脐带血巨核祖细胞的体外扩增

目的联合血小板生成素(TPO)、白细胞介素-11(IL-11)和肝素用脐带血CD34 细胞定向扩增巨核祖细胞。方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34 细胞,用TPO、IL-11和肝素定向扩增巨核祖细胞,巨核祖细胞集落分析(CFU-MK)测定巨核祖细胞扩增倍数,流式细胞术检测巨核祖细胞分化过程中不同细胞组群(CD34 、CD41a 、CD61 、CD34 CD41a 和CD41a CD61 )的变化,免疫组织化学染色(CD41a)和透射电镜观察巨核细胞形态及趟微结构,血小板体外活化实验及非肥胖性糖尿病／严重联合免疫缺陷鼠异种体内移植实验评价扩增的巨核祖细胞功能。     

突变型人胰岛素原基因的克隆及其腺病毒载体的构建

目的:构建含有定点突变的人胰岛素原基因的腺病毒表达载体.方法:首先利用RT-PCR方法从正常流产胎儿胰腺组织获取野生型人胰岛素原eDNA;然后通过重叠延伸PCR方法在人胰岛素原cDNA上产生2个突变位点,使突变的eDNA编码的蛋白质含弗林蛋白酶的识别位点,该突变型胰岛素原cDNA片段命名为INS-M2;最后将INS-M2亚克隆至腺病毒载体系统的穿梭载体的多克隆位点上,并与骨架载体共转染至细菌内,通过细菌内同源重组得到重组载体.结果:HindⅢ和Xho I酶切、Poc I酶切及测序均证实载体pAd-INS-M2构建成功.结论:构建的含定点突变人胰岛素原基因腺病毒载体pAd-INS-M2为进一步转染非胰岛β细胞,对糖尿病进行基因治疗奠定了基础.     

肘管综合征2例报告

例１男性,１８岁,在进行射击训练５ｄ后,自感左肘部困胀,左前臂麻木无力,左手环、小指为甚,不能伸直、握拳,抓物无力。查体：左肘部无红肿及畸形,尺神经沟处有压痛并向前臂尺侧放射至小指尖,左前臂尺侧,小指、环指尺侧半痛觉减退,手呈爪状畸形,尺侧腕屈肌、骨...     

血管新生与血液系统恶性肿瘤

血管新生（Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）是指通过内皮细胞的增殖和迁移,从先前存在的血管处以发芽或非发芽（又称套迭）的形式生成新的毛细血管［１］,是近年来新兴的一个医学研究领域,几乎涉及到医学领域的各个学科。血管新生受一系列刺激和抑制因子调节,这些因子控制着内皮细胞的增殖和迁移,对血管新生具有调节作用［２＿４］。其中主要的血管新生剌激因子有碱性纤维蛋白生长因子（ｂＦＧＦ）和血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）,主要的血管新生抑制因子有血管抑素（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ）、内皮抑素（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）、血小板第４…     

粒细胞集落刺激因子动员骨髓干细胞治疗大鼠缺血性脑梗死

目的: 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠缺血性脑梗死的治疗作用。方法:采用线栓法制作大鼠缺血性脑梗死模型,1 h后腹腔注射G-CSF 60 μg/kg 。TTC、HE染色及免疫组化检测脑梗死灶体积、病理改变及CD34阳性细胞浸润情况。结果:G-CSF治疗组大鼠脑梗死灶体积明显小于对照组(P<0.01);其病理损伤程度较对照组轻;脑梗死部位出现CD34阳性单个核细胞浸润,并有CD34阳性呈锥状并且带有突起的神经样细胞生长,对照组未发现CD34阳性细胞。结论: G-CSF可减轻大鼠缺血性脑梗死程度,减少脑梗死体积,其机理可能是G-CSF对缺血神经元具有保护作用,并动员自体骨髓干细胞,促进脑组织的再生与修复。     

