例均接受手术切除和多学科协作治疗,无手术死亡和出血及再手术病例.结论 大肠癌脑转移总体预后欠佳,手术切除脑转移病灶可延长部分患者的存活时间.     

33.5KDa胆汁泡蛋白促成核活性及其对泡形态学影响的研究

目的探讨３３．５ｋＤａ泡蛋白在胆固醇成核过程中的作用。方法利用超速离心技术结合ＰＡＧＥ电泳及区带定位法制备３３．５ｋＤａ泡蛋白；并将其加入Ｓｍａｌ模拟胆汁及综合模拟胆汁作为试验组，相应地以人体白蛋白为对照组，用偏光显微镜观察胆固醇成核时间，在透射电镜下观察模拟胆汁泡的大小、形态及数量。结果Ｓｍａｌ试验组成核时间为３．８３±０．３１天，对照组为１２．３３±０．５６天（Ｐ＜０．００１）；综合试验组平均成核时间为３．１７±０．１７天，而对照组长达１０．３３±０．２１天（Ｐ＜０．００１）。随着时间的推移，Ｓｍａｌ试验组及综合试验组泡逐渐增大、聚集、融合，最终形成巨大复层泡。两组均较相应的对照组变化显著（Ｐ＜０．０５）。结论３３．５ｋＤａ泡蛋白具有很强的促进泡形成、聚集、融合及胆固醇单水结晶析出的作用（成核活性约为０．３１０）。     

胆石症病人和正常人胆汁泡蛋白成核活性及糖链结构的比较

目的 比较胆石症病人和正常人胆汁泡蛋白促成核活性,并分析其糖链结构特点.方法 进行胆固醇结晶生长试验,检测胆石症病人和正常人相对分子质量为33 500的泡蛋白成核时间,并计算其促成核活性.采用HRP凝集素探针介导的Western-Blot印迹法分析不同来源泡蛋白糖链的结构特点.结果 胆石症病人来源的33 500泡蛋白具有明显的促成核活性,其平均成核时间为(3.75±0.66)d,成核活性为0.303±0.075;而正常人来源者则仅具较弱的促成核活性,平均成核时间为(8.38±0.86)d,成核活性为0.677±0.086,两者比较,差异显著(P＜0.05).胆石症病人来源的33 500泡蛋白DSA(+)、ConA(-),属于复杂型多天线聚糖;而正常人来源者为ConA(+)、DSA(-)的二天线糖链.结论 胆石症病人来源的33 500泡蛋白较正常人来源者具有更强的促成核活性,两者糖链结构特点亦有明显不同,提示泡蛋白促成核活性的改变可能由于其糖链结构特点的变化引起.     

胆宁片对胆汁33.5kDa泡蛋白的影响

目的;探讨中药胆宁片预防胆固醇结石形成的作用机制。方法：建立胆汁成核因子（33．5kDa泡蛋白）ELISA快速检测法,监测正常人群组,胆固醇及胆色素结石组患者血清及胆汁中33．5kDa泡蛋白浓度,将另一组胆醇结石患者（n=45)按随机序贯原则分为胆宁片治疗组,胆酸钠治疗组及对照组,观察药物对33．5kDa泡蛋白浓度的影响。结果：胆固醇结石患者血液及胆汁中33．5kDa泡蛋白含量显著高于正常人群和胆色素结石组,胆宁片治疗2w后,血清及胆汁中33．5kDa泡蛋白明显降低（P＜0．05）,结论：胆宁片能降低血清和胆汁中的成核因子（33．5kDa泡蛋白）的含量,改变了胆汁中胆固醇的成石趋势。     

比较基因组杂交法筛选乳头状甲状腺癌基因畸变

尽管甲状腺癌 ,包括最常见的乳头状甲状腺癌(PTC) ,起源于相同的祖细胞 ,但其临床生物学行为各异 ,可表现为相对无毒性分化良好的肿瘤或严重致命性间变型。人们试图通过分析肿瘤的遗传互补来解释PTC临床生物学行为的多样性 ,但往往囿于 PTC遗传学基础知识的缺乏。以往的整合体丢失分析和细胞遗传学测定方法则分别需要肿瘤潜在畸变位点的已有信息和肿瘤细胞的培养而难以开展。比较基因组杂交法 (comparative genomic hybridization,CGH)的问世 ,极大地提高了筛选实体瘤基因畸变的能力 ,可同时检测遗传信息的增加、丢失和扩增 ,是一种理…     

结肠穿孔的急诊处理（附29例报告）

目的：探讨结肠穿孔的诊断和治疗方法。方法：回顾性分析我院1990年1月～2000年5月收治的29例结肠穿孔,探讨急诊处理的方法。结果：23例术前作腹腔穿刺,其中抽得粪样腹水18例,血性腹水5例,穿刺阳性率达100%。20例术前摄腹部X线平片,见膈下游离气体15例,阳性率为75%。29例均急诊手术,其中I期手术10例（穿孔修补 引流术4例,右半结肠切除吻合 引流术6例）,II期手术19例（穿孔修补 双管造口 引流术7例,穿孔处双管造口 引流术11例,Hart-manns术 引流术1例）。死亡6例,死亡率为20.7%。结论：腹腔穿刺和腹部X线平片应作为术前诊断的常规。及时诊断,尽早手术,手术以简单为宜,有利于减少术后并发症,降低死亡率。