抗CD44抗体单链抗体构建及表达

目的构建抗 CD44抗体的单链抗体(anti-CD44-ScFv),为进一步应用基因工程抗体研究打下基础。方法从分泌抗 CD44单克隆抗体的杂交瘤细胞系 HII44a 中提取总 RNA,经 RT-PCR 分离获得了轻、重链可变区(V_L、V_H)基因,用连接肽将其构建成具有 V_L-Linker-V_H 结构的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到分泌型蛋白表达载体 PET22b( )中进行表达。结果经测序表明,V_H、V_L 及 Linker 的序列正确。ScFv 在大肠杆菌中的表达量约占菌体总蛋白的16%。能够特异性与 CD44抗原结合。结论成功构建抗 CD44抗体单链抗体,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础。     

缺氧诱导因子-1与细胞凋亡

缺氧诱导因子 1(HIF -1)是一种主要由缺氧诱导细胞产生的重要的转录因子。HIF- 1的表达水平与糖酵解、细胞周期阻滞、细胞生存与增殖、血管新生、血管舒缩、红细胞生成、肿瘤生长,转移以及肿瘤多药耐药等许多生命活动密切相关。HIF- 1通过调控凋亡相关基因的转录在促细胞凋亡和抗细胞凋亡中都发挥着重要的作用。     

常氧培养与低氧培养肺间充质细胞凋亡的比较

背景:小鼠间充质细胞在体外培养扩增困难,细胞凋亡是否是其原因之一,目前未知.目的:观察常氧和低氧条件下,小鼠肺间充质细胞的凋亡率是否有差别.方法:用组织块培养法获得 C57BL/6J 雄性小鼠肺间充质细胞,分别在常氧(体积分数 20%氧)和低氧(体积分数 5%的氧)条件下培养,观察细胞内活性氧水平、凋亡率和超微结构的变化.结果与结论:体积分数为 5%和 20%氧气培养的细胞随代数的增加造血细胞均逐渐减少.体积分数20%氧气培养的小鼠肺间充质细胞内的活性氧水平明显高于体积分数 5%氧气培养的细胞.体积分数 20%氧气培养的肺间充质细胞的凋亡现象较常见,体积分数 5%氧气培养的细胞凋亡现象较少见.提示常氧培养条件下,细胞的凋亡率增加,降低氧浓度可减少细胞的凋亡率.     

1.2干细胞技术与组织器官修复再造

干细胞(stem cells)对于大多数人来说还是一个陌生的名词,由于干细胞功能的阐明及其应用技术的进展使科学家和医生开始真正认识到,许多危及生命健康的难治性疾病的治疗需要从生命的源头-干细胞直接入手.     

人骨髓巨核系祖细胞(CFU-M)体外半固体培养的方法探讨

为了探索一种较理想的人骨髓巨核系祖细胞CFU-M的体外半固体培养方法,本文对血浆凝块法和甲基纤维素法进行比较,证实血浆凝块法培养的CFU-M开始出现于第5天,集落高峰在第10～12天,消失于第16天。甲基纤维素法CFU-M开始出现于第5～6天,集落高峰在第14～16天,集落消失在20天以后。前者集落呈弥散状或紧密状不一,可原位固定染色计数,标本易保存;后者集落呈紧密状,不能原位固定,可在倒置镜下根据细胞形状计数,或吸出细胞涂片染色,培养皿不能保存。当两种培养体系中加入相同的条件培养基时,CFU-M数无显著性差别。本文还介绍一种改良的血浆凝块法,该方法以PHA-LCM为条件培养基,并用抗血小板糖蛋白单抗和ABC染色法来鉴别生长的巨核细胞。此法集落产率高,鉴别指标客观特异,不需要荧光显微镜。14例正常骨髓标本的CFU-M的产率为136.4～42.5/5×10_5((?)±SD)。当培养体系中加入不同的条件培养基CFU-M的产率不同,其中以PHA-TCM所得CFU-M数最高。本文结果提示:用PHA-TCM作条件培养基的血浆凝块法结合用抗血小板GPⅡa单抗的ABC染色,是研究CFU-M体外增殖分化和探讨血小板性疾病发病机制的理想方法。